黑龙江省东部地区CDH17和CDX2蛋白与胃癌的表达

陈瑞钢，杨彦民，尚进才，吴志全

(1.佳木斯大学临床医学院，黑龙江 佳木斯 154007；2.佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯 154003)

肝肠钙黏蛋白(liver-intestine cadherin,CDH17)和尾型同源框转录因子2(caudal-related homeobox transcription factor 2，CDX2)皆为肠源性标质物，共同表达于肠道上皮细胞并调控特异基因的表达以发挥黏附功能，参与肠道细胞的发育及其内环境稳态的维持乃至肠道肿瘤的发生发展等[1]。二者不表达于正常胃组织，但有研究发现，二者可表达于部分胃癌。其中，CDH17蛋白同胃癌联系的研究存在部分差异，或与不同地区间环境或遗传等因素存在部分关联。对此，为进一步了解二者同胃癌的关系，本研究通过检测黑龙江省东部地区CDH17和CDX2蛋白于胃癌及其癌旁正常组织的表达，进一步讨论CDH17和CDX2蛋白于黑龙江省东部地区胃癌发生发展中的关系，并为将来关于多地区乃至多人种同两蛋白跟胃癌关系的后续研究提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

收集2017～2019年黑龙江省东部地区佳大附属一院经初次手术、未行放化疗且病历完善患者的临床资料及其经病理确诊的胃癌与癌旁正常组织(距癌组织>3cm，病理求证无癌细胞浸润)各50例。男女分别为36例与14例；﹤60岁、≥60岁分别为17例与33例(41～80岁，平均62.7岁)；根据WHO肿瘤细胞分级分化标准，Ⅰ+Ⅱ、Ⅲ+Ⅳ期分别为20例与30例；T1+T2、T3+T4期例数分别为14例与36例；有、无淋巴结转移分别为34例与16例；高中、低分化分别为16例与34例。

1.2 试剂

鼠抗人CDX2单克隆抗体(阳性为棕黄色颗粒显色于细胞浆或细胞核)和二步法通用试剂盒(小鼠/兔超敏聚合物法检测系统)皆源自北京中杉；鼠抗人CDH17单克隆抗体(阳性为棕黄色颗粒显色于细胞浆或细胞膜)购自Santa Cruz Biotechnology。

1.3 IHC与分析

IHC参考一抗和二步法通用试剂盒说明书，将胃癌及其癌旁正常组织染色，置之于光学显微镜下以确认其病理、组织分型及CDH17和CDX2蛋白的表达。结果使用半定量计分表示：首先，随机取5个高倍视野，以染色细胞所占比及其染色深度分别作等级；最后，依据二者等级的乘积作为阴、阳结果的判断标准(<5%、5%～25%、26%～50%及>51%分别作0、1、2、3分；无色、浅黄色、棕黄色及棕褐色分别作0、1、2、3分。二者乘积值0～2分与>2分别作阴、阳结果)。

1.4 统计学方法

采用SPSS Statistics 25.0软件，用χ2检验，P﹤0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 胃癌与癌旁正常组织中CDH17和CDX2蛋白表达的比较

CDH17和CDX2蛋白于胃癌中的表达远高于癌旁正常组织，差异具统计学意义(P﹤0.05)，见表1。CDH17和CDX2蛋白在胃癌中的表达情况，见图1～2。

表1 胃癌与癌旁正常组织中CDH17和CDX2蛋白的表达情况(n=50)

图1 胃癌中CDH17蛋白的表达(×400)

图2 胃癌中CDX2蛋白的表达(×400)

2.2 不同临床病理类型的胃癌组织中CDH17和CDX2蛋白表达的比较

见表2。

表2 不同临床病理类型胃癌组织中CDH17及CDX2蛋白的表达情况

胃癌组织中，CDH17蛋白在不同肿瘤分期、浸润深度、分化程度及淋巴结转移情况的比较中，差异明显，具统计学意义(P﹤0.05)；而其在不同年龄与性别的比较中，差异不大，不具统计学意义(P﹥0.05)。胃癌组织中，CDX2蛋白在不同肿瘤分期、浸润深度及分化程度的比较中，差异明显，具统计学意义(P﹤0.05)；而其在不同年龄、性别与淋巴结转移情况的比较中，差异不大，不具统计学意义(P﹥0.05)。

2.3 胃癌中CDH17和CDX2蛋白表达的相关性

通过IBM SPSS Statistics 25.0 Spearman等级相关分析显示，胃癌组织中CDH17和CDX2蛋白的表达存在正相关性，差异具统计学意义(r=0.352，P﹤0.05)，见表3。

表3 黑龙江省东部地区胃癌组织CDH17同CDX2蛋白表达的相关性

3 讨论

胃癌往往隐匿发病，呈高度恶性，转移途径多，被确诊时，多已致机体陷入严重危机，缩短患者寿命，降低患者生存质量，使之生理乃至心理皆不堪重负，故对胃癌发生发展因素的不断深入探索并寻找针对性强的途径，依旧是当今努力方向。其中，致胃癌因素繁杂多样并存在部分交叉联系现象，且不同地区间环境或遗传等原因亦使之各因素与其影响存在不同程度的差异性[2]，故有针对性根据各地区独特环境乃至人群分布等特点，研究各地区胃癌发生发展因素及其相关性，将极有利于各地区间有针对性的对胃癌进行预防及诊治[3]。现有研究发现，CDH17和CDX2蛋白[4]作为特异性肠源性标志物，于部分胃癌组织中出现共表达现象，二者或许存在相关性。其中，CDH17蛋白于胃癌发展进程中的研究意见不尽相同，尚存争议。部分学者认为，CDH17蛋白是胃癌的抑制因素[5]。CDH17蛋白作为细胞间黏附分子，影响癌细胞恶性行为[6]，若其于癌中表达减少，将致癌细胞间黏附作用下降而使之癌细胞脱落并增加人胎盘生长因子同金属反应性转录因子-1的表达，促癌发展[7]；反之，若其于癌中表达增加，将抑癌发展。LiR等[8]联合胃癌临床病理关系与shRNA等技术，发现并提出CDH17蛋白与胃癌临床病理TNM分期、淋巴结转移情况与分化程度等存在负相关性。亦有学者认为，CDH17蛋白是胃癌发生发展的促进因素，其具备独立黏附能力且同E-钙黏蛋白存在异型反式作用，即便表达下降亦发挥黏附功能[9]。另外，CDH17蛋白高表达可直接解离 E-cadherin/catenin，通过Wnt信号通路[10]影响癌细胞增殖并减少癌细胞凋亡[11]；降低基质金属蛋白酶活性，阻滞G1期癌细胞，而促癌发展。Long ZW等[12]通过IHC、PCR等方法，发现并提出CDH17蛋白与胃癌的组织分型、肿瘤侵袭及淋巴结转移存在正相关性。至于CDX2蛋白，研究尚未透彻，目前发现其对胃癌既存在致癌作用亦存在潜在的抑癌性[13]。由此可见，关于CDH17同CDX2蛋白对胃癌的影响仍有待于我们从多因素考虑并进一步摸索个中联系。纵观两蛋白的研究，少有根据地区或人种的差异性而做相关研究的，不排除两蛋白存在地区性等差异。对此，本研究通过观察黑龙江省东部地区CDH17和CDX2蛋白于胃癌及癌旁正常组织的表达，进一步讨论CDH17和CDX2蛋白于黑龙江省东部地区胃癌发生、发展中的作用与相关性，并为将来关于多地区乃至多人种同两蛋白跟胃癌关系的后续研究提供重要依据。观本研究结果可见，黑龙江省东部地区CDH17和CDX2蛋白于胃癌的表达具正相关性并较之癌旁正常组织高，且二者的表达随其分化程度的增加而升高，差异具统计学意义(P﹤0.05)，由此推断，黑龙江省东部地区CDH17和CDX2蛋白或相互影响并协同促进胃癌的发生及胃癌细胞的分化。黑龙江省东部地区CDH17蛋白的表达同胃癌分期与浸润深度乃至淋巴结转移相关并随其进展而增多，而CDX2蛋白的表达同其分期及浸润深度相关并随其进展而减少，差异具统计学意义(P﹤0.05)，由此推断，黑龙江省东部地区CDH17蛋白对之进展期胃癌起促进作用而CDX2蛋白对之进展期胃癌起抑制作用。综上，CDH17和CDX2蛋白有可能成为黑龙江省东部地区胃癌早期诊断、转移预测、恶性程度与预后判断的常规检测指标之一，并为胃癌的治疗提供新的靶点，如通过二者的单克隆抗体或靶向干预以抑制胃癌细胞的发生及发展，改善预后。