有核红细胞计数在不同全自动血细胞分析仪中的应用及评价

孟 欣，王苗苗，王 刚，王晓琴，张 宁

(西安交通大学第一附属医院检验科，陕西西安 710061)

有核红细胞(NRBC)是由于骨髓中未完全成熟红细胞因为各种原因而出现在外周血液中。新生儿外周血中可检测到数量不等的NRBC，随着年龄的增长在外周血中迅速消失[1]。健康成人外周血中一般无NRBC，若出现则提示一种病理状态，例如血液系统恶性肿瘤、机体缺氧、急性大量失血、增生性贫血、骨髓损伤、骨髓纤维化、感染等[2-3]。因此，外周血中NRBC准确识别并精确计数对疾病判断有重要的意义。但是，由于NRBC含有细胞核，与淋巴细胞形态学特点相似，经典库尔特原理血细胞分析仪计数会将有核红细胞计入白细胞造成白细胞计数(WBC)假性升高。新一代自动化血细胞分析仪通过WNR或WNB等通道，利用荧光染色流式细胞原理对细胞核进行精确辨别，不需要额外试剂和附加成本，从而准确识别和计数NRBC，对疾病诊断和鉴别诊断具有重要的临床价值；同时，其可以对WBC进行自动校正，避免NRBC干扰导致WBC和白细胞分类异常。不同品牌、型号的血细胞分析仪对NRBC的识别和校正能力是否有差异，以及在何种条件下需要通过人工复检血涂片对NRBC精准识别和计数是需要关注的问题。在临床实践中发现，不同品牌相关型号的血细胞分析仪NRBC计数有差异，同时与人工显微镜推片镜检也有不同程度的偏差。本研究对本院使用的两种系统血细胞分析仪NRBC计数进行评价并验证，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集本院门诊、住院患者血液标本共计13 156份，采用乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝全血，并进行分析和推片。13 156例患者中，男7 175例，女5 981例，年龄(42.22±20.20)岁。标本采集后4 h内完成仪器检测分析，其中208例患者标本经推片镜检后确认NRBC阳性。

1.2方法 采用Sysmex XN-9000全自动血细胞分析仪(简称XN-9000)和Mindray BC-6800 Plus全自动血细胞分析仪(简称BC-6800 Plus)及配套校准品、质控品和试剂。严格按照科室标准操作程序(SOP)规定进行仪器校准，并进行精密度、携带污染率及线性等性能验证。Sysmex SP-10全自动推片染片机使用BASO瑞氏染液，推片镜检采用奥林巴斯CX-21光学显微镜。NRBC分别使用以下2种计数方法。(1)仪器法：XN-9000 和 BC-6800 Plus均按科室SOP操作，严格执行每日室内质控并确保结果在控。XN-9000和BC-6800 Plus模式选择： CBC + DIFF 模式，仪器自动计数NRBC/100WBC，计算NRBC#，并报告校正后WBC。(2)显微镜计数法：所有收集的标本均使用Sysmex SP-10 全自动推片染片机推片染色完成后，由2名形态学检验经验丰富的检验人员使用显微镜计数瑞氏染色血片中200个白细胞时所见到的NRBC数量，换算成NRBC占有核细胞的百分比(即NRBC%)作为NRBC计数参考方法(白细胞数量少时可计数≤100 WBC)。(3)WBC校正：根据推片显微镜计数的NRBC%，校正两个仪器的WBC。统计两个仪器检测的NRBC/100WBC、NRBC#、人工换算后的仪器NRBC%，以及WBC校正前、后的总数。 根据NRBC推片镜检结果高、中、低将其分为3组，观察随着NRBC结果的变化，XN-9000和BC-6800 Plus全自动血细胞分析仪WBC仪器校正、人工校正及NRBC结果的差异。

2 结 果

2.1两种血细胞分析仪检测NRBC的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值 以推片显微镜镜检计数法为NRBC检测“金标准”，XN-9000全自动血细胞分析仪NRBC计数的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为93.75%、99.70%、83.33%、99.90%(表1)，BC-6800 Plus全自动血细胞分析仪NRBC计数的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为79.81%、99.92%、93.79%、99.68%(表2)。

表1 XN-9000检测NRBC结果(n)

表2 BC-6800 Plus检测NRBC结果(n)

2.2XN-9000检测与推片镜检NRBC计数结果的相关性和一致性比较 以推片镜检计数NRBC阳性的208份标本分析XN-9000与推片镜检NRBC结果相关性，结果显示呈正相关，XN-9000检测值(Y)对推片镜检(X) NRBC的直线回归方程为Y=0.659X+0.408，r=0.966，P<0.05，见图1。Bland-Altman偏移散点图分析显示，XN-9000和推片镜检NRBC结果一致性界限95%CI为-6.94～9.69，偏差为1.36，偏差SD为4.24，3.37%(7/208)的点在一致性界限95%CI之外。随着NRBC均值的增大，散点的分布呈现分散状态，说明两种方法当NRBC结果较大时差异较大，见图2。

图1 XN-9000与推片镜检计数NRBC相关性

图2 XN-9000与推片镜检计数NRBC Bland-Altman偏移散点图

2.3BC-6800 Plus与推片镜检计数NRBC结果相关性和一致性比较分析 以推片镜检计数NRBC阳性的208份标本分析BC-6800 Plus与推片镜检NRBC结果相关性，结果显示呈正相关，BC-6800 Plus检测值(Y)对推片镜检(X) NRBC的直线回归方程为Y=0.711X+0.301，r=0.963，P<0.05，见图3。Bland-Altman偏移散点图分析显示，BC-6800 Plus和推片镜检NRBC结果一致性界限95%CI为-6.40～8.81，偏差为1.21，偏差SD为3.88。随着NRBC均值的增大，散点的分布呈现分散状态，说明当NRBC较大时两种方法检测结果差异较大，见图4。

图3 BC-6800 Plus与推片镜检计数NRBC 相关性

图4 BC-6800 Plus与推片镜检计数NRBC Bland-Altman偏移散点图

2.4两种血细胞分析仪检测同一标本各参数结果比较 XN-9000和BC-6800 Plus全自动血细胞分析仪根据NRBC计数结果对WBC结果进行自动校正，观察两个系统WBC相关结果的差异。208份标本经两种血细胞分析仪同时检测发现，WBC校正前、WBC仪器校正、WBC人工校正结果和NRBC结果差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 XN-9000 和 BC-6800 Plus两个系统检测各参数差异比较

2.5不同水平NRBC标本两个系统各参数结果比较 当镜检NRBC<10%，WBC、WBC仪器校正结果、WBC人工校正结果、仪器NRBC计数在2个系统中差异无统计学意义(P>0.05)。当镜检NRBC>10%，WBC、WBC仪器校正结果在2个系统中差异无统计学意义(P>0.05)，而WBC人工校正结果、仪器NRBC计数差异均有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 XN-9000 和 BC-6800 Plus两个系统NRBC不同水平各参数差异比较

2.6NRBC仪器法与推片镜检结果比较 根据NRBC推片镜检结果与仪器计数结果差值大小，观察WBC校正前、仪器校正、人工校正及NRBC各参数结果的差异。XN-9000全自动血细胞分析仪NRBC镜检小于仪器结果与镜检大于仪器结果比较，WBC、WBC仪器校正结果、WBC人工校正结果、NRBC计数差异均有统计学意义(P<0.05)。BC-6800 Plus全自动血细胞分析仪NRBC镜检小于仪器结果与镜检大于仪器结果比较，WBC校正前、WBC仪器校正结果差异有统计学意义(P<0.05)，而WBC人工校正结果、NRBC计数差异无统计学意义(P>0.05)。见表5。

表5 XN-9000 和 BC-6800 Plus两个系统NRBC仪器与推片镜检结果比较

3 讨 论

XN-9000使用Fluorocell WNR 试剂对白细胞、NRBC 的核酸和细胞器进行荧光染色，根据散射光和侧向荧光强度对有核红细胞进行区分，并可将NRBC计数作为血液分析常规参数进行报告[4-5]。BC-6800 Plus则采用荧光染色WNB通道来实现NRBC计数和WBC[6-7]。

由于NRBC在健康人群外周血中罕见，而且常常被误认为是白细胞，导致WBC偏差[8]。根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)的建议，要根据质量需求进行推片镜检，确保NRBC准确计数。通常情况下，仪器以NRBC/100WBC结果作为其报告方式，通过校正公式校正WBC：校正后的WBC=校正前WBC×100/(100+NRBC)[9]并计算NRBC绝对计数。本研究通过对13 156例患者血液标本筛选，推片镜检发现208份标本可见数量不等NRBC。以推片镜检计数为NRBC检测“金标准”[10]，XN-9000 NRBC 计数的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为93.75%、99.70%、83.33%、99.90%。许诚笛等[11]研究显示，XN-9000检测NRBC的灵敏度为89.5%，特异度为99.6%，与本研究接近。王也飞等[12]的研究报道XN-1000血液分析仪检测NRBC的灵敏度为60.0%，特异度为95.7%，与本研究差异较大，分析原因可能是其纳入样本量过少。BC-6800 Plus NRBC 计数的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为79.81%、99.92%、93.79%、99.68%。XN-9000与推片镜检NRBC结果呈正相关(r=0.966，P<0.05)，与朱建锋等[13]研究结果相似。BC-6800 Plus与推片镜检NRBC结果也呈正相关(r=0.963，P<0.05)。结果提示两个检测系统均与推片镜检的结果相关性良好。

本研究中，Bland-Altman偏移散点图分析显示，XN-9000和推片镜检NRBC结果一致性界限95%CI为-6.94～9.69，BC-6800 Plus和推片镜检NRBC结果一致性界限95%CI为-6.40～8.81，随着NRBC均值的增大，散点的分布呈现分散状态，说明当NRBC数量变大以后，仪器计数与推片镜检结果差异较大，需要通过手工镜检对NRBC进行人工校正，确保检测结果准确可靠[14]。

推片镜检阳性的208份标本经XN-9000 和Mindray BC-6800 Plus血细胞分析仪同时检测，WBC、WBC仪器校正、WBC人工校正结果和NRBC结果差异无统计学意义(P>0.05)，说明两个不同系统各参数总体之间检测能力相当，消除不同系统之间的差异对后续研究结果的影响。本研究进一步探讨了不同水平NRBC计数时两个检测系统的差别，结果显示当镜检NRBC<10%，WBC、WBC仪器校正结果，WBC人工校正结果，仪器NRBC计数在两个系统中差异无统计学意义(P>0.05)，说明当NRBC较少时，外周血液中的NRBC数量对WBC仪器计数影响很小。当镜检NRBC>10%，WBC、WBC仪器校正结果在两个系统中差异无统计学意义(P>0.05)，而WBC人工校正结果、仪器NRBC计数差异均有统计学意义(P<0.05)，说明当NRBC计数较高时，外周血中的NRBC数量对WBC仪器计数影响较大，需要人工推片镜检进行确认。

本研究根据NRBC推片镜检结果与仪器计数结果差值大小，观察WBC校正前、仪器校正、人工校正及NRBC各参数结果的差异。结果显示，XN-9000 NRBC镜检小于仪器结果与镜检大于仪器结果比较，WBC、WBC仪器校正结果、WBC人工校正结果、NRBC计数差异均有统计学意义(P<0.05)，说明在WBC和NRBC低值时，仪器计数明显高于人工计数，可能与仪器计数细胞数量多，仪器法的灵敏度相对较高，人工推片镜检计数细胞数量少有关。同时，由于血涂片上NRBC分布区域的差异，导致显微镜检查结果容易偏差。另外，当外周血液中出现小淋巴细胞、固缩细胞等，或者其他非特异的因素导致仪器出现假性升高的结果。当WBC和NRBC高值时，人工计数明显高于仪器计数，分析原因系增高的NRBC主要为晚幼红细胞和较多的中幼红细胞，而仪器法将中幼红细胞误分类为淋巴细胞[15]。顾梅秀等[2]研究认为，XN-9000镜检法普遍低于仪器法结果。而本研究结果显示，当NRBC低值时镜检小于仪器结果，当NRBC高值时镜检大于仪器结果。BC-6800 Plus全自动血细胞分析仪NRBC镜检小于仪器结果与镜检大于仪器结果比较，WBC、WBC仪器校正结果差异有统计学意义(P<0.05)。BC-6800 Plus计数NRBC镜检大于仪器结果高于镜检小于仪器结果，差异无统计学意义(P>0.05)，提示无论NRBC计数高低，人工镜检与BC-6800 Plus识别能力相当。

4 结 论

自动化血细胞分析仪快速检测NRBC能校正其对白细胞计数的干扰，同时对临床疾病的鉴别诊断有重要的指导意义，但是当体内NRBC数量偏高时，仪器的识别和自动校正与推片镜检结果一致性差，需要通过提高NRBC识别能力确保结果准确、可靠。