滴阴炎妇科洗液制备工艺优选及质量标准研究

刘 军 李文静 柳 茜 刘本臣 董亚楠 张丽媛

宁夏回族自治区银川市中医医院,宁夏 银川 750001

滴虫性阴道炎是妇科领域常见病，其病情缠绵，不易速愈，且常并发月经不调、闭经、不孕等疾病。滴阴炎妇科洗液的中药成分(由苦参、蛇床子、白鲜皮、仙鹤草等)具有清热燥湿、杀虫的功效，用于治疗白带增多、外阴瘙痒等症，疗效显著[1]。笔者前期采用高速离心及无机陶瓷膜超滤技术对我院使用30余年，组方精当的院内制剂“滴阴炎熏洗液”进行工艺改进，改善了原制剂澄清度不高的问题[1]。氯己定属于双胍类化合物，有较强广谱抑菌、杀菌作用且毒性小，性质稳定，常被作为消毒有效成分广泛应用于消毒产品中，一般用于手、皮肤和黏膜的消毒[2-6]。

本研究拟在前期研究基础上将葡萄糖酸氯己定(CHG)与原中药制剂复配二次开发为“消准字号”产品并建立质量标准，扩大其杀菌范围，达到较高效能消毒剂水平，达到服务更广泛人群及产品产业化目标。

1 材料

1.1 仪器 JW-T-1.OB-316陶瓷膜设备(江苏久吾高科技股份有限公司，膜材料Al2O3，膜面积0.5m2；离心泵，Q=5.8 m3/h)、XU12WZT-1C 型光电浊度仪(北京中西远大科技有限公司)，立式自动压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂)，电子天平(METTLER TOLEDO*S205)、磁力搅拌器IKARCT digital(德国IKA)，DHG-6050 型真空干燥箱(上海一恒科技有限公司)，卧式冷藏冷冻转换器(Haier)BC/BD-100HEGW、BPC-150F生化培养箱(上海一恒科技有限公司)、MJ-1500-II霉菌培养箱(上海一恒科技有限公司)、定性滤纸片(5 mm圆形)、无菌棉拭子、游标卡尺、微量移液器(10～100 μL，艾本德上海国际贸易有限公司)；

1.2 试药 试验菌种为大肠埃希菌(CMCC(B)44102，批号3a28-1)、金黄色葡萄球菌(CMCC(B)26003，批号：5a31-2)、白色念珠菌(CMCC(F)98001，批号2a17-2)；营养琼脂培养基(190328)、沙堡琼脂培养基(161219)、胰蛋白胨大豆琼脂培养基(190414)；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 处方工艺优选

2.1.1 原液除杂工艺优选 相比于传统的醇沉工艺，超滤技术是精制滴阴炎熏洗液的一种有效方法，超滤技术的优势在于有效成分转移率高，生产周期短，省去大量乙醇溶剂。本文前期以蛇床子素、氧化苦参碱的转移率为指标，采用1∶8生药浓度滴阴炎提取液以孔径为500 nm的Al2O3无机陶瓷膜进行滴阴炎熏洗超滤液制备[1,4]。

2.1.2 增溶剂优选 氯己定难溶于水，多采用溶解度好的胍盐，如醋酸氯己定、盐酸氯己定和葡萄糖酸氯己定。预试验发现，在滴阴炎超滤液中直接加入0.2%CHG后溶液立即变浑浊，故需添加增溶剂来改善溶解度。聚山梨酯毒性小、无刺激性，对许多有机药物都有较好的增溶效果，且对药物在皮肤和黏膜的吸收具有一定的促进作用[7-8]，泊洛沙姆对皮肤黏膜无刺激性和过敏性，能增强难溶性药物的溶解度，可供肌肉、皮下、静脉注射应用。精密称取20 mL超滤液，分别用吐温-80、泊洛沙姆108、泊洛沙姆407作为增溶剂，45 ℃、500 r/min搅拌至溶解，加入一定浓度CHG，搅拌均匀静置。同一浓度下，12 h后观察溶液物理变化(如颜色变化、澄清度变化)，发现吐温80的增溶澄清效果优于泊洛沙姆系列，故选择吐温80为增溶剂。采用单因素考察，加入1%、2%、3%、4%吐温-80，以CHG含量为指标，按照“2.2.1”测定，优选吐温-80最佳比例。结果见讨论。

2.2 含量测定

2.2.1 液相条件：色谱柱: Agilent-C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm); 流速: 1.0 mL/min; 柱温:28 ℃; 进样量: 10 μL；流动相: 0.02 moL/L磷酸二氢钾水溶液(磷酸调pH至2.5)-乙腈(65∶35); 波长:254 nm。

2.2.2 对照品母液制备：精密称取醋酸氯己定对照品适量，加80%乙醇制成1.721 mg/ml的对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备：精密量取滴阴炎超滤水液(生药比1∶8)20 mL，加入吐温-80、CHG适量，完全溶解后，加入适量保湿剂β-葡聚糖，搅拌均匀后，用乳酸调至pH值3.7～4.5，定容至25 mL量瓶，待用。

2.2.4 阴性溶液的制备: 精密量取20 mL水溶液代替滴阴炎超滤液，按”2.2.3”项下的方法操作制备得阴性对照溶液。

2.2.5 标准曲线制定：取“2.2.2”对照品母液0.1、0.25、0.5、0.6、0.8、0.9 mL，用80%乙醇定容至10 mL量瓶，按“2.2.1”液相条件测定得线性回归方程Y=23.129X+2.9009，r2=0.9999(线性范围在17.21～154.8 μg/mL)；

2.2.6 专属性实验：分别取对照品、供试品及阴性对照溶液，按“2.2.1”项下的色谱条件分析。结果表明：供试品与对照品在相同的保留时间有相同色谱峰，且分离度良好为6.03(大于1.5)，其理论塔板数为8535。阴性无干扰。结果如图1所示。

A.空白溶液 B.阴性对照品液 C.醋酸氯己定对照品 D.供试品溶液

2.2.7 样品制备与测定 样品前处理优化：精密吸取洗液1 mL，加入0 mL、0.2 mL、0.5 mL、1 mL、2 mL、3 mL、5 mL的1 moL/L H2SO4后再用纯水定容至25 mL，结果显示当加入1 moL/L H2SO4≤2 mL时，随着加入量的增加，测得CHG有所增加；当加入1 moL/L H2SO4>2 mL之后，CHG的峰面积无明显变化；故选在滴阴炎妇科洗液样品前处理时先加入2 mL的1 moL/L H2SO4。结果如图2所示。

图2 1 moL/L H2SO4不同加入量对GHG含量的影响

样品制备与测定:精密吸取 1 mL滴阴炎妇科洗液于25 mL 量瓶，加入2.0 mL 的1 moL/L H2SO4溶液，摇匀，加80%乙醇稀释至刻度，超声(40HZ)15 min，0.22 μm 滤膜滤过后，照“2.2.1”项法进行液相测定。计算公式:C样=(C对×A样/A对)×稀释定容倍数×1.43。三样品中葡萄糖酸氯己定含量为0.199% g/mL。

2.3 抑菌试验 参照《消毒技术规范》2002年版中“2.1.8.2”[13]，以抑菌圈的大小为指标，采用滤纸片法考察“2.2.”滴阴炎抑菌制剂对易引起阴道炎的3种致病菌(白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌)的抑菌能力。结果见图3及表1。

A.金黄色葡萄球菌 B.大肠埃希菌 C.白色念球菌

表1 滴阴炎妇科洗液对3种致病菌的对应抑菌结果

3 讨论

3.1 增溶剂的选择 葡萄糖酸氯己定为阳离子表面活性剂，在皮肤的消毒上具有持续抗菌活性[5]。碱性物质如肥皂、阴离子表面活性剂、某些银离子药物能降低其杀菌效果[6]。吐温-80 是带有双官能团阴-非离子复合型表面活性剂，具有阴离子和非离子型表面活性剂的双重特点，在水中有良好的溶解性，同时有较好的起泡能力，抗硬水、无机盐能力，且对人体无刺激性反应，对CHG有良好的促溶作用，是较理想的增溶剂[8]。本研究以CHG含量及溶液澄清度为评价指标对吐温-80、泊洛沙姆407加入量(1%、2%、3%、4%)进行考察，结果显示：吐温-80不同比例对应的CHG峰面积分别为(865.9、944.2、1277.8、1527.8)，表明加入吐温-80的滴阴炎妇科洗液中2%～3%之间溶解度明显增加，而3%～4%溶解度增加不明显。而泊洛沙姆407不同比例对应的CHG峰面积分别为(1326.8、1310.2、1350.7、1387.0)，12 h后观察溶液物理变化(如颜色变化、澄清度变化)，发现吐温80的增溶澄清效果优于泊洛沙姆系列。综合考虑澄清度和性状，选择加入3%吐温80。

3.2 CHG含量测定及抑菌试验 本研究对比了紫外分光光度测定与高效液相测定方法，结果表明紫外分光光度计测定结果偏高，且可能由于中药成分在同一波长对其有吸收，测定不稳定且偏高。而HPLC测定灵敏度及专属性高，较为稳定，更适合滴阴炎妇科洗液的含量测定，故选用HPLC测定方法对CHG进行跟踪并作为质量控制标准之一。抑菌环实验显示滴阴炎妇科洗液对3种致病菌均有抑菌作用，但对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌抑菌效果优于白色念珠菌。

滴阴炎妇科洗液适用于妇科疾病预防及治疗，本研究创新性地将传统滴阴炎熏洗液经超滤处理后二次开发妇科洗液，具有良好的市场应用和开发价值。后期将进一步对该洗液进行阴道黏膜刺激等研究，以期将其开发为消毒产品，扩大其使用范围。