平均红细胞体积和血红蛋白毛细管电泳联合检测对地中海贫血的诊断价值

邓宇运 林杰锋 李雁

地中海贫血是一种遗传性慢性溶血性疾病，主要通过遗传筛查、产前咨询及预防、选择性淘汰受累胎儿为疾病控制的主要方法［1］。聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）结合其他分子生物学方法是筛查地中海贫血的主要手段，然而该诊断方法对实验室条件要求高、操作繁琐、价格昂贵，且在新突变和罕见突变检测中价值不高，因此寻找更方便、简单、准确、快速的筛查方法对指导优生优育有重要意义［2-3］。平均红细胞体积（mean corpuscular volume，MCV）检测操作简单，初筛异常后再进行血红蛋白（hemoglobin，Hb）分析，发现结果异常后再进行基因诊断确诊，可提高诊断效率。毛细管电泳是近年发展起来的一种分析Hb 的新技术，为地中海贫血筛查提供了新途径［2-4］。MCV 联合Hb 电泳筛查地中海贫血，能够提高地中海贫血筛查的准确性，有助于临床尽早通过终止妊娠等手段进行干预，淘汰重型地中海贫血胎儿，实现优生优育，对提高人口质量和素质有积极意义［4］。目前MCV 与Hb 电泳产前筛查尚未普及，因此明确其诊断价值十分重要。本研究通过分析地中海贫血孕妇的MCV 水平和Hb 电泳〔hemoglobin A2（HbA2）、hemoglobin F（HbF）〕结果，评价MCV 和Hb 电泳联合检测对地中海贫血患者的诊断价值，为地中海贫血的筛查和防治提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选择2019年1 — 12月在本院行基因筛查诊断为地中海贫血的310例孕妇为研究对象。

1.1.1 纳入标准 ① 孕早、中期孕妇；② 地中海贫血诊断符合基因检测结果者。

1.1.2 排除标准 ① 缺铁性贫血、溶血性贫血、自身免疫性贫血、再生障碍性贫血者；② 心、肝、肾、肺、脑等重要器官严重病变者；③ 精神疾病、意识障碍等无法配合治疗者。

1.1.3 伦理学 本研究符合医学伦理学标准，经本单位伦理委员会批准（审批号：20200708），所有对患者的检测均获得过患者或家属的知情同意。

1.2 研究分组 按疾病类型不同将患者分为3个亚组，分别为α-地中海贫血组（176例），β-地中海贫血组（117例），α 合并β-地中海贫血组（17例）。另选同期接受体检且基因检测为正常的120例孕妇作为健康对照组。

1.3 仪器与试剂 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司BC-5380 全自动五分类血液细胞分析仪，欧洲海伦娜公司Helena V8全自动毛细管电泳分析仪，均使用原装配套试剂。

1.4 检测方法

1.4.1 MCV 检测 采集所有孕妇枸缘酸钠抗凝静脉血1～5 mL，使用迈瑞BC-5380 全自动五分类血液细胞分析仪和原装配套溶血素试剂及稀释液对MCV进行测定，试验前严格按照操作流程进行质量控制（质控），并检测Hb 和平均Hb 含量（mean corpuscularhemoglobin，MCH）。

1.4.2 Hb 电泳检测 采用Capillarys 全自动电泳分析仪检测HbA2 和HbF 的表达水平，严格按照试验步骤进行操作。

1.4.3 各指标正常参考值范围 MCV 82～100 fL，Hb 男性120～150 g/L，女性110～145 g/L，HbA2 为0.025～0.035，HbF＜0.025。

1.5 评定标准［2-3］MCV 和Hb 电泳（HbA2、HbF）中任何1 项出现异常即为筛查可疑阳性，MCV 和Hb 电泳（HbA2、HbF）均正常即为阴性。

1.6 统计学方法 使用SPSS 21.0 统计软件分析数据，符合正态分布的计量资料以均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t 检验，多组间比较采用单因素方差分析；计数资料以例（%）表示，组间比较采用χ2检验；绘制受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve，ROC），计算曲线下面积（area under curve，AUC），评价MCV 联合Hb 电泳对地中海贫血的诊断价值。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般资料 两组患者年龄、孕周、体质量指数（body mass index，BMI）等一般资料比较差异均无统计学意义（均P＞0.05），有可比性。见表1。

表1 地中海贫血组和健康对照组的一般资料比较（±s）

表1 地中海贫血组和健康对照组的一般资料比较（±s）

注：BMI 为体质量指数

组别 例数（例）年龄（岁） 孕周（周） BMI（kg/m2）地中海贫血组 310 30.25±5.08 17.12±5.25 24.56±3.25健康对照组 120 29.12±4.87 16.85±6.12 25.01±3.56

2.2 地中海贫血组与健康对照组的MCV、Hb、MCH和Hb 电泳结果比较 地中海贫血组孕妇的MCV、Hb、MCH 水平均明显低于健康对照组，HbA2、HbF水平均明显高于健康对照组（均P＜0.05），β-地中海贫血组和α 合并β-地中海贫血组的HbA2、HbF 表达水平均明显高于健康对照组（均P＜0.05）。见表2。

表2 地中海贫血组各亚组和健康对照组的MCV、Hb、MCH 水平和Hb 电泳结果比较（±s）

表2 地中海贫血组各亚组和健康对照组的MCV、Hb、MCH 水平和Hb 电泳结果比较（±s）

注：MCV 为平均红细胞体积，Hb 为血红蛋白，MCH 为平均血红蛋白含量，HbA2 为血红蛋白A2，HbF 为血红蛋白F；与健康对照组比较，aP＜0.05

组别 例数（例） MCV（fL） Hb（g/L） MCH（pg） HbA2（%） HbF（%）地中海贫血组 310 69.81±7.62 a 107.92±15.59 a 21.51±7.94 a 0.036±0.005 a 0.022±0.006 a α-地中海贫血组 176 73.56±7.25 a 114.56±15.26 a 22.58±7.65 a 0.023±0.003 0.020±0.002 β-地中海贫血组 117 64.25±8.16 a 98.22±16.24 a 18.09±8.28 a 0.055±0.007 a 0.025±0.009 a α 合并β-地中海贫血组 17 68.41±9.26 a 102.89±11.68 a 20.34±9.25 a 0.051±0.006 a 0.021±0.008 a健康对照组 120 86.45±7.56 132.54±16.68 28.35±6.82 0.027±0.003 0.019±0.004

2.3 MCV 和Hb 电泳（HbA2、HbF）对地中海贫血的诊断效能比较 MCV 与Hb 电泳（HbA2、HbF）联合诊断地中海贫血的AUC 分别为0.930 和0.913，敏感度分别为89.7%、88.4%，特异度分别为80.8%、79.6%，预测价值明显优于MCV 或Hb 电泳（HbA2、HbF）单独检测（均P＜0.01）。见表3，图1。

表3 MCV、HbA2 和HbF 单独检测和联合检测对地中海贫血的临床诊断效能比较

3 讨论

地中海贫血是临床上较常见的一种遗传性溶血性贫血疾病，又名珠蛋白生成障碍性贫血症，由于体内珠蛋白基因缺陷或突变导致Hb 中珠蛋白肽链合成障碍，引起Hb 各链的组成成分发生变化［5］，可分为α-地中海贫血、β-地中海贫血、γ-地中海贫血、δ-地中海贫血等类型，其中前两种最为常见［6］。临床上地中海贫血症状多样，包括静止型、轻型、中间型、重型，轻者无明显症状，重者可出现慢性溶血症状，由于Hb 的产生不足常导致患者携氧能力降低，各器官长期缺氧、缺血改变可严重影响患者的健康发育和生活质量［4］。地中海贫血的主要治疗手段是输血和补充铁剂，尚无特效根治方法，且治疗费用昂贵，加重家庭的经济负担。目前的诊断策略是先对地中海贫血孕妇进行血液学指标检测，结合Hb 电泳分析进一步筛查后，再进行基因检测［3］。因此提前对地中海贫血孕妇的血液学和Hb 电泳结果进行筛查十分重要，有助于早期识别地中海贫血胎儿并减少重症地中海贫血胎儿出生，为提高人口质量提供临床依据［1，7］。

图1 MCV 联合血红蛋白电泳对地中海贫血诊断的ROC 曲线

在临床上地中海贫血主要有3 种类型，相应的不同临床表型与遗传基因有关，如α-或β-珠蛋白链沉积基因减少等［5，8］，而不同类型地中海贫血患者的基因型、血液学指标和Hb 电泳结果都有各自的特点。本研究结果显示地中海贫血患者主要以α 和β 表型为主，符合我国地中海贫血的疾病表型分布规律［4，9-10］。α-地中海贫血患者以SEA基因型为主，β-地中海贫血患者以CD41-42 基因型为主，而α 合并β-地中海贫血患者以SEA、CD41-42 基因型为主，临床上除上述基因型外还有其他较少见的基因型，提示在地中海贫血患者中突变基因的复杂性为早期诊断地中海贫血胎儿增加了难度。因此，寻找有效的血液学和Hb 电泳指标对筛查地中海贫血胎儿意义重大［11-12］。

血液学指标（包括MCV、Hb、MCH）在地中海贫血患者中可出现显著差异［2-5］。Hb 电泳仪能检测出正常和异常的Hb 条带，其中毛细管电泳法更能区分HbA2 和HbF 条带，在地中海贫血筛查中敏感度较高［1，13-16］。本研究以MCV＜80 fL、MCH＜27 pg和Hb 的正常参考值下限作为血液指标筛查标准，HbA2＜0.025 或＞0.035、HbF＞0.020 作为Hb 电泳筛查标准，与健康对照组比较，在不同临床表型中，α-地中海贫血组、β-地中海贫血组、α 合并β-地中海贫血组的MCV、Hb、MCH 水平均明显降低，且β-地中海贫血患者降低更为明显，其原因可能是地中海贫血患者由于幼红细胞中铁与原卟啉结合受限，导致Hb 生成障碍和MCV、MCH 成分变化，进而出现低色素小细胞贫血等现象［2］。Hb 电泳结果显示，β-地中海贫血组和α 合并β-地中海贫血组的HbA2 和HbF 表达水平均明显高于健康对照组，且β-地中海贫血组升高最为明显，而α-地中海贫血组HbA2 表达水平下降，在临床上β-地中海贫血更倾向于重度贫血，而α 合并β-地中海贫血患者体内α 链条缺少可缓解β 链缺少造成的不平衡，多表现为中度贫血［4］。

本研究MCV 和Hb 电泳（HbA2、HbF）联合检测对地中海贫血的诊断效能明显优于MCV 和Hb电泳（HbA2 或HbF）单独检测，MCV 联合HbA2 或HbF 检测的AUC 分别为0.930 和0.913，明显高于各指标单独检测；且在不同筛查方法对地中海贫血的诊断价值评价中，MCV 联合Hb 电泳（HbA2、HbF）检测结果较各指标单独检测的敏感度、特异度更高，可见联合检测对筛查地中海贫血胎儿具有较高的敏感度和特异度，诊断价值更高，可减少疾病的漏诊和误诊，作为早期疾病筛查的有效指标。

综上所述，联合MCV 和Hb 电泳对于地中海贫血的筛查具有重要指导意义，可有效检出地中海贫血胎儿，减少临床漏诊率，提高阳性检出率，为疾病早期干预提供了重要的理论依据。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突