免疫抑制治疗对再生障碍性贫血患者血清细胞因子的影响

费炳义

AA 是一种骨髓产生的细胞不足,导致血液中细胞下降的血液系统疾病。据报道,AA 与骨髓造血干细胞损伤相关,当某些刺激物激活其自身免疫反应时机体会释放VEGF、TNF-α、IFN-γ 等负性调控因子,导致造血干细胞分裂受阻而凋亡［1］。鉴于此,本研究对接受免疫抑制治疗及常规治疗的AA 患者的血清VEGF、TNF-α、IFN-γ 浓度进行检测,以探讨免疫抑制治疗对AA 患者血清VEGF、TNF-α、IFN-γ 表达的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2016 年7 月～2018 年6 月在本院就诊治疗的AA 患者56 例,纳入标准：①符合AA诊断［2］,并经临床症状及外周血象、骨髓涂片及活检确诊；②年龄11～65 岁；③患者及家属均知情同意。排除标准：①对本研究所用药物过敏者；②自身免疫性疾病；③治疗依从性差者；④有其他严重并发症。将患者根据随机数字表法分为观察组和对照组,每组28 例。观察组男15 例,女13 例；年龄14～62 岁,平均年龄(28.5±8.6)岁。对照组男14 例,女14 例；年龄13～65 岁,平均年龄(28.9±9.1)岁。两组一般资料比较差异无统计学意义(P＞0.05),具有可比性。本研究通过了医院伦理委员会审核。

1.2 方法 所有患者均行基础治疗,患者入院后,嘱其保持绝对卧床休息,并给予补充血小板治疗,贫血严重者可用同型红细胞；如合并感染则给予抗感染治疗；肝功能不全者则给予保肝治疗。在此基础上,对照组给予雄激素治疗,即给予十一酸睾酮胶丸(浙江医药股份有限公司新昌制药厂,国药准字H10970240,规格：40 mg/粒)40 mg 口服,2 次/d,连续治疗6 个月。观察组给予免疫抑制治疗,即口服环孢素软胶囊(杭州中美华东制药有限公司,国药准字H10960122,规格：50 mg/粒)3～5 mg/(kg·d),2 次/d,连续治疗6 个月。

1.3 观察指标 比较两组治疗前后CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK 细胞水平及TNF-α 和IFN-γ 表达百分率,相同部位骨髓涂片标本中VEGF 表达差异。CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK 细胞水平采用流式细胞仪进行检测。TNF-α、IFN-γ 检测采用流式细胞仪获得2×105个细胞,并计算CD4 阳性细胞数,测定其胞浆中TNF-α 和IFN-γ 阳性表达,以此计算表达百分率。VEGF 表达水平采用原位杂交法检测。

1.4 统计学方法 采用SPSS22.0 统计学软件进行数据统计分析。计量资料以均数±标准差(±s) 表示,采用t 检验；计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P＜0.05 表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组治疗前后CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK 细胞水平变化情况比较 治疗前,两组CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK 细胞水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05)；治疗后,观察组CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK 细胞水平均明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

2.2 两组治疗前后VEGF、CD4+/TNF-α 和CD4+/IFN-γ 表达情况 治疗前,两组VEGF、CD4+/TNF-α和CD4+/IFN-γ 表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05)；治疗后,观察组VEGF、CD4+/TNF-α 和CD4+/IFN-γ 表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表1 两组治疗前后CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK 细胞水平变化情况比较(±s)

表1 两组治疗前后CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK 细胞水平变化情况比较(±s)

注：与对照组比较,aP＜0.05

表2 两组治疗前后VEGF、CD4+/TNF-α 和CD4+/IFN-γ 表达情况(±s)

表2 两组治疗前后VEGF、CD4+/TNF-α 和CD4+/IFN-γ 表达情况(±s)

注：与对照组比较,aP＜0.05

3 讨论

AA 是各种原因引起骨髓造血干细胞减少、造血功能衰竭所致的一种以全血细胞减少、进行性贫血等为典型特征的临床综合征［3］,目前普遍认为是骨髓造血微环境损伤造成的［4］。研究表明,很多AA 患者存在细胞因子调节异常,这可能造成造血干细胞增殖和分化紊乱［5］。由T 淋巴细胞分泌的骨髓抑制性细胞因子是重要的造血负调控因子,如TNF-α、IFN-γ 等［6］。研究发现,TNF-α、IFN-γ 可抑制红细胞聚集,同时发现AA 患者的TNF-α、IFN-γ 检出率明显高于正常人［7］。本研究采用流式细胞仪检测外周血中淋巴细胞胞浆内的TNF-α、IFN-γ 表达,结果发现两者均明显高于对照组,提示AA 引起了造血调控因子失衡,进而导致造血负调控因子异常升高。目前,AA 的治疗主要采用免疫抑制治疗,特别那些对骨髓移植有禁忌的患者,有效率可达75%［8］。本研究结果显示,治疗后,观察组VEGF、CD4+/TNF-α 和CD4+/IFN-γ 表达水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。由此说明免疫抑制治疗抑制了AA 患者体内T 细胞功能,下调造血调控因子,故利于骨髓造血功能恢复。

通过检测T 细胞胞浆内TNF-α 和IFN-γ 的表达改变,可为免疫抑制治疗疗效的评估提供依据。与酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中TNF-α 和IFN-γ 的表达相比,流式细胞术检测胞浆内的TNF-α和IFN-γ 的表达更接近细胞特异性,可较准确反映T细胞分泌的细胞因子变化,故更准确反映免疫抑制治疗后T 淋巴细胞功能改变。VEGF 可在体内诱导血管新生,是高度特异的血管内皮细胞分裂原,且是血小板源性生长因子之一。VEGF 具有维持正常血管密度的作用,且与生理性造血有明显的关系。

通常肿瘤患者免疫力低下,其CD4+T 细胞减少、CD8+T 细胞增加、CD4+/CD8+比值下降；NK 细胞为机体重要的非特异免疫细胞［9,10］。本研究结果显示,观察组VEGF 表达量显著下调,但治疗后上升明显,说明VEGF 表达下调与AA 密切相关。造血微环境受损引起血管密度变小,骨髓血管生成减少,使骨髓脂肪化,造血组织萎缩,最终影响造血功能。VEGF 表达减少直接影响造血干细胞的生存、分化和发育,可见AA 患者的VEGF 表达下降,从各途径影响骨髓血管生成和造血干细胞的生存,但其具体机制还需从分子学、基因学方面入手加以研究。

总之,免疫抑制治疗能有效降低AA 患者T 细胞胞浆内的TNF-α 和IFN-γ 表达,且能上调VEGF 的表达,利于骨髓血管密度的恢复。