黎辣根的质量标准研究

郑晓阳 黄文峰 何凤兰* 刘丽燕

1.广东省阳江市人民医院，广东 阳江 529500；2.广东省阳江市检测检验中心，广东 阳江 529500

黎辣根RhamnuscrenataSieb.et Zucc.是鼠李科鼠李属植物长叶冻绿的根，又名钝叶鼠李根[1]、长叶鼠李根[1]、苦李根、黎罗根[2]，黎辣根具有清热利湿、杀虫解毒的作用，临床上治疗疥疮疔疮、癞癣、麻风、蛔虫病等症状。有文献收载其植物形态图[2]，但没有其药材性状、饮片性状、显微鉴别、薄层色谱鉴别以及含量测定记载。本研究对黎辣根进行质量标准研究，现将结果报告如下。

1 仪器与材料

1.1 仪器 DIONEX UltiMate 3000型高效液相色谱仪，水浴锅，电子天平及各种玻璃仪器。

1.2 材料 黎辣根饮片购买于阳江市江城区杏春药店，取其干燥根粉碎(过40目药典筛)，测得其水分为12.5%。

2 植物形态与药材性状

2.1 植物形态[1]为落叶灌木或小乔木。高7 m。幼枝带红色，被毛，后脱落。叶互生，叶柄长4～12 cm，被密柔毛。倒卵状椭圆形、披针状椭圆形或倒卵形，长4～14 cm，宽2～5 cm，先端渐尖或短急尖，基部楔形或钝，边缘具锯齿，上面无毛，下面被柔毛或沿脉被柔毛。聚伞花序腋生，总花梗长4～15 mm，被柔毛；花单性，异株，淡绿色或紫色；花萼5裂，裂片三角形与萼管等长，外面有微毛；花瓣5，近圆形，先端2裂；雄蕊5，与花瓣等长；子房上位，球形，无毛，3室，花柱不分裂，柱头不明显。核果球形，成熟时黑色或紫黑色，长5～6 mm。种子青灰色，无沟。花期5～8月，果期8～10月。见图a 植物形态图(幼苗)和图b 植物形态图。

图a 植物形态图(幼苗) 图b 植物形态图

2.2 药材性状 外表面棕褐色或黄褐色。有棕皱纹及横裂纹。断面皮部粗糙，黄褐色；木部黄色或淡黄色。质坚硬，不易折断。见图c黎辣根药材和图d 黎辣根饮片。

图c 黎辣根药材 图d 黎辣根饮片

3 显微鉴别

3.1 根粉末显微特征 石细胞长梭形，密集成团，胞腔狭小，纹孔明显，见图e；红棕色块类圆形，重叠集结成团状，见图f。

图e 根粉末显微特征1 图f 根粉末显微特征2

3.2 根横切面显微特征 根皮部含有较多红棕色团块，见图f；木质部细胞类圆形，放射状排列，髓部不明显，见图g。

图g 根横切面显微特征

3.3 茎粉末显微特征 纤维成束，绳状，纤维束上嵌有密集的草酸钙方晶，形成晶纤维，见图h；石细胞成群，壁厚，胞腔细小，纹孔明显，见图i。

图h 茎粉末显微特征1 图i 茎粉末显微特征2

4 薄层鉴别

取本品粉末2 g，加甲醇60 mL，40 ℃加热回流45 min，滤过，滤液蒸干，残渣加2.5 mol/L硫酸溶液10 mL，水浴加热30 min，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次10 mL，合并三氯甲烷提取液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，即得供试品溶液。分别取大黄素对照品、大黄素甲醚对照品，加甲醇制成每1 mL各含 1mg的溶液，即得对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)[3]试验，分别吸取供试品溶液5 μL、大黄素对照品和大黄素甲醚对照品溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～6 0℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下观察，结果见图j。另置于氨蒸气中熏后，斑点变为红色，结果见图k。

图j 薄层鉴别结果1 图k 薄层鉴别结果2

5 含量测定

5.1 色谱条件 与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸溶液(80∶20)为流动相，流速：l mL/min；检测波长为254 nm；柱温：30 ℃。

5.2 对照品溶液的制备 分别精密称取大黄素10.63 mg，加甲醇溶解，使配成每1 mL含大黄素20 μg的对照品溶液，即得。

5.3 供试品溶液的制备 精密称取3批粉碎过40目药典筛的黎辣根粉末各2 g，分别加入甲醇20 mL，40 ℃水浴加热回流提取45 min，过滤，滤液蒸干，用甲醇适量使溶解，移至10 mL容量瓶，过0.45 μL微孔滤膜，即得。

5.4 线性关系 考察分别精密吸取同一对照品溶液8.504 μg/mL、17.008 μg/mL、25.512 μg/mL、34.016 μg/mL、42.520 μg/mL，注入液相色谱仪中，测定峰面积。以大黄素对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为y=3.7079X，r=0.999(n=5)。表明大黄素对照品线性关系良好，结果见表2、图L。

表2 进样浓度与峰面积表

图L 标准曲线图

5.5 精密度试验 取同一对照品溶液，重复进样6次，每次10 μL,测定大黄素峰面积，测定结果RSD=0.62%，表明该方法精密度良好，结果见表3。

表3 精密度试验表

5.6 重复性试 验取同一批号供试品，按供试品溶液制备方法制备6份供试液。按照正文含量测定方法，测定每份样品中大黄素的含量，结果RSD=1.71%(n=6)，表明该方法重复性良好，结果见表4。

表4 重复性试验表

取精密度试验的对照品测得的结果参与重复性试验的计算,结果见表5。

表5

5.7 稳定性试验 以选定浓度(mg/mL)为准的供试溶液, 分别在0、1、2、4、6 h时间段内测定峰面积。

5.8 加样回收率 试验取已知含量为0.64 mg/g的黎辣根，打成细粉(过3号筛)，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，共6份，再分别精密加入大黄素对照品溶液(溶剂为甲醇溶液，浓度为0.6505 mg/mL)2.5 mL，称定重量，然后按正文含量测定方法供试品溶液制备项下的方法操作测定，记录色谱图，考察本方法的加样回收率，加样回收率为97.9%，RSD为0.31%，表明该方法回收率良好。结果见表6。

表6 加样回收率试验表

5.9 样品含量测定

5.9.1 测定 分别吸取3批供试品溶液和大黄素对照品溶液各5 μL，注入高效液相色谱仪中，测定，计算，即得。

5.9.2 结果 3批黎辣根大黄素的含量分别为0.4216mg/g、0.4290 mg/g、0.4285mg/g。

6 讨 论

薄层色谱斑点清晰、分离度好；高效液相含量测定专属性强，分离度和重复性好。通过试验研究，确定以甲醇为溶剂，40 ℃水浴加热回流提取45 min为含量测定中最优的样品提取方法。本研究方法准确可靠、重复性好，创新性强，可用于黎辣根的质量控制。