急性脑梗死患者外周血Treg和NSE水平及与脑损伤程度的相关性研究

邹 芳，王金龙，杜 彪

各种原因致颅内血管不畅甚而导致血管发生闭塞，使血管供血区域发生梗死性病灶，即为急性脑梗死[1]。该病发病急，若患者在患病前就有动脉粥样硬化、血管狭窄、斑块形成等病变，将加速急性血栓的形成，进而引起脑梗死的急性发作，对患者脑部神经造成不可逆损伤[2]。随着近年来人们生活水平的不断提高，急性脑梗死患病率及病死率也逐渐升高[3]。外周血调节性T细胞(Treg)是一种可有效调节免疫活性并抑制炎性因子的细胞亚群，与脑梗死发生联系密切。神经元特异烯醇化酶(NSE)位于神经细胞中，参与神经的能量代谢，在一定程度上可有效反映神经系统损伤情况[4-5]。本研究通过对急性脑梗死患者外周血Treg、NSE水平测定，分析上述两种因子与患者脑部损伤程度的相关性。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2017年9月—2019年9月本院确诊的61例急性脑梗死患者作为研究组。纳入标准：①经临床及影像学检查且符合急性脑梗死诊断标准[6]；②临床资料完整，无脑梗死病史。排除标准：①存在严重心、肾、肝功能障碍或合并恶性肿瘤、危重并发症者；②伴代谢紊乱或免疫、血液系统疾病者；③近1个月内服用过干扰本研究指标结果的药物者；④临床资料欠缺者。另选择29例同时间段来我院体检的身体健康者作为对照组。研究组男38例，女23例；年龄48～74(67.92±10.23)岁；病程为2～30(23.21±10.15)h；合并高血压病27例，糖尿病22例，高脂血症19例。对照组男19例，女10例；年龄49～75(68.21±10.15)岁。两组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会审核通过。

1.2检测方法 抽取所有入组者清晨空腹静脉血3 ml，并加入乙二胺四乙酸抗凝处理，离心取血清。①将各受检者血清分别置入2只流式细胞试管内，每支150 μl，于管内分别孵育CD4-PE、FITC-CD25、PE-CD4、FITC-IgG 20 min后，分别加入磷酸盐缓冲液400 μl及红细胞裂解液400 μl混合摇匀，再避光孵育20 min，孵育完成后离心并再次使用磷酸盐缓冲液500 μl重悬，应用流式细胞仪(美国BD公司生产)检测Treg细胞数。②运用酶联免疫吸附法测定NSE水平，仪器为美国BioRad公司生产的BioRad450酶标仪，试剂盒购自德国罗氏公司，严格按说明书进行操作。

1.3观察指标及判定标准 ①对比两组外周血Treg数目、NSE水平；②对比不同梗死范围患者外周血Treg数目、NSE水平；③对比不同程度脑损伤患者外周血Treg数目、NSE水平；④分析急性脑梗死患者外周血Treg数目、NSE水平与脑损伤程度的相关性。梗死灶范围依据MRI或头颅CT检查结果，并据Pullicino公式=长×宽×MRI或扫描阳性层数/2，计算梗死灶体积。脑损伤程度根据美国国立卫生研究院卒中量表[7]判定，总分42分，轻型损伤<15分、中型损伤15～29分、重型损伤>29分。

2 结果

2.1两组外周血Treg数目、NSE水平比较 研究组外周血Treg数目明显少于对照组，而NSE水平明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。

表1 急性脑梗死及体检健康者外周血Treg数目、NSE水平比较

2.2不同梗死范围患者外周血Treg数目、NSE水平比较 61例急性脑梗死患者根据病灶大小进行亚组分析，其中病灶<4 cm3为小梗死亚组(27例)，4～10 cm3为中梗死亚组(20例)，≥10 cm3为大梗死亚组(14例)。外周血Treg数目大梗死亚组<中梗死亚组<小梗死亚组，NSE水平大梗死亚组>中梗死亚组>小梗死亚组，差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。见表2。

表2 不同梗死范围的急性脑梗死患者外周血Treg数目、NSE水平比较

2.3不同程度脑损伤患者外周血Treg数目、NSE水平比较 外周血Treg数目轻型亚组>中型亚组>重型亚组，NSE水平轻型亚组<中型亚组<重型亚组，差异均有统计学意义(P<0.01)，见表3。

表3 不同程度脑损伤的急性脑梗死患者外周血Treg数目、NSE水平比较

2.4急性脑梗死患者外周血Treg数目、NSE水平与梗死范围、脑损伤程度的相关性分析 经Spearman相关性分析，急性脑梗死患者外周血Treg数目与梗死范围、脑损伤程度呈负相关，而NSE水平与梗死范围、脑损伤程度呈正相关。见表4。

表4 急性脑梗死患者外周血Treg数目、NSE的表达与梗死范围、脑损伤程度的相关性分析

3 讨论

目前脑血管疾病已成为我国病死率、致残率极高的疾病，近年来随着人们生活压力的逐渐加大，该病的患病群体呈年轻化倾向[8]。急性脑梗死是在短时间内血管发生闭塞，导致相应脑组织发生坏死的一种疾病，而脑神经细胞作为人体中最娇嫩的细胞之一，一旦血供完全阻断持续8～10 min将对其造成不可逆性伤害[9]。

目前，临床对于急性脑梗死主要采用溶栓、抗栓、血管内治疗等手段治疗[10]。该病发病原因及发病机制较为复杂，有研究认为脑梗死的发生与动脉栓塞、动脉硬化、代谢性疾病及血液凝血机制等多种因素有关[11-12]。当脑血管发生病变，内膜损伤、破裂将释放大量的促凝血因子，加速血小板等血液成分发生沉着、聚集和黏附，同时血液中纤维蛋白原、脂蛋白、胆固醇等因子水平上升，导致血液黏度、凝固性增高，血流减慢，致使局部脑组织发生急性缺血症状[13-14]。故分析急性脑梗死患者血管内相关因子水平对该病的治疗及预防有重要意义。

外周血Treg是一种可调节免疫功能的T细胞亚群，有文献显示，该因子主要使Th1细胞分泌受到抑制从而减少炎性细胞产生，从而有效缓解血管内斑块性质改变、延缓颅内血管粥样硬化的发生，并减轻患者神经功能损伤[15-16]。有研究指出，外周血Treg数目减少与梗死发生存在紧密联系，急性脑梗死患者外周血Treg数目显著低于正常人[17]。而本研究结果验证了该观点，一定程度上说明当Treg数目减少，机体对免疫活性的调节减弱，血管内炎性因子大量释放促进血栓形成、动脉硬化等，从而导致脑组织缺氧缺血。NSE则是广泛存在于成熟神经内分泌细胞和神经细胞中的特异性蛋白，在脑组织中的含量及活性均远高于周围神经组织[18]。相关研究证明，正常脑组织NSE含量较低，一旦出现缺氧、缺血等病理改变使细胞膜受损后，脑脊液将释放大量NSE，致血脑屏障破坏，血中NSE水平大量增加[19-20]。本研究结果与上述研究一致，进一步说明NSE持续高水平可提示急性脑梗死的发生。

同时本研究发现外周血Treg与NSE的异常表达与脑组织损伤程度有关，梗死范围越大，外周血Treg数目就越低，NSE表达越高，提示上述因子的变化与脑组织损伤程度存在相关性。目前临床对于急性脑梗死的病变范围及脑组织损伤程度普遍是借助CT、MRI等影像学手段进行判断，且具有局限性，存在患者早期诊断失误的情况[21]。而本研究经患者血清学指标检测可有效判断病情，提示二者可作为急性脑梗死诊断、治疗及预后评估的指向性指标。

综上，急性脑梗死患者外周血Treg数目、NSE水平与其梗死范围及脑组织受损程度具有相关性，临床可将二者作为本病诊断、治疗及预后评估的参考指标。