血浆内皮素-1和血小板p-选择素在慢性阻塞性肺疾病中的检测及临床意义

王志刚 郑红艳 林学军

[摘要]目的 探讨血浆内皮素-1（ET-1）和血小板p-选择素（CD62P）在慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者中的水平及临床意义。方法 选取2017年6月～2018年9月我院呼吸内科收治的68例COPD急性发作期（AECOPD）患者作为A组，另外选取同期门诊复查的79例COPD稳定期患者作为B组;选取同期体检中心的72例健康体检者作为健康对照C组。分别检测和比较三组的血浆ET-1和血小板表面CD62P水平，并分析A、B两组的血浆ET-1和血小板表面CD62P水平与动脉血氧分压（PaO2）和动脉血二氧化碳分压（PaCO2）的关系。结果 A组的血浆ET-1和血小板CD62P水平均高于B组和C组，差异有统计学意义（P<0.05）;B组和C组的血浆ET-1和血小板CD62P水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）。A组与B组的PaO2、PaCO2比较，差异无统计学意义（P>0.05）。血浆ET-1、血小板CD62P水平与PaO2成负相关（r=-0.41、-0.43，P<0.05），与PaCO2成正相关（r=0.56、0.58，P<0.05）。结论 检测COPD患者体内的ET-1和CD62P含量，有助于COPD患者可能存在血栓前狀态（PTS）的早期发现和临床干预治疗。

[关键词]慢性阻塞性肺疾病;内皮素-1;p-选择素;血栓前状态

[中图分类号] R563.5          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-4721（2020）8（a）-0004-04

Detection and clinical significance of plasma endothelin-1 and platelet p-selectin in chronic obstructive pulmonary disease

WANG Zhi-gang   ZHENG Hong-yan▲   LIN Xue-jun

Department of Respiratory Medicine， People′s Hospital Affiliated to Quanzhou Medical College， Fujian Province， Quanzhou   362000， China

[Abstract] Objective To investigate the level and clinical significance of plasma endothelin-1 （ET-1） and platelet p-selectin （CD62P） in patients with chronic obstructive pulmonary disease （COPD）. Methods A total of 68 patients with acute exacerbation of COPD （AECOPD） in our hospital from June 2017 to September 2018 were selected as group A， 79 patients with stable COPD who were reviewed in the same clinic were selected as the group B， and a total of 72 healthy examinees served as the healthy control group C. The plasma ET-1 and platelet surface CD62P levels of the three groups were detected and compared， and the relationship between the plasma ET-1， platelet surface CD62P levels and arterial blood oxygen partial pressure （PaO2）， arterial blood carbon dioxide partial pressure （PaCO2） was analyzed in group A and B. Results The plasma ET-1 and platelet CD62P levels in group A were higher than those in group B and C， and the differences were statistically significant （P<0.05）. There were no significant differences in the levels of plasma ET-1 and platelet CD62P between group B and group C （P>0.05）. There were no significant differences in PaO2 and PaCO2 between group A and group B （P>0.05）. Plasma ET-1 and platelet CD62P levels were negatively correlated with PaO2 （r=-0.41， -0.43， P<0.05）， and positively correlated with PaCO2 （r=0.56， 0.58， P<0.05）. Conclusion The detection of ET-1 and CD62P in COPD patients is helpful for the early detection and clinical intervention of prethrombotic state （PTS） in COPD patients.

[Key words] Chronic obstructive pulmonary disease; endothelin-1; p-selectin; Prethrombotic state

慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）是一种常见的、以持续存在的气流受限不完全可逆为特征的疾病，其高发病率和致死率已是当前一个严重的公共问题，目前发病机制尚未完全明确，多数认为与机体对有害气体异常的炎性反应有关[1]。Polatli等[2]报道COPD患者的凝血和抗凝失衡容易诱发血栓前状态（prethrombotic state，PTS），导致肺血管微血栓栓塞的形成，引起肺动脉高压及右心损害，导致COPD急性发作（acute exacerbation of COPD，AECOPD）的发生。目前，AECOPD的研究热点是如何利用一些生物标志物，如血浆内皮素（endothelin-1，ET-1）、p-选择素（p-selectin，CD62P）纤维蛋白原（fibrinogen，FIB）、C反应蛋白（C-reactive protein，CRP）、血清降钙素原（procalcitonin，PCT）等对其加重程度和病原学进行预测，指导临床诊疗。对于这些指标的预测价值，目前尚无统一认识。本研究检测了血清ET-1和血小板CD62P在COPD急性发作期和缓解期的水平及其与缺氧、高碳酸血症的关系，以初步探讨AECOPD发生PTS的可能机制，为今后的干预治疗提供理论依据，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2017年6月～2018年9月于我院就诊的147例COPD患者作为研究对象，其中呼吸内科收治的AECOPD住院患者68例作为A组，男32例，女36例;平均年龄（65.8±6.5）岁。同期门诊的COPD稳定期患者79例作为B组，男43例，女36例;平均年龄（66.2±7.8）岁。纳入标准：所有AECOPD患者的诊断均符合《慢性阻塞性肺疾病诊治指南（2013年修订版）》[3]，即COPD短期内因咳、痰、喘加重的住院患者。排除标准：近期应用抗凝或抗血小板聚集药物（如阿司匹林、肝素等）者;未能有效控制的高血压患者;近期有手术史或其他出凝血性疾病史患者;严重的肝肾功能障碍者;精神疾病无法配合的患者;妊娠和（或）哺乳期妇女。另选取同期体检中心的健康体检者72例作为健康对照C组，其中男42例，女30例;平均年龄（67.5±5.7）岁。以上入组对象均无高血压、糖尿病史及心、肝、肾和血液系统疾病。三组的性别、年龄等一般资料比较，差异无统计学差异（P>0.05），具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会批准，所有参与的研究对象均签署知情同意书。

1.2检测方法

ET-1：运用全自动酶标仪（意大利SEAC公司，ALISEI.Q.S），选用ET-1试剂盒（CUSABIO生物有限公司，X21033233）测定血浆E-T1含量，单位为ng/L。

CD62P：运用流式细胞仪（美国Coulter公司的Beck-man-Coulter，贝克曼库尔特型），选用免疫荧光单克隆抗体CD62P-PE试剂盒（美国Becton-dickion公司，348107）测定CD62P含量。

动脉血氧分压（arterial blood oxygen partial pressure，PaO2）和動脉二氧化碳分压（arterial blood carbon dioxide partial pressure，PaCO2）：运用血气分析仪（美国，Nova Biomedical）测定PaO2和PaCO2，测定前停吸氧半小时。

1.3观察指标

观察比较COPD急性发作期、稳定期复查患者和同期健康体检者的血栓前状态和血气分析指标。血栓前状态指标包括：采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验测定血浆ET-1水平，采用双色直接免疫荧光法测定CD62P含量;血气分析指标包括：采用干式电化学法测定动脉血PaO2、PaCO2。

1.4统计学方法

采用SPSS 18.0统计学软件进行数据分析，符合正态分布的计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验，三组间比较采用单因素方差分析，不符合正态分布者转换为正态分布后行统计学分析;计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验;血气分析（PaO2、PaCO2）与血清ET-1和血小板CD62P的关系采用单因素直线相关分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1三组血浆ET-1、血小板CD62P水平及PaO2、PaCO2的比较

A组的血浆ET-1和血小板CD62P水平均高于B组和C组，差异有统计学意义（P<0.05）;B组和C组的血浆ET-1和血小板CD62P水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）。A组与B组的PaO2、PaCO2比较，差异无统计学意义（P>0.05）（表1）。

2.2血浆ET-1、血小板CD62P水平与血浆PaO2、PaCO2的关系

血浆ET-1、血小板CD62P水平与PaO2成负相关（r=-0.41、-0.43，P<0.05），与PaCO2成正相关（r=0.56、0.58，P<0.05）。

3讨论

AECOPD是COPD自然进程中经常出现的急性事件，指稳定期患者短期内咳嗽、咳痰、气促等呼吸道症状突然加重超出日常变异，且需要改变原来的治疗方案。PTS系指对于某些与血栓形成有关的疾病而言，在血栓形成之前，由于血管内皮、血小板和血液流变学发生变化，使机体促凝-抗凝机制失衡所引起的有利于血栓形成的病理状态[4]。在此状态下，循环血液发生血栓形成的可能性大为增加。Leuppi等[5]报道COPD的主要死因是肺血栓栓塞症（pulmonary thromboembolism，PTE）。因此，AECOPD患者的PTS可严重影响病情进展及预后，对其进行指标监测和及时干预具有重要的临床意义。

ET-1系1988年由日本学者Yanagisawa等从猪主动脉内皮细胞上清液中提取得到，其是一种生物活性肽，由21个氨基酸残基组成，有三种异构体分别为ET-1、ET-2、ET-3。其中，以ET-1最早发现，且活性最强，作用持久，是迄今发现的最强缩血管物质[6]。主要由肺组织合成，分布在肺、心、肾等组织器官中，主要表达在血管内皮，具有强烈的收缩血管、支气管及促进有丝分裂的生物活性。它在维系血管张力和心血管系统平衡中发挥重要作用，其表达可受到如血栓素、血管紧张素Ⅱ、缺氧、机械张力等诸多因素的影响[7]。

本研究结果显示，AECOPD患者的ET-1含量较稳定期、健康对照组均显著升高（P<0.05），其原因分析如下：①AECOPD的长期慢性低氧可导致血管内皮下胶原组织暴露，血液中原本存在的极低浓度ET-1受到刺激后急剧升高，激活凝血反应链[8]。②AECOPD时的肝脏细胞在白介素-6（interleukin 6，IL-6）刺激下产生急性期CRP，后者释放到循环中可上调其他炎症细胞因子、激活补体、促进巨噬细胞摄取低密度脂蛋白，还可以刺激血管内皮细胞产生ET-1[9]。③发病期的肺组织因为功能状态的失常而减少了对ET-1的降解，二者平衡破坏导致ET-1含量急剧上升[10]。

相关研究表明[11]，AECOPD患者体内明显升高的ET-1与血管平滑肌中ET受体相结合，使Ca2+流入细胞内，从而引发缩血管反应、血管平滑肌细胞增殖、肺血管的重塑，导致PTS发生和肺动脉高压形成，而后者进一步加重缺氧缺血和血管栓塞，从而形成恶性循环[12]。有动物实验表明[13]，加用ET受体拮抗剂可有效降低PTE后的肺动脉高压，并减少栓塞后血栓烷A2的释放。

血小板CD62P是一种分子量为140 kD的膜糖蛋白，定位于血小板的a颗粒及内皮细胞棒管状（Weibel-Palade）小体[14]。它在人体诸多组织如肝、肺、结肠、胃及肾上腺的血管内皮细胞均有很低含量的表达，且主要分布于中等以上血管。它在介导粒细胞和单核细胞在内皮细胞表面的滚动，促进粒细胞和单核细胞与血小板的黏附上发挥重要作用，是目前最具特征性的血小板活化的分子标志物[15]。

本研究结果显示，AECOPD患者的CD62P水平较稳定期、健康对照组均显著升高（P<0.05），与Ferroni等[16]报道COPD患者可溶性CD62P水平较健康人高的结果相仿。原因分析如下：①COPD患者由于代偿性增多的红细胞引发血液黏稠度增加，而其病程中常见的感染、酸中毒等因素可导致内皮损伤和胶原暴露，刺激血小板附着和聚集，引起CD62P高表达[17]。②AECOPD时的炎症反应通过上调血管内皮细胞组织因子的基因表达，增加凝血因子的活性，刺激CD62P高表达，促进血液凝固[18]。反之，凝血可以放大炎症反应，二者互为因果。

关于COPD患者细胞表面受体表达的研究显示，白细胞表面的CD62P糖蛋白配体-1水平较健康人明显升高[19]，CD62P糖蛋白配体-1促使CD62P与激活的血小板结合，形成血小板-单核细胞聚合物，后者是检测血小板活性的高敏感性和特异性指标。

COPD患者血浆ET-1、血小板CD62P与动脉血氣分析指标之间可能存在相互影响，本研究结果显示，COPD急性加重期和稳定期患者的血浆ET-1、血小板CD62P均与PaO2成负相关，与PaCO2成正相关（P<0.05）。有研究发现，阿司匹林有益于改善AECOPD患者的生存率[20]，建议AECOPD发生后常规应用低剂量阿司匹林[21]。鉴于大多数严重AECOPD住院患者易发生PTS，慢性阻塞性肺疾病全球倡议（The Global Initiative for Chronic Obstructive Lung Disease，GOLD）指南建议这些患者常规进行PTS预防治疗。

综上所述，联合检测AECOPD血清ET-1和血小板CD62P水平，可对AECOPD的PTS起到良好的预测作用，在确定PTS后，是否需要积极进行抗血小板治疗，抗血小板治疗是否会影响血小板CD62P表达的报道罕见，对于AECOPD患者给予血浆ET-1受体拮抗剂是否会延缓PTS的发生亦无统一认识，上述问题尚需要大规模、多中心的前瞻性试验来进行进一步研究。

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（收稿日期：2019-09-04）