加味吴茱萸汤对高糖高脂及饮酒致大鼠高血压和血管内皮功能的影响

吴浩杰, 周瑞堂, 倪 宁

(1. 西安市第一医院心内科, 西安 710002; 2. 西安市第一医院中医科, 西安 710002 3. 西安交通大学医院内科, 西安 710049)

高血压(hypertension)是临床上慢性疾病中较为常见的一种，也是多种疾病的主要危险因素。根据《中国心血管病报告2016》[1]概要显示，我国目前已发现高血压患者约2.7亿例。随着社会经济发展，人们的生活习惯也随之发生改变，高血压患者越来越多，且发病人群越来越趋向年轻[2]。除严重损害和威胁人们的身体健康外，从中冠心病的药物治疗。高血压还会引发各种严重的并发症，例如脑卒中、冠心病、慢性肾脏疾病以及视网膜病变等等[3]。高血压疾病的发生发展机制较为复杂，其中血管内皮功能的紊乱与高血压发病密切相关[4]。有研究证实，加味吴茱萸(Tetradium ruticarpum)汤对自发性高血压大鼠的血压具有一定的调节作用[5]。本研究初步探讨加味吴茱萸汤对高糖高脂饮酒致大鼠高血压及血管内皮功能的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SPF级雄性SD大鼠100只，8周龄，体质量140～160 g，由长沙天勤有限责任公司[SCXK(湘)2019-0023]提供，饲养于屏障设施[SYXK(湘)2019-0013]内。每笼5只，正常饲料适应性喂养，自由饮水，实验前观察1周，各大鼠活动、进食、粪便以及一般情况均无异常变化后进行实验。

1.2 主要药品、试剂和仪器

加味吴茱萸汤由西安市第一医院药剂科调配、煎制，基本方组成：吴茱萸60g，石决明60 g，天麻60 g，黄芪60 g，夏枯草60 g，当归60 g，人参60 g，大枣45 g，丹参50 g，甘草50 g。按此方比例称取药物，加水煎煮2次，每1次加12倍量蒸馏水。每次煎煮1 h，取滤液，加工减压浓缩至相对密度1.25～1.30(70 ℃)备用(后面治疗组汤药每毫升相当于0.5 g原药)。红星二锅头酒(乙醇体积分数52%，北京红星股份有限公司)。细胞间黏附分子-1(ICAM-1)(CD54)免疫组织化学试剂盒购自武汉博士德公司；125I内皮缩血管肽-1(125I-ET-1)放射免疫试剂盒购自北京北方生物技术研究所；一氧化氮(NO)测试盒(一步法)购自南京赛维尔生物有限公司。内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)酶联免疫吸附试验试剂盒购自中国上海英展机电企业有限公司(EXCELL)。Medlab大鼠无创血压测量系统购自中国南京卡尔文生物科技有限公司。高糖高脂饲料购自中国医学科学院实验动物研究所(基础饲料68.8%，蔗糖10.0%，蛋黄粉10.0%，猪油10.0%，胆固醇1.0%，胆盐0.2%)。

1.3 模型建立及实验方法

100只雄性SD大鼠适应性喂养后，20只大鼠作为正常对照组，给予普通饲料，自由饮水。其余80只大鼠给予高糖高脂饲料及梯度饮酒以制备高血压大鼠模型[6]：大鼠给予高糖高脂饲料，同时给予勾兑成乙醇体积分数为5%的白酒，连续1周后将酒的乙醇体积分数提升为10%，以后每隔1周将乙醇体积分数提升2%，直到18%。然后每周将乙醇体积分数提升1%，直到22%，再连续喂养至17周完成造模。造模17周后，通过无创血压测量系统连续5 d且同一时间点分别测量血压，收缩压(SBP)持续高于160 mmHg，舒张压(DBP)持续高于130 mmHg，即认为高糖高脂饲料加饮酒诱导高血压模型成功。

将造模成功的大鼠随机分为4组，每组20只，分别为高血压模型组、低剂量治疗组[5 mL·kg-1·d-1]、中剂量治疗组[10 mL·kg-1·d-1]和高剂量治疗组[20 mL·kg-1·d-1]。采用不同浓度的加味吴茱萸汤药液每日定时灌胃给药，20只正常对照组和高血压模型组大鼠以蒸馏水[10 mL·kg-1·d-1]灌胃，全部大鼠每日灌胃1次，连续灌胃6周。

1.4 血压测定

实验前、造模后(给药前)及治疗完成后用动物无创血压测量系统连续5 d且同一时间点分别测量各组大鼠的SBP、DBP、平均动脉压(MBP)和心率(HR)，并且记录数值。

1.5 血清ICAM-1、ET-1、NO及eNOS水平测定

末次给药后，大鼠腹腔注射8%戊巴比妥钠(5 mL/kg)麻醉，腹主动脉取血(过程中不注入抗凝剂)。5 mL后室温下静置20 min，以3 000 r/min离心15 min，吸取上清液用于ICAM-1、ET-1、NO及eNOS的检测，测定方法按相应的试剂盒说明书。

1.6 统计学方法

采用SPSS 22.0软件进行数据处理。呈正态分布的计量数据以x-±s表示，多组正态分布计量资料使用单因素方差分析进行多组样本均数的比较，采用SNK-q检验进行两两比较，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠SBP和DBP比较

与正常对照组比较，造模后(给药前)各组大鼠的SBP和DBP明显升高(P＜0.05)；与高血压模型组比较，在治疗后中剂量与高剂量治疗组的SBP和DBP明显下降(P＜0.05)(表1)。

2.2 各组大鼠MBP和HR比较

与正常对照组比较，造模后(给药前)各组大鼠的MBP明显升高(P＜0.05)；与高血压模型组比较，在治疗完成后中剂量与高剂量治疗组的MBP明显下降(P＜0.05)。各组大鼠在治疗前后HR的差异没有统计学意义(P＞0.05)(表2)。

2.3 各组大鼠血清ICAM-1、ET-1、NO和eNOS水平

与正常对照组比较，各治疗组大鼠的ICAM-1和ET-1水平明显升高，NO和eNOS水平明显降低(P＜0.05)；与高血压模型组比较，中剂量与高剂量治疗组的ICAM-1和ET-1水平明显升高，而NO和eNOS水平明显降低(P＜0.05)(表3)。

表 1 各组大鼠治疗前后的SBP、DBP水平比较Table 1 The systolic blood pressure (SBP) and diastolic blood pressure (DBP) in each group of rats before and after different treatments(-x ± s)

表 2 各组大鼠治疗前后的MBP、HR水平比较Table 2 The mean arterial pressure (MBP) and heart rate (HR) in each group of rats before and after different treatments(-x ± s)

表 3 各组大鼠治疗后血清中ICAM-1、ET-1、NO、eNOS水平比较Table 3 The serum contents of intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1), endothelin-1 (ET-1), nitric oxide (NO)and endothelial nitric oxide synthase (eNOS) in each group of rats before and after different treatments(-x ± s)

3 讨论

目前，全球高血压患者已超10亿人，中国成人高血压患病率高达33.5%，患病人数近3.3亿[7-8]。研究[9-10]表明，高血压患者具有明显的血管内皮损伤情况，因此与血管内皮损伤相关的因子表现出异常的表达状态。在临床检测指标中与血管内皮功能相关的因子相对较多，例如ICAM-1、ET-1、NO和eNOS都是评估血管内皮功能的常用指标[11-12]。其中ICAM-1在炎性反应介导过程中发挥重要作用，同样在白细胞与血管内皮之间的粘附过程中也发挥重要作用，另外，对病理状态下导致的血管内皮炎性损伤具有更重要的评估意义[13-14]。eNOS由血管内皮细胞生成，eNOS过度表达后eNOS含量、NO活性和cGMP水平均上调。血管中氧自由基产生过多，氧化应激反应损伤血管内皮功能，并促进血管平滑肌细胞增殖和肥大，导致血管重构，从而参与高血压病发生、发展和靶器官损害[15-16]。

目前，药物治疗加上健康的生活方式管理是针对高血压最主要的治疗方法。中药在心血管疾病的治疗中有着独特优势。已有文献[17-18]报道，加味吴茱萸汤用吴茱萸疏肝降气、温胃散寒，人参和大枣补气健脾，石决明和天麻平肝潜阳，黄芩和夏枯草清肝郁热，当归和丹参养血活血，甘草调和诸药，故能起到降肝气之上逆，健中气以运脾，补阴血以养肝肾的标本兼治作用，因而具有显著的降压效果。基于此理论，本实验采用加味吴茱萸汤治疗诱发的大鼠高血压，取得了较好的疗效。

本研究发现，中剂量与高剂量的加味吴茱萸汤对高糖高脂饲料及饮酒致高血压模型大鼠的SBP和DBP都具有一定的调节作用。与高血压模型组比较，在治疗完成后中剂量与高剂量治疗组大鼠的SBP和DBP呈现明显下降趋势。通过检测各组大鼠血液中ICAM-1、ET-1、NO和eNOS的水平，发现治疗完成后中剂量与高剂量治疗组大鼠的ICAM-1和ET-1水平明显低于高血压模型组，且趋近于正常组，而NO和eNOS水平明显高于高血压模型组。该结果为临床高血压患者的治疗用药提供了一定的参考。