桑白皮汤对豚鼠离体气管平滑肌的舒张作用

2020-11-06 11:51朱亚飞赵启鹏
宁夏医科大学学报 2020年10期
关键词:桑白皮离体豚鼠

武 夏, 朱亚飞, 马 锐, 闫 琳, 赵启鹏,

(1.宁夏医科大学药学院,银川 750004; 2.宁夏医科大学基础医学院,银川 750004;3.宁夏医科大学,银川 750004)

桑白皮汤出自《景岳全书》,由桑白皮、半夏、苏子、苦杏仁、川贝母、山栀、黄芩、黄连各八分,加姜片3片组成,治肺气有余,火炎痰盛作喘。它是治疗痰火内盛、作喘等病的重要方剂,常用于治疗慢性阻塞性肺病、支气管哮喘、支气管炎等病症。国家中医药管理局会同国家药品监督管理局于2018年制定《古代经典名方目录(第一批)》,为开展来源于古代经典名方的中药复方提供了政策上的支持,该方被纳入其中。目前,对于该方的文献报道集中在使用原方或加减方的临床观察上[1],鲜有使用原方开展实验研究的报道。本文将研究桑白皮汤对豚鼠离体气管平滑肌张力的影响,为该方的推广及临床应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 动物

健康豚鼠,300~500 g,雌雄兼用,由宁夏医科大学实验动物中心提供。饲养期间自由饮食。

1.2 实验仪器

BL-420N生物机能系统、HW-400E恒温平滑肌槽,均购自成都泰盟软件有限公司;HAO-3211医用分子筛制氧机,购自欧姆龙(大连)有限公司;ALC-MQ3微型可调气源,购自上海奥尔科特生物科技有限公司;SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵,购自郑州长城科工有限公司;RE-52A旋转蒸发仪,购自上海亚荣生化仪器厂。

1.3 药材与试剂

桑白皮、半夏、苏子、苦杏仁、川贝母、山栀、黄芩、黄连饮片均购自宁夏明德中药饮片有限公司。K-H(Krebs-Henseleit)营养液:1000 mL 蒸馏水中含有 NaCl 7.67 g、KCl 0.34 g、MgCl20.25g、CaCl20.20 g、NaHCO32.13 g、KH2PO40.16 g、葡萄糖2.19 g。乙酰胆碱(ACh,货号:A2661)和组胺(His,货号:59964)购自 Sigma-Aldrich。

1.4 实验方法

1.4.1 桑白皮汤提取物的制备 桑白皮、川贝母、黄芩、半夏、山栀、杏仁、黄连、苏子和生姜各称取50g,共计450g,加10倍量蒸馏水浸泡30 min,煎煮30 min,倒出滤液,滤渣中加8倍量的蒸馏水再煎煮30 min,合并2次滤液,用200目滤布过滤,滤液于旋转蒸发仪减压浓缩,用容量瓶定容至100 mL,放于4℃冷藏备用。

1.4.2 豚鼠离体气管螺旋条的制备 取豚鼠一只,用铁锤猛击头部致昏,迅速从颈部腹面正中切开皮肤,分离气管,从甲状软骨下部至气管下部分叉处剪取主气管。放入盛有预冷的并预先通入混合气体(95%O2和5%CO2)饱和K-H营养液的培养皿中,去除气管周围的结缔组织,将气管剪成2 cm×2 mm的螺旋条,然后将标本连接到张力换能器上,放入盛有15 mL K-H营养液(37±0.5)℃的标本槽内,立即通入95%O2和5%CO2混合气体。调整前负荷到1.80 g左右,稳定1 h,期间每15 min换1次新鲜 K-H营养液[2-4]。

1.4.3 桑白皮汤对豚鼠离体气管正常状态下、ACh、His、KCl致痉的舒张作用 实验开始,用BL-420N生物机能系统记录一段正常曲线,记录此时的张力后依次加入桑白皮汤提取物,使终浓度为0.05、0.10 和 0.20 g·mL-1,观察 30 min 内曲线变化。加入ACh(0.33×10-4g·mL-1)、His(0.33×10-5g·mL-1)、KCl(0.10×10-3g·mL-1)0.5 mL,观察 30 min 内曲线变化,作为30 min内ACh、His和KCl对离体气管的正常影响,并记录最高点和最低点数值(计算解痉率)。加入 ACh(0.33×10-4g·mL-1)、His(0.33×10-5g·mL-1)、KCl(0.10×10-3g·mL-1)0.5 mL,待达到最高点后,依次加入低、中、高剂量的桑白皮汤提取物,观察30 min内曲线变化幅度并记录气管收缩曲线。计算桑白皮汤的解痉率,解痉率(%)=(给药前曲线高度-给药后曲线高度)/给药前曲线高度×100%。每次加药观察结束后用K-H液冲洗3次,让张力曲线恢复至平稳状态再开始下一次实验[5],加药时间相隔15 min,每个实验分别选择3条正常气管条,重复3次。

1.5 统计学方法

数据采用SPSS 17.0软件进行统计学分析。计量资料用均数±标准差(±s)表示,组间比较采用单因素方差分析,组内比较采用Dunnet-t检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 桑白皮汤对豚鼠正常离体气管条张力的影响

与蒸馏水对照组比较,给予高、中、低剂量的桑白皮汤药后,解痉率逐渐增大(P<0.01),说明桑白皮汤对正常状态下的豚鼠气管平滑肌有舒张作用,且舒张作用呈一定的浓度依赖性。见图1和表1。

表1 桑白皮汤对豚鼠正常离体气管解痉率的影响(±s,n=9)

表1 桑白皮汤对豚鼠正常离体气管解痉率的影响(±s,n=9)

与蒸馏水组相比**P<0.01。

组别浓度/(g·mL-1)给药前张力/g给药后张力/g解痉率/%蒸馏水组 — 1.80±0.11 1.79±0.13 0.50±0.06桑白皮汤组 0.05 1.74±0.14 1.48±0.09 8.85±1.36**0.10 1.84±0.10 1.56±0.04 10.11±1.16**0.20 1.92±0.08 1.69±0.02 11.82±1.22**

2.2 桑白皮汤对ACh致豚鼠气管平滑肌收缩的解痉作用

在给予ACh后的高点,分别给予低、中、高剂量的桑白皮汤后,与单独给予ACh比较,解痉率逐渐变大(P<0.01),说明桑白皮汤能抑制ACh引起的豚鼠离体气管条收缩。见图2和表2。

2.3 桑白皮汤对His致豚鼠气管平滑肌收缩的影响

在给予His后的高点,分别给予低、中、高剂量的桑白皮汤后,与单独给予His比较,解痉率逐渐变大(P<0.01),说明桑白皮汤能抑制His引起的豚鼠离体气管条收缩。见图3和表3。

表2 桑白皮汤对ACh致豚鼠离体气管收缩后的影响(±s,n=9)

表2 桑白皮汤对ACh致豚鼠离体气管收缩后的影响(±s,n=9)

与ACh组相比**P<0.01。

组别药物浓度/(g·mL-1)给药前张力/g给药后张力/g解痉率/%ACh 组 0.33×10-4 2.42±0.31 2.29±0.14 5.38±1.24桑白皮汤组 0.05 2.34±0.24 1.97±0.17 16.05±2.20**0.10 2.24±0.18 1.80±0.08 19.60±2.07**0.20 2.54±0.39 1.95±0.43 23.20±2.36**

2.4 桑白皮汤对KCl致豚鼠气管平滑肌收缩的影响

在给予KCl后的高点,分别给予低、中和高剂量的桑白皮汤后,与单独给予KCl比较,解痉率逐渐增大(P<0.01),说明桑白皮汤能抑制KCl引起的豚鼠离体气管条收缩。见图4和表4。

表3 桑白皮汤对His致豚鼠离体气管收缩后的影响(±s,n=9)

表3 桑白皮汤对His致豚鼠离体气管收缩后的影响(±s,n=9)

与His组相比**P<0.01。

药物终浓度(/g·mL-1) 给药前张力/g给药后张力/g解痉率/%组别His组 0.33×10-5 2.34±0.18 2.19±0.16 6.40±1.76桑白皮汤组 0.05 2.25±0.29 1.85±0.30 18.40±2.91**0.10 2.31±0.15 1.86±0.16 22.04±2.80**0.20 2.27±0.02 1.51±0.007 33.29±3.04**

表4 桑白皮汤对KCl致豚鼠离体气管收缩后的影响(±s,n=9)

表4 桑白皮汤对KCl致豚鼠离体气管收缩后的影响(±s,n=9)

与 KCl组相比 **P<0.01。

组别药物终浓度/(g·mL-1)给药前张力/g给药后张力/g解痉率/%KCL 组 0.10×10-3 2.28±0.17 2.15±0.22 5.67±1.31桑白皮汤组 0.05 2.35±0.15 2.08±0.24 11.47±1.65**0.10 2.17±0.05 1.78±0.05 17.67±2.06**0.20 2.29±0.37 1.81±0.21 20.73±2.44**

3 讨论

本实验选用经典方剂桑白皮汤为研究对象,研究其对豚鼠离体气管平滑肌的作用。方中桑白皮常用于镇咳、祛痰等。现代药理研究[6]表明,桑白皮具有抗炎、抗病毒、降压、抗癌等生理活性。黄芩,味苦、性寒,有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎等功效[7]。其有效成分为黄酮类,其中以黄芩苷的药理作用最强。黄芩和桑白皮在临床上常作为药对配伍合用,发挥清肺、泻肺、平喘、止咳等功效,用于肺热雍盛、气逆咳喘、咳痰黄稠等症[7]。川贝母具有清热润肺、化痰止咳等功效,在临床中被广泛应用于治疗慢性咽炎、急性支气管炎等呼吸系统疾病[8]。苦杏仁具有止咳平喘、润肠通便的功效。苦杏仁中含有苦杏仁苷、脂肪油、苦杏仁酶、苦杏仁苷酶、樱叶酶、氨基酸、多种维生素及矿物质元素等[9]。其所含的苦杏仁苷分解后产生少量氢氰酸,能轻度抑制中枢,使呼吸运动趋于平缓,从而起到镇咳平喘的作用。半夏具有止咳平喘、抗炎、抗衰老、镇静、抗肿瘤、止呕等作用。对半夏的现代研究[10]表明,半夏含生物碱、挥发油等化学成分,具有止咳平喘作用。苏子能够有效缓解哮喘患者喘息、胸闷、咳嗽的临床症状,具有良好的镇咳、祛痰、平喘作用[11]。

本实验表明,桑白皮汤对 His、ACh、KCl所致气管平滑肌的收缩均有抑制作用,且对His所诱导气管收缩的抑制作用更明显。ACh是通过启动受体操纵型Ca2+通道(ROC)和促进Ca2+从其贮存位点的释放来发挥作用。高钾通过引起细胞膜去极化,激活电压依赖型Ca2+通道(PDC)导致外钙内流来发挥作用。说明桑白皮汤舒张气管平滑肌的作用机制可能与抑制H1受体,抑制ROC和PDC的作用都有关。该作用和机制有待通过动物实验进行验证。此外,可对桑白皮汤进行拆方研究,针对组方中各单味药及其相互配伍后对气管平滑肌的作用作进一步的研究,为桑白皮汤的临床应用及推广提供实验依据,为古代经典名方开发和应用做贡献。

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