蛋白酶与益生菌混合发酵豆粕对肉鸡生长性能及免疫功能的影

龙俊海， 陈 灵

（1.驻马店技师学院，河南驻马店 463000；2.河南省驻马店农业学校，河南驻马店 463000）

目前，在养殖过程中通过添加外源性蛋白酶类来提高饲粮蛋白质的消化率，降低其生产成本成为研究的热点，蛋白酶具有补充内源酶不足、提高饲料利用率、降低饲料成本、促进畜禽生长等多种作用，同时还可以降低粪便中含氮物质的排放量，减少环境污染等（杨飞来，2019）。因此，蛋白酶被广泛应用于畜禽养殖业中。相关研究表明，在饲料中添加蛋白酶，可以降低豆粕的使用量，具有很强的应用价值（侯振平，2017）。豆粕富含多种蛋白质，其氨基酸组分均衡，是动物主要的植物蛋白饲料来源之一，但豆粕中含有胰蛋白酶抑制因子、抗原蛋白、不良寡糖等多种抗营养因子，会对幼龄动物造成影响，降低饲料利用率（王国强，2016）。利用益生菌等微生物和蛋白酶进行混合发酵豆粕，可有效地消除或降低豆粕中的抗营养因子，提高豆粕的利用率（郭萌萌，2019；胡瑞，2013）。本试验将复合益生菌、蛋白酶进行混合发酵豆粕，以不同的比例替代饲料中普通豆粕，分析其对黄羽肉鸡生长性能和免疫机能影响，为进一步的临床应用提供基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料 蛋白酶制剂主要包括蛋白酶、淀粉酶、果胶酶、纤维素酶、木聚糖酶等，为粉状固体，购自山东济南诺能生物工程有限公司；乳酸杆菌、双歧杆菌、黑曲霉菌菌种由本单位实验室保存；豆粕购自中粮集团；禽流感H9抗原、新城疫抗原均购自中国药品食品监察所。禽用免疫球蛋白IgG、IgA ELISA Kit试剂盒均购自Elabscience公司。

1.2 混合发酵豆粕和普通豆粕主要营养成分的分析 由表1可知，蛋白酶与益生菌混合发酵豆粕的水分低于普通豆粕，粗蛋白质、苏氨酸、蛋氨酸、赖氨酸、必需氨基酸、非必需氨基酸等营养成分均高于普通豆粕。

1.3 试验设计与基础日粮配比 采用单因素设计试验，选择体重相近的3周龄黄羽肉鸡200只（本市规模化黄羽肉鸡示范基地提供），随机分成4组，每组5个重复，每个重复10只，1组饲喂基础日粮为空白对照组，试验2、3、4组分别用蛋白酶与益生菌混合发酵豆粕替代基础日粮中20%、25%、30%普通豆粕，预试验7 d，试验期为21 d。每个重复组单独平面饲养，自由采食和饮水。按常规的饲养管理方式进行饲养与管理，按照免疫程序对试验肉鸡进行相关疫苗免疫接种。试验肉鸡基础日粮参照美国NRC（1994）肉鸡饲养标准配制，其日粮组成和营养水平见表2，采用玉米-豆粕型基础日粮。

表1 营养成分的分析%

表2 日粮组成与营养水平

1.4 生长性能的测定 在试验期间，每个试验组中每只试验肉鸡空腹称重，记录每个试验组试验肉鸡的采食料量和耗料量，计算各组的平均日采食量、平均日增重和料重比等生长性能指标。

1.5 免疫指标的测定 试验结束后，每个试验组随机抽取10只试验肉鸡，翅中静脉采血，分离血清，用血凝抑制试验测定试验肉鸡新城疫、禽流感抗体效价水平。用ELISA方法测定血清中免疫球蛋白IgG、IgA含量。

1.6 数据分析 试验数据采用SPSS 20.0软件进行单因素方差分析，采用Duncan’s法进行差异显著性分析，以P＜0.05表示差异显著性。

2 结果与分析

2.1 蛋白酶与益生菌混合发酵豆粕替代豆粕对肉鸡生长性能的影响 由表3可知，试验2、3、4组的平均日增重均高于1组，其中试验2组的平均日增重高于1组，差异性不显著（P>0.05），试验3、4组的平均日增重较 1组比分别提高17.2%、14.3%（P ＜ 0.05）， 试验 2、3、4组之间相比，差异性不显著（P>0.05）；试验 2、3、4 组平均采食量均高于1组，差异性不显著（P>0.05）；试验2、3、4组的料重比均低于1组，试验2组低于1组，差异性不显著（P>0.05），试验3、4组的料重比较1组比分别降低 14.3%、13.6% （P ＜ 0.05），试验 2、3、4组之间相比，差异性不显著（P>0.05）。

表3 蛋白酶与益生菌混合发酵豆粕替代豆粕对肉鸡生长性能的检测结果

2.2 蛋白酶与益生菌混合发酵豆粕替代豆粕对肉鸡免疫指标的影响 由表4可知，试验2、3、4组AI、ND抗体效价水平均高于1组，其中2组高于1组，差异性不显著（P ＜ 0.05），试验 3、4组血清中AI、ND抗体效价水平较1组相比分别提高15.3%、14.7%、12.6%、11.5% （P ＜ 0.05），试验 2、3、4 组之间相比，差异性不显著（P>0.05）；试验2、3、4组血清中IgG含量均高于1组，其中2组高于 1组，差异性不显著（P ＜ 0.05），试验 3、4组血清中IgG含量较1组相比分别提高15.8%、14.9% （P ＜ 0.05），试验 2、3、4 组之间相比，差异性不显著（P>0.05）；试验 2、3、4 组血清中 IgA 含量均高于1组，差异性不显著（P>0.05）。

表4 蛋白酶与益生菌混合发酵豆粕替代豆粕对肉鸡免疫指标的检测结果

3 讨论

豆粕中含有多种抗营养因子，这些抗营养因子可以严重影响其他营养物质的消化与吸收，利用益生菌和蛋白酶混合发酵可将豆粕中大分子物质降解为易被动物消化和吸收的小分子多肽类物质和蛋白质，另外益生菌中含氨基酸、维生素、有机酸及未知生长因子等，可以提高饲料的适口性，调节胃肠道微生物区系，提高动物生产性能，减少腹泻等消化道疾病（杨海霞，2016；俞清霞，2011；唐翔宇，2008）。本试验研究表明，试验3、4组的平均日增重较 1组比分别提高17.2%、14.3%（P ＜ 0.05）， 试验 2、3、4组平均采食量均高于1组（P>0.05），试验 3、4组的料重比较1组比分别降低14.3%、13.6% （P＜0.05）。说明不同水平的蛋白酶与益生菌混合发酵豆粕替代基础日粮中普通豆粕，可以提高肉鸡的平均日增重和平均采食量，降低料肉比，因此提高肉鸡的生长性能。与杨海霞（2016）报道的复合益生菌发酵豆粕可以提高仔猪生长性能结果一致。

在肉鸡的养殖过程中，禽流感、新城疫等病毒性疾病是危害养鸡业主要传染性疾病之一，尤其禽流感、新城疫可以感染不同日龄的鸡，其死亡率高达75%以上，该病主要通过疫苗免疫进行预防，其禽流感、新城疫抗体水平的变化反映了机体免疫机能之一 （仇薪鑫，2019；蔡艳，2018）。免疫球蛋白IgG、IgA是介导动物机体体液免疫主要抗体，在体液免疫过程中起重要的作用（张召兴，2017）。本试验研究表明，试验3、4组血清中AI、ND抗体效价水平较1组相比分别提高 15.3%、14.7%、12.6%、11.5% （P ＜ 0.05），试验3、4组血清中IgG含量较1组相比分别提高 15.8%、14.9%（P ＜ 0.05），试验 2、3、4 组血清中IgA含量均高于1组（P>0.05）。说明不同水平的蛋白酶与益生菌混合发酵豆粕替代基础日粮中普通豆粕，可以提高肉鸡的免疫机能。可能由于豆粕通过益生菌和蛋白酶混合发酵后，益生菌中所含的营养物质及物质因子可刺激肉鸡的免疫系统，促使机体内免疫细胞活化，促使机体产生抗体，提高肉鸡机体的免疫水平。

4 结论

本试验条件下，蛋白酶与益生菌混合发酵豆粕替代饲料中的25%普通豆粕，可以提高肉鸡生长性能和免疫机能。