老年冠心病病人循环lncRNA UCA1表达及其与预后的关系探讨

李文杰，张 方，李晓兰

冠心病(coronary heart disease，CHD)是冠状动脉粥样硬化性心脏病的简称，是老年人最常见的心脏病。高血脂、高血压、吸烟是老年冠心病的危险因素，冠心病的临床表现为心律失常、心绞痛、心肌梗死、心力衰竭和猝死，严重影响老年人的身体健康[1]。长链非编码 RNA尿路上皮癌胚抗原 1(long non-coding RNA urothelialcarcinoma associated 1，lncRNA UCA1)在多种肿瘤中差异表达，对多种信号通路进行调控，也可参与转录后调控[2]。有关研究表明，lncRNA UCA1在心脏组织中呈现高表达的趋势，因此，认为lncRNA UCA1是心血管疾病潜在的生物学标志物[3]，但是目前关于其在老年冠心病病人中的表达情况及与预后的关系尚不明确。因此，本研究通过检测老年冠心病病人血清中lncRNA UCA1的表达情况，探讨其与老年冠心病病人预后的关系，以期为老年冠心病病人的预后判断提供参考。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2016年1月—2018年5月在我院治疗的老年冠心病病人154例作为冠心病组，年龄60～80(70.12±5.89)岁。另选取同期在我院进行体检的健康者160名作为对照组，年龄61～80(69.47±6.19)岁。统计两组总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平；Gensini评分根据冠状动脉血管图像进行评价，记录无症状、心律失常、心绞痛、心肌梗死、心力衰竭例数，对冠状动脉血管狭窄程度进行评价[4]。冠心病诊断标准：以冠状动脉造影为依据，冠状动脉中任何1支冠状动脉狭窄程度≥50% 即为冠心病[5]。病例纳入标准：①符合冠心病诊断标准；②经冠状动脉造影确诊；③年龄60～80岁；④冠心病病程>1年。排除标准：①近1年由于外因刺激引起的精神刺激者；②其他疾病引起的心律失常、心绞痛、心肌梗死、心力衰竭者；③病人之间有血缘关系者；④滥用药物者。

1.2 主要仪器与试剂 实时荧光定量(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)仪(中国赛默飞世尔科技有限公司生产，型号：4375305)，低温离心机(湖南凯达科学仪器有限公司生产，型号：GL21M)，TrizolTMLS Reagent(中国赛默飞世尔科技有限公司生产，货号：10296028)，逆转录cDNA合成试剂盒(中国赛默飞世尔科技有限公司生产，货号：K1622)，AceQ qPCR SYBR Green Master Mix(南京诺唯赞生物科技有限公司生产，货号：Q111-01/02/03)。

1.3 qRT-PCR法检测血清中lncRNA UCA1表达水平 分别采集冠心病病人、健康体检者静脉血4 mL，低温离心机4 ℃下以4 000 r/min 的速率离心10 min，吸取上清液置于无RNA酶的已经标记好的5 mL 离心管中，置于-80 ℃冰箱中备用。

Trizol法提取总RNA后检测RNA浓度，逆转录cDNA合成试剂盒合成cDNA。qRT-PCR仪检测血清中lncRNA UCA1表达水平。根据GenBanK中lncRNA UCA1序列设计引物：lncRNA UCA1上游引物为5′-TGCCAGCCTCAGCTTAATCC-3′；lncRNA UCA1下游引物为5′-TCCCTGTTGC-TAAGCCGATG-3′。GADPH为内参序列：GADPH上游引物 为5′-GAAGGTGAAGGTCGGA-3′；GADPH下游引物为5′-GAAGATGGTGATGGGAT-3′。反应条件：95 ℃预变性60 s，95 ℃变性30 s，62 ℃退火30 s，72 ℃延伸20 s，45个循环。2-△△CT法对lncRNA UCA1表达水平进行定量分析。

1.4 随访 所有病人出院后通过门诊随访或电话随访，随访时间从出院后第1天开始，末次随访时间截至2018年10月31日，随访时间为5个月至2年，平均(15.36±3.17)个月，死亡病人以死亡时间为截止期。观察记录随访期间病人预后情况，预后不良情况即为随访期间出现终点事件，终点事件主要为心血管事件，包括心源性死亡、再发急性心肌梗死、非致死性心肌梗死、必须住院治疗的再发心绞痛、血运重建等情况，其中心肌梗死判定方法为持续20 min以上胸痛或心电图出现异常改变并伴有肌钙蛋白异常增高；血运重建判定方法：经过外科手术或介入手术对以往病变血管再次治疗或对血管新发狭窄的治疗。不存在上述情况则为预后良好。

2 结 果

2.1 冠心病组和对照组血清lncRNA UCA1表达比较 冠心病组血清lncRNA UCA1表达水平低于对照组(P<0.05)。详见表1。

表1 冠心病组和对照组血清lncRNA UCA1表达比较(±s)

2.2 冠心病组和对照组临床资料比较 冠心病组与对照组男性比例、高血压病史、吸烟史、低密度脂蛋白胆固醇、Gensini评分比较差异均有统计学意义(P<0.05)，体质指数(BMI)、糖尿病病史、高脂血症史、饮酒史、总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖、餐后2 h血糖、血尿酸、收缩压、舒张压等比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。详见表2。

表2 冠心病组和对照组临床资料比较

2.3 冠心病组lncRNA UCA1表达水平与血脂、Gensini评分的相关性分析 采用Pearson法分析冠心病组lncRNA UCA1与血脂、Gensini评分的相关性，结果显示，lncRNA UCA1表达水平与总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇水平无明显相关(P>0.05)，与低密度脂蛋白胆固醇呈正相关(P<0.05)，与Gensini评分呈负相关(P<0.05)。详见表3。

表3 lncRNA UCA1表达水平与血脂、Gensini评分的相关性分析

2.4 不同预后结局冠心病病人血清lncRNA UCA1水平比较 预后良好病人血清中lncRNA UCA1表达量高于不良预后病人(P<0.05)。详见表4。

表4 不同预后结局冠心病病人血清lncRNA UCA1水平比较(±s)

2.5 影响老年冠心病病人不良预后的危险因素分析 单因素分析显示，lncRNA UCA1表达、高血压病史、低密度脂蛋白胆固醇、Gensini评分均是影响老年冠心病病人预后的危险因素；多因素分析显示，lncRNA UCA1表达和Gensini评分是影响老年冠心病病人预后的独立危险因素[HR=3.451，95%CI(2.424，4.629)，P<0.05；HR=2.632，95%CI(2.151，4.529)，P<0.05]。详见表5。

表5 影响老年冠心病病人预后的危险因素分析

3 讨 论

冠心病又称冠状动脉粥样硬化性心脏病，世界卫生组织将冠心病分为无症状心肌缺血、心绞痛、心肌梗死、心力衰竭和猝死5大类。冠心病是随着冠状动脉血管中内膜脂质和复合糖类积聚、出血及血栓的形成，病变积累纤维组织增生、钙质沉着、动脉中层逐渐蜕变和钙化造成动脉粥样硬化，进而造成血管腔狭窄甚至阻塞，引起心肌缺血、缺氧、坏死而发生心脏病[6]。老年人随着年龄增长身体各项机能逐步退化，体质较差且慢性病缠身，较易罹患心脏病，其中以冠心病最常见。与中青年冠心病病人相比，老年冠心病病人动脉粥样硬化程度、血管腔狭窄更严重，预后也相对较差[7]。冠心病严重威胁老年人生命安全，其发病原因复杂，是临床研究的热点之一。老年冠心病病人预后情况受多种因素的调控[8]，伴有心绞痛、心肌梗死、缺血性心力衰竭和猝死影响老年冠心病预后情况[9-10]。目前尚无可作为老年冠心病预后判断的有效生物指标，因此，本研究分析影响老年冠心病病人预后情况的因素。

长链非编码 RNA(long non-coding RNA，lncRNA)是一段长度>200个碱基、缺少或无开放阅读编码框、不编码蛋白质的RNA，循环系统中的lncRNA成为近两年研究热点。Li等[11]芯片检测发现循环lncRNA在小鼠全血、血浆中均显著高表达，lncRNA有望作为生物标志物。其中lncRNA UCA1是在膀胱移行上皮细胞癌中发现并命名，在膀胱癌中高表达，可作为诊断膀胱癌的生物学标志物，随后研究发现lncRNA UCA1作为一种致癌基因在多种肿瘤中都表达异常[12]。Nie等[13]研究发现lncRNA UCA1在非小细胞肺癌组织中高表达与非小细胞肺癌病人存活时间缩短有关，低表达影响非小细胞肺癌细胞增殖和脱落。有研究显示lncRNA UCA1在食管癌组织中显著上调，且与预后不良相关，在食管癌细胞中高表达lncRNA UCA1可促进食管癌细胞增殖，低表达lncRNA UCA1可抑制食管癌细胞生长[14]。另有研究报道lncRNA UCA1可影响胰腺癌细胞的增殖、侵袭、迁移[15]。还有研究显示，lncRNA UCA1基因仅在成人组织脾脏及心脏中表达，且在心脏表达水平较高，因此，认为lncRNA UCA1可能是急性心肌梗死的生物学标志物[16]。Pezawas等[17]研究发现，lncRNA UCA1在急性心肌梗死病人血浆中早期表达量明显降低，第3天后逐渐升高，被认为是急性心肌梗死新的标志物。还有研究显示，lncRNA UCA1可通过抑制P27的表达而加重心肌细胞的凋亡，从而参与心肌缺血再灌注过程中心肌损伤的发展[18]。本研究发现，冠心病组血清中lncRNA UCA1的表达水平低于对照组，与潘洪川等[19]研究结果一致，提示冠心病组血清中lncRNA UCA1的表达降低可能与冠心病发生有关。本研究结果显示，冠心病组和对照组男性比例、高血压病史、吸烟史、低密度脂蛋白胆固醇、Gensini评分比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，提示性别、高血压病史、吸烟史、低密度脂蛋白胆固醇、Gensini评分水平都可能影响冠心病疾病发生。进一步分析发现血清中lncRNA UCA1水平与低密度脂蛋白胆固醇呈正相关，与Gensini评分呈负相关，提示冠心病病人血清中lncRNA UCA1水平可能影响低密度脂蛋白胆固醇、Gensini评分。预后分析发现，预后良好的冠心病病人血清lncRNA UCA1表达量高于不良预后的冠心病病人，提示血清中lncRNA UCA1表达情况可能影响冠心病病人预后。进一步分析发现，lncRNA UCA1表达和Gensini评分是影响老年冠心病病人预后的独立危险因素，提示检测血清中lncRNA UCA1表达和Gensini评分可以判断病人预后恢复情况，从而加强对预后不良病人的监控，及时进行治疗，以改善预后。

综上所述，老年冠心病病人血清中lncRNA UCA1低表达，可能通过影响体内低密度脂蛋白胆固醇含量、Gensini评分影响冠心病发生，与病人预后情况有关。由于考虑到冠心病可能受其他因素的影响，本研究没有充分研究lncRNA UCA1表达量和冠心病的相关性，存在一定的缺陷。