冠心病病人血浆Klotho蛋白与炎性因子的相关性分析

冯模强，刘天虎，余朝萍，赵佐芳，杜 曦，龚厚文，蓝亚平

近年来，冠心病的发病率、病死率呈逐年上升和年轻化趋势，冠心病已成为心脏及循环系统疾病的首位死因。1997年有学者在类似于人类衰老的小鼠模型上发现一种抗衰老相关基因，并采用古希腊神话中纺织生命之线的女神名字Klotho命名[1]。Klotho的发现不仅为衰老的相关研究提供了新的思路，而且血浆Klotho蛋白与冠心病之间的复杂联系引起研究者的广泛关注，其与冠状动脉粥样硬化有着密切的联系。在冠心病的发病机制中，内皮损伤及炎症反应在冠心病的发生、发展过程中发挥着十分重要的作用，然而血浆Klotho蛋白在冠心病中的可能作用机制及其与炎症反应之间的关系目前还不清楚。本研究选择经冠状动脉造影证实的冠心病病人为研究对象，分析血浆Klotho蛋白与超敏 C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎性因子的相关性，探讨血浆Klotho蛋白在冠心病发生发展中的可能作用机制。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2018年3月—2019年1月在成都市郫都区人民医院拟行冠状动脉造影检查的病人为研究对象，使用标准Judkins技术对所有研究对象进行冠状动脉造影，冠状动脉造影结果由1位经验丰富的心脏病专家解释，确保其不知道参与者的临床信息，如果有1支以上的主要冠状动脉(前降支、回旋支、右冠状动脉)管腔直径狭窄≥50%，则建立冠心病诊断。病例排除标准：①现患感染性疾病、结缔组织、免疫系统及血液系统疾病、创伤等；②正在使用抗炎药物；③严重肝功能不全；④肾功能不全；⑤心功能不全[射血分数(EF)<50%]；⑥患有糖尿病；⑦恶性肿瘤和精神障碍病史；⑧近3个月内发生过心肌梗死，过去6个月内行冠状动脉旁路移植术或经皮冠状动脉介入治疗。经冠状动脉造影检查确诊的冠心病病人88例为冠心病组，男53例，女35例；年龄(54.96±8.74)岁；有吸烟史者占48.46%；体质指数(BMI)为(24.62±3.78)kg/m2。同期选取我院的健康体检者60名为对照组，男37名，女23名；年龄(50.65±7.49)岁；有吸烟史者占39.35%；BMI为(24.01±2.79)kg/m2。两组一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 临床资料收集 入组时采集研究对象吸烟史、年龄、身高、体重，检测血常规、血脂、血糖、糖化血红蛋白、肝肾功能。生化指标测定采用日本日立7600全自动分析仪，使用LH750血细胞分析仪(美国Beckman公司)检测血常规。

1.2.2 炎性因子指标检测 采集研究对象清晨安静空腹时静脉血5 mL，肝素钠抗凝，3 000 r/min离心10 min，提取血清，-80 ℃保存待测。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆Klotho蛋白、TNF-α、IL-6、IL-18水平。采用日本日立7600全自动分析仪检测hs-CRP水平。

2 结 果

2.1 两组血常规、血生化指标水平比较 冠心病组白细胞(WBC)及中性粒细胞(GR)水平均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。两组三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、糖化血红蛋白(HbA1c)及空腹血糖(FPG)水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)。详见表1。

表1 两组血常规、血生化指标水平比较 (±s)

2.2 两组血浆Klotho蛋白及炎性因子水平比较 与对照组相比较，冠心病组血浆Klotho蛋白水平明显降低，而TNF-α、IL-6、IL-18、hs-CRP水平明显升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。详见表2。

表2 两组血浆Klotho蛋白与炎性因子水平比较 (±s)

2.3 冠心病组血浆Klotho蛋白水平与炎性指标的相关性分析 冠心病组血浆Klotho蛋白水平与TNF-α、IL-6、IL-18、hs-CRP水平呈负相关(r值分别为-0.78、-0.64、-0.59、-0.60，P<0.05)。

3 讨 论

冠心病的主要病理基础是冠状动脉粥样硬化，曾有多种学说从不同角度阐述，但“炎症反应内皮损伤”学说仍是核心，认为各种危险因素对动脉内皮的损伤和脂质在动脉内膜层的积累会导致动脉壁的慢性炎症，逐渐形成粥样斑块。本研究中，冠心病组血浆炎性因子hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-18水平均明显高于对照组(P<0.05)；冠心病组血WBC、GR水平明显高于对照组(P<0.05)，而WBC及GR同样被认为是炎性反应指标，提示多种炎性细胞参与了冠心病的发生，更加证明冠状动脉粥样硬化过程中炎症反应发挥着重要的作用，与国内外学者相关研究报道[2-4]一致。大量研究结果表明，各种炎性因子损伤冠状动脉内皮细胞导致内皮功能紊乱，黏附于内皮的单核细胞易于迁移至内皮下并演变成为单核-巨噬细胞，单核-巨噬细胞具有摄取脂质等功能，最终演变成泡沫细胞，当泡沫细胞内摄取的脂质超过其清除能力时则会发生坏死崩解，从而导致急性临床症状发生。

Klotho蛋白属于一种抗衰老蛋白，主要在肾脏和脑脉络膜高表达。Klotho 基因缺失小鼠在出生后3～4 周即表现出衰老现象，包括生长停滞、血管钙化、动脉硬化、皮肤萎缩、骨量减少、听觉障碍、运动神经元变性等，在2 月龄时因衰老死亡[1]。而将外源性 Klotho导入 Klotho基因缺陷的小鼠体内后，其动脉粥样硬化程度减轻，寿命延长[5-6]。近年来，研究发现，在一些病理状态下，Klotho蛋白的表达也会发生变化，而且与疾病的发展和预后密切相关[7]。Lee等[8]通过研究急性脑梗死后3个月血浆Klotho蛋白浓度与脑功能预后的关系，结果显示脑功能预后良好病人血浆Klotho蛋白水平低于预后不良病人，提示增加的血浆Klotho蛋白浓度与急性缺血性脑卒中病人的功能恢复联系密切。Yu等[9]研究发现，在血液透析病人中血浆Klotho蛋白与颈动脉粥样硬化具有明显的相关性，血浆Klotho蛋白可能是血液透析病人动脉粥样硬化新的预测因子。

本研究显示，冠心病组血浆Klotho蛋白水平明显低于对照组(P<0.05)。有研究认为血浆Klotho蛋白在冠状动脉粥样硬化中具有重要作用，低血浆Klotho蛋白水平与冠状动脉粥样硬化呈正相关[10]。但是血浆Klotho蛋白在冠状动脉粥样硬化中的作用机制尚不清楚。研究表明，在动脉粥样硬化的形成过程中均有炎症反应的参与。hs-CRP作为肝脏合成及分泌的一种急性时相反应蛋白，其升高直接反映机体存在炎症及炎症活动，在冠状动脉粥样硬化病变的进程中起重要作用[11-12]。IL-6、TNF-α是由多种炎性细胞如单核细胞、巨噬细胞、成纤维细胞等分泌的炎性因子，可以促进炎症细胞的聚集和炎症递质释放，促使内皮细胞损伤及结构功能紊乱，进而导致动脉粥样硬化的发生发展[13-14]。IL-18同样是一种炎症促进因子，有研究显示IL-18可以促进载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化[15]。Zhang等[16]研究显示，在2型糖尿病病人中，IL-18与颈动脉内中膜厚度明显相关。本研究结果显示，与对照组比较，冠心病组血清中hs-CRP、IL-6、TNF-α和IL-18表达水平明显升高(P<0.05)。将冠心病组血浆Klotho蛋白与炎性因子进行Pearson直线相关分析发现，血浆Klotho蛋白水平与 TNF-α、IL-6、IL-18、hs-CRP呈负相关(P<0.05)。Klotho是一种生命保护因子，Klotho蛋白可以抑制冠状动脉粥样硬化。本研究中，Klotho蛋白在冠心病病人中表达减少，与促冠状动脉粥样硬化的炎性因子(TNF-α、IL-6、IL-18、hs-CRP)水平呈负相关。由此可以推测，Klotho蛋白的减少可能失去了对促动脉硬化炎性因子的抑制作用，使动脉粥样硬化继续发展恶化。

本研究存在一定的局限性，研究对象均为行冠状动脉造影的病人，不一定能代表整个人群，而且样本量较小，在后续的研究中需要扩大样本量继续研究。后续研究将进一步通过外源性Klotho蛋白干预冠状动脉粥样硬化，证实Klotho蛋白对炎性因子的抑制作用。