HER4在不同病理分级胶质瘤中的表达及意义

张新鹃 孙 龙 王海风 姜旭光

1.山东中医药高等专科学校西医教学部，山东烟台 264199；2.山东省临沂市中心医院神经外科，山东临沂 276400

胶质瘤是人类中枢神经系统原发性恶性肿瘤最常见的一种，目前对胶质瘤的治疗主要以手术切除为主。而高级别胶质瘤尤其是胶质母细胞瘤，因其富集血管且弥漫浸润性生长，所以治疗效果很差。随着分子生物学、肿瘤免疫学、生物技术等进步出现了分子靶向治疗，即从分子水平针对关键基因、细胞受体和调控分子为靶点治疗。分子靶向治疗目前已经在临床应用于胶质瘤患者，并取得不错的治疗效果，这给胶质瘤的治疗带来了新的希望。因此，寻找有效靶点将非常有利于胶质瘤的临床治疗。国内研究发现，HER4（又称erbB4）与某些恶性肿瘤的发生、发展和转移有关[1]。本实验通过免疫组织化学法检测正常脑组织和病理级别不同的胶质瘤组织中的HER4表达情况，来研究HER4在胶质瘤发生及发展过程中的作用，为胶质瘤的研究提供依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取88例胶质瘤标本为临沂市中心医院病理科存档、且在2008年1月～2009年12月接受手术治疗的初发患者，由该院病理科资深医师对所有胶质瘤标本核查和筛选，并依照WHO 中枢神经系统肿瘤的分类标准[2]对标本行病理分级（Ⅰ～Ⅳ级）：Ⅰ级8例，Ⅱ级25例，Ⅲ级33例，Ⅳ级22例。其中，Ⅰ、Ⅱ级为低级别胶质瘤，Ⅲ、Ⅳ级为高级别胶质瘤。另取该院脑外伤患者开颅减压术切除的正常脑组织标本14例为对照组，本研究经临沂市中心医院医学伦理委员会批准，患者及家属同意。将全部组织标本制成病理切片，保存备用。

1.2 主要试剂和方法

主要试剂：鼠抗人HER4 单克隆抗体HFR-1：英国Abcam公司（批号GR256899-7）；免疫组化试剂盒：北京中杉金桥生物技术有限公司；DAB 显色剂：北京中杉金桥生物技术有限公司。

实验方法：将石蜡切片常规脱蜡水化，以蒸馏水漂洗5 min，切片置于0.01 mol/L 枸橼酸缓冲液（pH 6.0）中进行高温抗原修复2 min，并自然冷却25 min，冷水冲洗缸子可加快冷却。取出切片，以蒸馏水冲洗2次、每次3 min，之后用PBS 液反复冲洗，共3次、每次3 min。然后用3%浓度的H2O2浸泡10 min 以阻断灭活内源性过氧化物酶，PBS 液冲洗3次、每次3 min。擦干周围的PBS 液后用山羊血清封闭，37℃孵育30 min。去除周围的血清后滴加一抗（稀释度为1∶200），保存在4℃冰箱，过夜。按照试剂盒使用说明操作（阳性乳腺癌组织作为阳性对照、PBS 液代替一抗作为阴性对照），PBS 液洗3次、每次5 min，擦干周围的PBS液后滴加DAB 显色剂，清水冲洗后进行苏木精复染色。蒸馏水充分冲洗后脱水、干燥、封片。

1.3 免疫组织化学染色结果判断

以细胞核和（或）细胞质中出现浅黄、棕黄或棕褐色深浅不等的颗粒为HER4阳性表达，观察每高倍镜（400×）视野中阳性细胞占所有细胞的百分比：阴性为阳性细胞数<5%，阳性为≥5%。

采用IPP 6.0 图像分析软件进行免疫组织化学法半定量分析：高倍镜（400×）下随机选取5个视野，测量其积分光密度（IOD）值，即将图像上阳性点的光密度值加起来，测量选取的区域面积（area）。最后，计算光密度平均值（IOD/area）。

1.4 统计学方法

采用SPSS 16.0 统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t 检验，多组间比较采用单因素方差分析；计数资料采用率表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HER4阳性表达率

胶质瘤组织为61.4%（54/88），正常脑组织为14.3%（2/14），差异有统计学意义（χ2=10.812，P=0.001）。

2.2 HER4在细胞质和细胞核阳性的表达

其表达量随胶质瘤病理分级的提高而增加，详见图1（封三）。正常脑组织中HER4表达的IOD/area值为0.09±0.02，低级别胶质瘤IOD/area值为0.20±0.03，高级别胶质瘤IOD/area值为0.31±0.08；低级别胶质瘤IOD/area值高于正常脑组织（P<0.05），而高级别胶质瘤IOD/area值又高于低级别胶质瘤，差异均有统计学意义（P<0.05）。

图1 HER4在正常脑组织及不同病理分级胶质瘤中的表达（400×）

3 讨论

HER4 基因首先是由Lai 和Lemke 于1991年在新生鼠神经系统的发育中发现的，并发现该基因在新生鼠神经系统的发育过程中普遍表达[3]。1993年，Plowman 等[4]克隆出人体组织中的该基因，并发现它是编码I型受体酪氨酸激酶（RTK）家族第4个成员HER4 的基因，蛋白分子量为18 OKD。作为跨膜受体蛋白的HER4，其调控细胞的生长、分化、增殖、血管生成和凋亡的机制为：HER4 与配体结合后可通过自身磷酸化参与到细胞的信号传递过程中，信号通过激酶级联传递发挥作用。HER4在正常人体除甲状腺、肾小球及外周神经以外的全身组织中均有不同程度的表达，但均较少[5]。

国内外学者研究HER4 与恶性肿瘤间关系的并不在少数，而结果却不尽相似。近年大多数研究发现：HER4 的过度表达出现在多种恶性肿瘤组织中，多种恶性肿瘤的发生及发展都有HER4 的参与、调控[6-11]。国内几项研究还发现，食管鳞癌、结肠癌、肝内胆管癌中不仅有HER4 的高表达，且HER4表达情况与这些肿瘤的临床分期紧密相关[12-14]；同期国外的另几项研究也发现，骨肉瘤、原发性颅内脑膜瘤及鼻腔黏膜恶性黑色素瘤也有HER4 的高表达，HER4表达与这些肿瘤病理分级成正相关[15-16]。而早些的研究却出现过相反情况：普通痣中HER4阳性表达率最高，而HER4的阳性表达率在异常增生痣、黑色素瘤中却逐级降低[17]。另一研究表明，涎腺黏液表皮样癌虽有HER4 高表达，但HER4表达与病理组织学分级两者间的关系却明显负相关[18]。目前国内外关于胶质瘤中HER4表达情况的研究少见。本研究结果显示，HER4在胶质瘤中存在高表达，与正常脑组织相比差异有统计学意义（P<0.05）；且HER4 的表达量随着胶质瘤病理级别的升高相应增加。这与近年来的大多数研究结果近似。由此可推断：HER4在胶质瘤的发生、发展中有重要作用，HER4 可作为评价胶质瘤恶性程度的重要生物学指标；HER4 也有望成为胶质瘤分子靶向治疗的新靶点。