中药复方制剂对鸭沙门氏菌病治疗效果研究

李心海，任士飞，张林吉

中药复方制剂对鸭沙门氏菌病治疗效果研究

李心海，任士飞，张林吉

（徐州生物工程职业技术学院，江苏 徐州 221151）

选取白头翁、连翘、黄连、石榴皮等16种中药组成5种中药组方，将中药超声波震荡后煎煮制得水煎剂。采用打孔法制备5种中药组方的药敏片，将中药药敏片和抗菌药药敏片共同进行药敏试验，得出中药组方2及环丙沙星对沙门氏菌有较好的抑菌效果。动物攻毒保护试验得出中药组方2高剂量的保护效果仅次于环丙沙星的保护效果。由于抗生素易产生耐药性，可用中药制剂防治鸭沙门氏菌病。

沙门氏菌；中药；药敏试验

沙门氏杆菌在环境中广泛存在，能引起各种日龄的家禽发病，对家禽养殖业造成很大损失。而用抗生素治疗沙门氏菌病，会造成用药量大、费用高、产生耐药性、产生毒性等一系列问题。为此，我们选择中药制剂来防治沙门氏菌病，取得较好的疗效。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药材 白头翁、连翘、黄连、石榴皮、黄柏、大黄、黄芩、甘草、吴茱萸、苦参、蒲公英、穿心莲、金银花、五倍子、五味子、乌梅，购自徐州益丰大药房。环丙沙星、新霉素、恩诺沙星等各种药敏片购自徐州某生物科技公司。

1.1.2 菌株 鸭沙门氏菌，由徐州市生物工程职业技术学院动物实验室分离并保存。

1.1.3 动物 于孵化场购入1日龄雏鸭，经沙门氏菌抗体检测，呈阴性。

1.1.4 培养基 普通琼脂培养基、普通肉汤培养液、无水乙醇、显色培养基，均购自徐州某生物科技公司。

1.1.5 试剂 甲醛溶液、EDTA、乙醇、生理盐水均购自徐州某生物科技公司。

1.1.6 仪器 高压蒸气灭菌锅、中草药粉碎机、恒温培养箱、超净工作台、光学显微镜、烘箱、游标卡尺、超声波震荡器、高速离心机等。

1.2 中药组方及菌液制备

1.2.1 中药组方 选择对鸭沙门氏菌有抑菌效果的单味中药，结合中药的组方原则，配制了5个复方制剂(见表1)。

1.2.2 中草药液的制备 中药组方1~5按照组方的比例称取，每一组方共计200g。烧杯编号1~ 5，将中药组方分装到相应编号的烧杯中，各加入2000ml的纯净水，浸泡24h。浸泡后用超声波震荡器作用20min，充分溶解药物的有效成分。先用武火煮沸，后用文火煎煮20min，再用4层纱布过滤药液。将药渣加1000min纯净水。先用武火煮沸，后用文火煎煮20min，再用4层纱布过滤药液。将2次制得的药液合并，用文火煎煮浓缩至200m，使生药含量1g/ml。将生药分装，用高压灭菌器灭菌20min，放置于4℃冰箱冷藏保存。

表1 中药复方制剂组成及含量 (g)

1.2.3 菌液培养 将保存的沙门氏菌菌种接种于普通肉汤中，于37℃恒温箱培养24h，可见沙门氏菌在普通肉汤生长良好。然后将复活的沙门氏菌接种于LB琼脂培养基，于37℃恒温箱培养24h，选取典型菌落，接种LB液体培养基，于37℃恒温箱培养18h，使其浊度达到1.0×108CFU/ ml。置于冰箱4℃冷藏。

1.3 抑菌试验

1.3.1 药敏纸片的制备 用打孔器将中性滤纸打成直径为8mm的圆片，每个青霉素小瓶装20片，放入高压灭菌器灭菌。在无菌操作台上，用移液枪取配制好的中药制剂向青霉素小瓶加入800μl，浸泡12h，使每片含为40μl药量。于37℃烘干，放于冰箱4℃冷藏备用。

1.3.2 抑菌试验及判定标准 吸取800μl复活后的鸭沙门氏菌液接种于普通琼脂培养基，并均匀涂抹。将5种中药制剂药敏片及各种抗菌药药敏片贴于培养基上，并做好标记。将培养皿倒置放于37℃恒温箱中培养24h，用游标卡尺测量抑菌圈直径。中药制剂药敏片的判定标准，抑菌圈直径d>20mm为高度敏感，15mm≤抑菌圈直径d≤20mm为中度敏感，10mm≤抑菌圈直径d<15mm为低度敏感，抑菌圈直径d<10mm为耐药。各种抗菌药药敏片抑菌标准判定以中国药检所制定的标准判断。

1.3.3 人工模型的建立 选取6日龄肉鸭240只，每只注射鸭沙门氏菌培养液0.5ml。随机分成7组，每组30只。

1.4 预防试验

组1~组5为中药制剂治疗组，组6为头孢唑啉治疗组，组7为攻毒阳性对照组。另设健康阴性对照组30只同日龄雏鸭。分别隔离饲养，观察鸭的发病情况，分组情况见表2。

表2 分组及给药 (g.kg-1)

2 结果与分析

2.1 攻毒后情况

攻毒24h后雏鸭开始发病，出现临床症状食欲下降，离群，嗜睡。解剖可见心包内积液有渗出物，肝脏肿大呈铜绿色，肠黏膜脱落，盲肠肿大，内有肠栓，脾脏坏死。取肝脏触片，放在显微镜下镜检可见革兰氏阴性小杆菌。将病料接种显色培养基上，置于37℃恒温箱培养24h，观察菌落呈紫色。

2.2 中药组方对鸭沙门氏菌药敏试验结果

组方1的抑菌圈直径为13.1mm，为低度敏感；组方2的抑菌圈直径为20.2mm，为高度敏感；组方3、组方4、组方5的抑菌抑菌圈直径分别为17.6、15.3、16.7mm，为中度敏感(见表3)。

表3 中药组方对鸭沙门氏菌药敏试验结果

2.3 抗菌药物药敏试验

药敏试验结果显示，沙门氏菌菌株对环丙沙星、头孢唑啉等药物敏感(见表4)。

2.4 预防试验

对雏鸭注射沙门氏菌菌液24h后，雏鸭逐渐出现发病症状，并有死亡病例出现。攻毒阳性对照组症状明显，死亡较多，7d后只有1只存活。健康阴性对照组有3只死亡，平均增重892g。环丙沙星组有4只死亡，保护率87%，平均增重863g。组方2低、中、高3个剂量组试验结果可见，高剂量组效果最好，死亡5只，保护率83%，接近于环丙沙星组；平均增重885g高于环丙沙星组(见表5)。

表4 抗菌药物的药敏试验结果 (mm)

表5 部分药物给药效果试验结果

3 讨论

（1）中兽医辨证认为沙门氏菌病是由疫毒内侵、肺胃热盛、血瘀气滞引起，治疗应清热解毒、凉血止泻[1]。白头翁、黄连、黄柏、黄芩、苦参、蒲公英、穿心莲性苦、寒，具有清热解毒的功效；石榴皮性酸、涩，具有止血，止泻的功能；吴茱萸性苦辛，祛寒止痛；金银花性甘寒，具有清热解毒、消炎的功效；五倍子、乌梅性酸、涩具有止血、收湿的功能；五味子性酸、甘，具有收敛的功效；甘草可以调和中药。药敏试验表明16种中药组成的5种中药组方对鸭沙门氏菌均有一定的抑制效果。其中，组方2的抑菌圈直径为20.2mm，为高度敏感。（2）中草药具有不易产生耐药性，且能调节机体的免疫机能及无残留等特点[2]。在药物预防试验中，中药组方2高、中、低剂量拌入饲料，观察防治和增重效果。结果表明，高剂量组的防治和增重效果最优，仅次于抗菌药环丙沙星组的效果，说明可以用中药组方2作为抗菌药的替代药物。

[1] 冯翠兰, 冯国金, 林崇瑜, 等. 中草药治疗鸭肠炎沙门氏菌病作用机制的初步研究 [J]. 中国畜牧兽医, 2005(3): 45-48.

[2] 刘立新, 刘芳萍, 李睿, 等. 鸡白痢沙门氏菌耐药性中药抑制剂的临床治疗效果[J]. 东北农业大学学报, 2009, 40(1): 89-91.

（2020–07–22）

S853.73+2

A

1007-1733(2020)11-0015-03