HBV酶免阴性核酸阳性无偿献血者结果分析及检测模式研究

李燕，何燕琴，刘福发，周练，黄旭燕，何丽娜

（江西省赣州市中心血站，赣州 341000）

HBV通过输血传播，是威胁我国输血安全的重要因素之一[1]。为保障血液检测质量，我国大都采用血清学酶联免疫吸附方法(ELISA)和实时荧光聚合酶链反应（PCR）对献血者进行 HBV检测，使输血后感染HBV的风险大大降低。然而HBV在我国流行率较高，HBV感染窗口期及隐匿性HBV感染(OBI)的存在，输血传播 HBV的残余风险仍然较高，因此对HBV的酶免检测结果及核酸检测结果进行相关性分析，对评估核酸检测的效果及优化核酸检测模式具有重要意义，此次分析报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源与处理 选取2017年1月至2019年12月赣州市中心血站采集的无偿献血者血液样本186767例，酶免检测采用含分离胶的促凝真空采血管，核酸检测采用含惰性分离胶的EDTAK2抗凝真空采血管，并于采集4h内在1800g条件下离心20min，2℃-8℃保存，72h内完成检测。

1.2 仪器与试剂酶免检测仪器 EVO150全自动加样仪、HamiltonSTAR全自动加样仪、FAME24/30全自动酶联免疫分析仪；核酸检测仪器：Roche cobass 201核酸检测系统包括Hamilton STAR全自动混样仪、COBASAmpilprep核酸提取仪及COBASTaqmen Analyzer核酸扩增检测仪。上海浩源ChiTas BSS 1200自动化核酸纯化仪、ABI7500荧光PCR扩增仪。酶免试剂由厦门新创和北京万泰提供的HBsAg试剂盒。核酸试剂分别由瑞士罗氏和上海浩源提供的配套核酸检测试剂盒。

1.3 检测方法

1.3.1 酶免检测同时使用两种不同厂家的试剂，按照试剂说明书要求进行检测。双厂家反应性判为阳性，单厂家反应性以同一试验对原血样做双孔复试，如果双孔复试结果均为无反应性判为阴性，如果双孔复试结果中任何1孔为反应性，则判为阳性。

1.3.2 核酸检测酶免HBV检测阴性样本进行核酸检测。罗氏核酸检测系统采用6混样，浩源核酸检测系统采用8混样进行核酸检测，结果为无反应性的pool判定为核酸检测阴性；检测结果为反应性的pool，对其进行拆分检测。拆分检测结果为无反应性的，判定为核酸检测阴性；拆分检测结果为反应性的，判定为核酸检测阳性。

1.3.3 选取酶免Cot off值在0.5≤S/CO＜1的样本采用核酸单人份检测模式，随机在罗氏、浩源核酸检测系统进行检测，反应性判为阳性，非反应性判为阴性。

1.4 统计学方法 采用SPSS 24.0软件对数据进行分析。计数资料以n（%）表示，组间比较用χ2检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 2017-2019年酶免与核酸HBV检测结果2017年-2019年HBV酶免共检测186767例样本，阳性1388例，阳性率0.74%，核酸检测183409例，阳性507例，阳性率0.28%。见表1。

2.2 2017-2019年507例核酸检测阳性样本在酶免不同S/CO值组HBV核酸阳性检出率比较 酶免检测S/CO＜0.5组样本182916例，检测出核酸阳性362例，阳性率0.20%，0.5≤S/CO＜1组样本493例检测出核酸阳性145例，阳性率29.41%，显著高于S/CO＜0.5组的阳性率，具有统计学差异 （P＜0.05）。 见表 2。

表1 2017-2019年酶免与核酸HBV检测结果[n（%）]

2.3 酶免检测0.5≤S/CO＜1单试剂组与双试剂组HBV核酸阳性检出率比较 酶免检测单试剂结果在0.5≤S/CO＜1区间的核酸检测395例，阳性79例，阳性率20%，双试剂结果都在0.5≤S/CO＜1区间核酸检测98例，阳性66例，阳性率66.35%，双试剂组核酸阳性检出率显著高于单试剂组，具有统计学差异（P＜0.05）。 见表 3。

表2 核酸检测阳性样本酶免不同S/CO组HBV核酸阳性检出率比较[n（%）]

2.4 酶免双试剂0.5≤S/CO＜1样本在两种不同核酸检测系统单人份检测中核酸阳性检出率的比较罗氏系统检测21例，阳性15例，阳性率71.43%，浩源系统检测15例，阳性10例，阳性率66.66%，χ2＝0.108，两种检测系统核酸单人份检测核酸阳性检出率无统计学意义（P＞0.05）。见表4。

表3 酶免0.5≤S/CO＜1中单试剂组与双试剂组HBV核酸阳性检出率比较[n（%）]

3 讨论

表4 酶免双试剂0.5≤S/CO＜1样本在两种核酸检测系统单人份检测核酸阳性检出率比较[n（%）]

众所周知，HBV感染会导致肝功能衰竭、肝硬化和肝细胞癌。HBV感染呈全球性流行，我国一般人群HBsAg携带率为5%-6%[2]，经输血传播是主要传播途径之一。目前酶免检测阴性的献血者经输血传播HBV的残余风险依然存在，主要是隐匿性感染[3-5]，对输血安全造成了较大威胁，因此加强HBV病毒筛查是当前阻断其经输血传播的重点工作。

表1数据中显示2017-2019年检测赣南无偿献血者的186767例样本中HBV酶免阳性1388例，阳性检出率0.74%，明显高于青岛地区0.23%[6]北京地区0.28%[7]江苏地区0.46%[8]，略低于广州地区0.91%[9]。酶免阴性而核酸阳性507例，阳性检出率0.28%，国内高于贵州地区0.16%[10]、广东惠州地区0.186%[11]，省内也高于南昌地区0.121%[12]、新余地区0.15%[13]和抚州地区0.22%[14]，提示赣南地区处于HBV的高流行区，输血传播HBV的残余风险较大，需引起警惕。从样本数量、试剂成本考虑，目前血站对于酶免检测阴性的样本大都采取混样分项目模式检测，但对于有些窗口期或隐匿性感染等部病毒含量较低的样本，混样模式中的样本被稀释，其检出率远低于单人份检测模式检出率[15]。为此，既要避免低含量病毒漏检又要权衡成本效益的情况下，有必要将酶免检测与核酸检测进行比较分析，探索更好的检测模式，有效的使之互为补充。从表2表3数据看出，酶免0.5≤S/CO＜1样本核酸阳性检出率明显高于S/CO＜0.5样本，且其范围内双试剂核酸阳性检出率明显高于单试剂。表4选取的36例酶免双试剂0.5≤S/CO＜1样本，在罗氏、浩源两种不同的核酸检测系统检出率分别71.43%和66.66%，检出率均较高且无明显差异，表明此检测模式在不同的核酸检测系统均可使用。

综上所述，笔者建议酶免双试剂0.5≤S/CO＜1样本核酸检测可以直接进入单人份检测模式，此优于先混样后拆分的检测模式，既可以缩短检测时间，又节约试剂减少成本浪费，更重要的是降低了低病毒含量的HBV漏检，有效的降低经输血传播疾病的残余风险，保障血液安全。