宁夏地区RhD阴性献血人群D变异型及Rh表现型研究

步晓筠， 邵 峰

（宁夏回族自治区血液中心，银川 750001）

Rh血型系统是人类红细胞血型系统中最为重要的基于蛋白的血型系统，在34个已知血型系统中，它表达的抗原数量最多，分子机制也最复杂，其中与临床关系较为密切的Rh血型抗原主要是D、C、c、E、e这5种。为了给临床提供及时、安全、有效的血液，提高对RhD阴性受血者的供血能力，本研究对宁夏回族自治区初筛为RhD阴性的献血者的血清学表型分布及表型与D变异型的关系进行分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2015年1月1日至2019年6月30日宁夏回族自治区血液中心的初次无偿献血且初筛RhD阴性献血者共1092例。

1.2 仪器与试剂

意大利GSM公司的Hemotype全自动血型分析仪，日本Kubota公司的KA-2200型离心机。RhD阴性初筛试剂使用英国Millipore公司的单克隆IgM和IgG抗-D混合剂，RhD阴性确认试验采用加拿大Dominion Biologicals limited公司的单克隆IgM和IgG抗-D混合剂、英国Millipore公司的单克隆IgM和IgG抗-D混合剂以及上海血液生物医药公司的抗-D（IgG），直接抗人球蛋白试剂、抗C、抗c、抗E、抗e试剂均由上海血液生物医药公司提供。

1.3 方法

1.3.1 盐水微板法初筛Rh 初筛使用单克隆IgM和IgG抗-D混合剂进行盐水微板初筛。

1.3.2 间接抗人球蛋白试验（IAT）进行RhD阴性确认 初筛阴性者的受检红细胞分别与3种不同来源的单克隆抗-D（lgM+lgG）或抗-D（IgG）应用生理盐水试管法进行IAT，同时做阴阳对照。观察结果均为阴性就确认判定为RhD阴性。实验结果阳性标本加做直接抗球蛋白试验排除假阳性。

1.3.3 Rh血清学表型鉴定 分别用抗C、抗c、抗E和抗e试剂对RhD阴性标本进行盐水试管法血清学分型。

1.4 统计学方法

数据采用SPSS 17.0软件进行统计分析。RhD阴性献血者与D变异型献血者间Rh抗原分布差异采用χ2检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 RhD阴性献血者表型分布

1092例初筛RhD阴性献血者中，1032例确认为RhD阴性献血者（94.51%），分型为ccee 635例（61.53%）、Ccee 276例（26.74%）、CCee 40例（3.88%）、ccEe 50例（4.84%）、CcEe 29例（2.81%）、CCEe 2例（0.19%）。未见ccEE和CcEE表现型。见表1。

2.2 60例D变异型表型分布

1092例初筛RhD阴性献血者经间接抗人球蛋白试验，确定为D变异型共计60例，占总数的5.49%。ccEe初筛RhD阴性84例，D变异型占40.48%（34/84）；Ccee初筛RhD阴性288例，D变异型占4.17%（12/288）；CCee初筛 RhD 阴性 44例，D 变异型占9.09%（4/44）。见表1。

表1 Rh表现型分布

2.3 Rh抗原分布

C抗原阳性初筛371例，D变异型占6.47%（24/371）；c抗原阳性初筛RhD阴性1046例，D变异型占5.35%（56/1046）；E抗原阳性初筛RhD阴性 125例，D 变异型占 35.20%（44/125）；e抗原阳性初筛RhD阴性1090例，D变异型占5.32%（58/1090）。确认Rh阴性献血者与D变异型献血者E抗原分布差异有统计学意义（χ2=239.88，P＜0.01），C 抗原、c抗原、e抗原分布差异无统计学意义（P＞0.05）。见表 2。

3 讨论

RHD和RHCE基因位于 1p34.3-36.1，RHD基因编码RhD抗原，RHCE基因编码RhCE抗原，两基因紧密连锁，高度同源[1]。RHD目前已发现255种等位基因[2]。将过去习惯分类的“弱D”“部分D”统称为“D变异型”。大体上，D变异型的分子机制有两种：一种是RHD基因上一些碱基改变导致RhD蛋白上氨基酸转变；另一种是基因重组产物，基因转换导致产生RHD-CE-D基因，其中RHD基因的一部分片段被RHCE基因的片段取代[3]。

本研究共检出D变异型60例，占初筛RhD阴性总数的 5.49%，济南为 2.70%[4]、苏州为2.88%[5]、北京为 3.82%[6]、西安为 4.06%[7]、岳阳为4.80%[8]。60例D变异型分型主要为ccEe 34例（56.67%）、Ccee 12例（20%）、CcEe 8例（13.33%），D变异型表现型分布与西安、北京的研究结果相似，其中西安ccEe占比44.30%[7]、北京ccEe占比63.80%[6]，均以ccEe占比率最高。本研究中ccEe初筛RhD阴性84例中D变异型占40.48%，苏州为 40%[5]，西安为 27.56%[7]，北京为 27.54%[6]，提示ccEe表现型初筛阴性血样，出现D变异型概率较高。

本研究中E抗原阳性初筛RhD阴性125例，检出D变异型占35.20%，确认RhD阴性献血者与D变异型献血者间Rh抗原分布进行卡方检验，两组间E抗原分布差异具有统计学意义，以上数据均提示含有E抗原的初筛RhD阴性个体，出现D变异型的占比远高于不含E抗原的初筛RhD阴性个体，与之前北京、济南的研究结果一致[4，6]。因此，E抗原阳性或表现型为ccEe为初筛RhD阴性血样中有较高比例为D变异型，建议对这类血样尤以关注，避免D变异型的漏检。

表2 Rh抗原分布

如果将D变异型的血液输给RhD阴性的受血者，受血者可能产生免疫反应，从而产生抗D抗体，也可能引起严重的新生儿溶血病[9]。D变异型的检出，避免了RhD阴性输血患者接受D抗原刺激产生抗D抗体的风险，提高了免疫后产生抗体的RhD阴性输血患者的输血安全性和有效性。宁夏地区RhD阴性及D变异型献血者的表现型分布资料，对进一步指导临床特殊配血，保障输血安全具有重要意义。