G蛋白耦联雌激素受体GPER在肝脏缺血再灌注损伤中的表达及调控机制研究

秦勇 王超君 徐胜前 潘德标 王世

【摘 要】目的：探究G蛋白耦联雌激素受体GPER在肝脏缺血再灌注损伤中的表达及调控机制研究。方法：选取2-3月龄成年雄性SD大鼠30只（體重约350±20g）构建大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型，分为假手术组（PO组）、肝缺血再灌注组（IR组）及雌激素预处理+肝缺血再灌注组（IRE组）各10只。采用按体重经腹腔给予17-β雌二醇4mg/kg于造模前1小时处理大鼠，造模36h后，比较分析在肝脏缺血再灌注损伤中，G蛋白耦联雌激素受体GPER的表达和调控机制。结果：与对照组相比，术后转氨酶明显较低，差异有统计学意义（P<0.05）、炎症因子TNF-α及IL-6水平下调，此外，GPER的表达在模型组中显著下调，雌激素预处理上调GPER的表达水平。结论：在肝脏缺血再灌注损伤中采用雌激素预处理改善大鼠肝功能，提高G蛋白耦联雌激素受体GPER的表达，降低TNF-α及IL-10水平，减轻肝脏缺血再灌注损伤，安全有效，具有临床应用价值。

【关键词】肝脏缺血再灌注损伤;调控机制;G蛋白耦联雌激素受体GPER

【中图分类号】R843【文献标识码】A【文章编号】1672-3783（2020）10-30--02

在大脑中雌激素发挥关键性作用，能够调节痛觉和情绪，以及突触可塑性和认知功能，大多经雌激素核受体ERβ和ERα介导调控[1]，雌激素也能经膜结合雌激素受体，如出现慢性疼痛和情绪障碍等，大脑的神经系统功能受G蛋白耦联雌激素受体（GPR30）介导[2]。另外，也有研究表明雌激素在肠缺血[3]、脑缺血[4]以及肾脏缺血[5]的过程中具有显著的保护作用。然而，雌激素在缺血再灌注损伤中发挥的作用及受体相关机制仍不清楚。在本研究中，我们构建了大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型并使用雌激素预处理，检测了转氨酶活性及炎症因子TNF-α及IL-6水平，并探讨了GPER的表达变化。旨在阐明G蛋白耦联雌激素受体GPER在肝脏缺血再灌注损伤中的表达及调控机制。

1 资料与方法

1.1 选取2-3月龄性成熟的成年雄性SD大鼠30只（体重约350±20g），分为假手术组（PO组）、肝缺血再灌注组（IR组）及雌激素预处理+肝缺血再灌注组（IRE组）各10只。各组缺血再灌注后36h后各随机选取5只存活大鼠，经心脏穿刺采血检测血清ALT、LDH、TNF-α及IL-6水平，并于肝中叶的相同部位取肝组织样本检测GPER的mRNA表达。

1.2 方法

术前12h禁食，腹腔内注射1%戊巴比妥钠溶液30mg/kg麻醉，上腹部正中切口开腹，断离肝周韧带后分离肝门部脉管，以无创伤小血管夹夹闭左外及中叶的肝动脉、门静脉造成70%肝脏缺血，45min后重新开放血供并切除未阻断血供的30%肝叶，造成肝切除肝缺血再灌注模型。雌激素处理组于造模前1小时按体重经腹腔给予17-β雌二醇4mg/kg，其余两组则于术前1小时经腹腔给予同等容积的生理盐水。术后36 h收集血液及组织样本进行相关检测。

1.3 观察指标：采用生化检测试剂盒 （南京建成）检测AST及ALT活性，ELISA试剂盒（南京建成）检测NF-α及IL-6水平。采用荧光定量PCR检测GPER的表达;根据GPER在基因数据库的序列信息，设计合成PCR引物：GPER-F：TCTAAACTGCGGTCAGATGTGGCT; GPER-R：TTTCCTGGTCGACGGTGTCAGAAA。抽提总RNA，采用Takara公司的cDNA Reverse Transcription Kit 逆转录合成cDNA。采用Takara公司SYBR Green PCR MIX试剂盒及ABI 7300 Real time PCR系统扩增检测。计算用内参标准化的CT值并进行mRNA表达分析。

1.4 统计学处理：选择SPSS 23.0统计学软件实施数据分析，用均数±标准差（M±SD）代表计量资料，选择t检验检测两组间情况，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

雌二醇处理组与未处理组术后肝功能比较：采用按体重经腹腔给予17-β雌二醇4mg/kg于造模前1小时处理大鼠，与对照组相比，术后转氨酶明显较低，差异有统计学意义（P<0.05）。此外，炎症因子TNF-α及IL-6的表达水平在模型组中显著上调，并被雌激素预处理显著抑制（P<0.05），见表1。另外，GPER的mRNA表达在模型组中显著下调（36.67%，相较于P0组），但被雌激素预处理显著上调（78.49%，相较于P0组）（P<0.05）。

3 讨论

此次研究中，采用按体重于造模前1小时经腹腔给予17-β雌二醇4mg/kg处理大鼠，与假手术组相比，术后转氨酶活性及炎症因子的表达明显较低。同时qRT-PCR的结果发现，GPER的表达在模型组中显著下调，然而这一现象被雌激素预处理显著改善。综上所述，在肝脏缺血再灌注损伤中采用雌激素处理，能够显著改善大鼠的肝功能、降低炎症因子TNF-α及IL-6水平、刺激雌激素受体表达，减轻肝脏缺血再灌注损伤，安全有效，具有临床应用价值。

参考文献

胡军， 冯华. 雌激素脑保护研究进展[C].中华医学会神经外科学分会学术会议. 2010.

张雪姣， 季晖， 唐苏苏，等. 雌激素受体在中枢神经系统疾病中的作用[J]. 药学研究， 2018， 37（04）：39-43.

柴世权. G蛋白偶联雌激素受体（GPER）在小肠缺血再灌注损伤中的保护作用及其机制[D]. 2018.

韩子伟， 朱立仓， 常越辰，等. 雌激素受体GPER通过抑制内质网应激减轻脑缺血再灌注损伤[J]. 生理学报， 2019， 071（004）：527-536.