一例cisAB血型的鉴定及家系分析

罗随莉 杨小勇 周君 刘亚军

ABO血型具有多个亚型，对其进行正确定型是安全输血的重要前提和保证。本中心在本市无偿献血者ABO血型鉴定工作中发现罕见的ABO亚型标本1例，该标本正反不符，血型血清学方法初步判定为cisAB，采用分子生物学方法进行基因鉴定，并对其家系调查，分析血型遗传规律，现报道如下。

资料与方法

1 标本来源 先证者杨某（成员1），女，18岁，陕西西安人，汉族，2015年10月无偿献血200 mL。ABO血型鉴定：正定为AB型，反定型A型，正反定型不符。为确认该献血者血型，分析其血型遗传规律，经知情同意后，采集先证者弟弟（成员2）、妹妹（成员3）、父亲（成员4）、母亲（成员5）、爷爷（成员6）EDTA-K2抗凝外周全血各5 mL。

2 试剂与仪器 抗A、抗B血型定型试剂、抗A1和抗-H血型定型试剂（上海血液生物医药有限责任公司）；人ABO反定型红细胞试剂（北京金豪制药股份有限公司）；血液基因组DNA提取试剂盒（Roche，瑞士）；试验用引物由上海生工生物工程股份有限公司合成；Taq酶（Promega Corporation）；10×Buffer、Mgcl2、dNTP（Promega）；DL2000（TaKaRa）；PCR仪（Sensoquest Labcyle，德国）；台式离心机（KA-2200型，日本久保田）；恒温水浴箱（GFL，德国）。

3 ABO血型血清学方法 全血标本离心分离后，ABO正反定型试验均按照文献[1]中的方法操作。

4 ABO基因测序 使用DNA提取试剂盒从EDTA-K2抗凝外周血中提取基因组DNA，扩增成员1、2、3、4、5、6的ABO基因的第6、7外显子，引物见表1。PCR反应体系为：10×Buffer 5 µL，上、下游引物各0.1 µmol/L，TaqDNA聚合酶2.5 U ，样本DNA 3 µL，dNTP 0.1 mmol/L，ddH2O 35.5 µL，总体系50 µL；扩增条件为：95℃ 5 min；95℃ 30 sec、64℃ 40 sec、72℃ 60 sec 共33个循环；72℃ 5 min，4℃保存，各样本exon 6、exon 7扩增产物送上海生工生物工程股份有限公司做测序。

表1 ABO基因第6、7外显子扩增引物

结 果

1 ABO血型血清学结果 成员1～6的ABO血清学结果见表2，其中成员1、2、3与4正反定型结果不符，ABO血型为AB弱表型，血清中存在IgM-B抗体，成员5为O型，成员6为A弱B弱表型，血清中存在IgM-A、B抗体。

2 ABO基因分析结果 各成员ABO基因学结果见表2，测序结果显示成员1、2、3、4及6的Exon7均存在c.467 C>T和c.803 G>C的突变（图1），确定成员1的基因型为：ABO*cisAB.01/O.01.02，成员2、3、4为ABO*cisAB.01/O.01.01，成员5为O.01.01/O.01.02，成员6为ABO*cisAB.01/B.01。家系调查结果见图2。

表2 各家系成员ABO血型结果

讨 论

cisAB表现型于1964年报道发现[2]，是一种独特的ABO表型，表现在同一等位基因的编码产物兼具A和B特异的糖基转移酶酶活性，在遗传上表现为cisAB血型与O型婚配生出AB型和O型子女。cisAB在人群发生频率非常低，大约1/170 000～580 000[3]，cisAB表型在日本人群中大约为0.00 001 416[4]。cisAB血清学特征随个体、家系而异[5]。cisAB 血型易与B（A）血型混淆[6]，用常规血型血清学检测，均易被误判为AB型或B型。cisAB的A抗原通常被当做A2，但是cisAB细胞的A抗原表达量一般比A2B表达多，B抗原总是表达很弱，血清中有弱抗B，并且H抗原水平很高，大致相当于A2细胞的H水平[7]。分子背景检测发现，cisAB主要是在ABO基因的第6和第7外显子出现突变，目前国际上报道了9种cisAB的等位基因（ftp://ftp.ncbi.nlm.nih.gov/pub/mhc/mhc/Final%20Archive），包括ABO*cisAB.01-AB.08和ABO*cisAB.01-ver，主要是在ABO基因的第6和第7外显子出现突变[8]。2003年，许先国等[9，10]首先报道在中国人群中存在ABO*cisAB.01等位基因，随后多个地区发现中国人群ABO*cisAB.01等位基因。其他类型的基因型相对较少[11,12]。

本案例通过家系调查和分析，证实了cisAB可以稳定遗传，并与A/B抗原的表达有密切的关系。家系成员1血清学特征是红细胞上 B抗原表达较弱，血清中有弱抗B，H物质与O细胞所含H物质相当，与cisAB表型特征相符。成员2、3、4、6血清学特征却不完全符合上述特征，成员2、3、4红细胞上B抗原凝集强度与正常B抗原无明显差异，但血清中有弱抗B；成员6红细胞上A、B抗原的表达与正常A、B抗原相同，但其A1抗原不表达，并且血清中有弱抗A1及抗B抗体；出现上述的情况，可能为等位基因增强效应导致（ABO*O.01.01和O.01.02）[13,14]，也有可能是由于ABO基因的表达以及糖抗原的形成受多种因素影响，包括底物、生理状态、饮食习惯以及ABO基因的表达的糖基转移酶在功能活性和量存在差异，故表现在血清学上可能出现同一家系中不同cisAB的特征表型[15]。

cisAB血型在日常血型检验工作中很容易漏检，若在进行ABO血型血清学试验时，忽视反定型试验就容易出现血型的误判。因此建议在血型血清学试验中应该注意反定型试验的重要性，当ABO血型正反定型不符或者是反定型试验中出现弱凝集，怀疑为ABO亚型时，可以借助家系调查和分子生物学做进一步鉴定。

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