强直性脊柱炎患者14-3-3η DKK-1及TGF-β1水平与BASDAI BASFI的相关性分析

王 冲 邱卫强

强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)是以慢性炎症为主要临床表现的全身性免疫性疾病，且具不可逆性，当前无特异性治疗方案，致残率极高[1]。14-3-3η是14-3-3蛋白的一种，作为高度保守的酸性蛋白家族，可参与多种生命活动的调节，功能涉及免疫炎症、细胞周期凋亡等。曾婷婷等[2]报道，类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者14-3-3η明显高于健康人群。dickkopf相关蛋白1(dickkopf-1，DKK-1)是Wnt信号通路的负性调节因子，有研究[3]指出，DKK-1可通过抑制Wnt信号途径参与骨重塑，同时还可影响核因子kB受体活化因子、骨保护素的表达，对破骨细胞产生及骨吸收过程亦存在一定影响。而转化生长因子-β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)作为强效致纤维化因子，对各类结缔组织有极复杂的生物学作用，许红飞等[4]报道，TGF-β1在AS患者黄韧带、椎旁肌中呈明显高表达。但血清14-3-3η、DKK-1蛋白及TGF-β1与AS患者Bath强直性脊柱炎病情活动指数(Bath ankylosing spondylitis disease activity index,BASDAI)、Bath强直性脊柱炎功能指数(Bath ankylosing spondylitis functional index,BASFI)等病情指标的相关性研究较少。鉴于此，本研究采集资料分析AS患者血清14-3-3η、DKK-1及TGF-β1水平变化情况，并探究其与AS患者预后的相关性，为AS的临床干预提供参考，具体报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2012年2月至2016年1月驻马店市中心医院收治的AS患者60例为研究对象，作为AS组。其中男性49例，女性11例，年龄29～57岁，平均(40.12±5.69)岁；平均体质量指数(body mass index,BMI)(25.19±0.37)kg/m2，29例有吸烟史。另按1∶1比例在本院同期接受健康体检的健康志愿者中筛选60例设为对照组，其中男性45例，女性15例，年龄32～60岁，平均(40.87±6.14)岁，BMI(25.20±0.68)kg/m2，27例有吸烟史。两组研究对象性别构成、年龄、BMI及吸烟史等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具可比性。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：①AS组符合中华医学会风湿病学分会《强直性脊柱炎诊断及治疗指南》中AS诊断要求[5]；②入组前肝肾功能正常；③无重要器官器质性病变；④对照组均为健康人，无任何内、外科疾病；⑤所有研究对象均知晓研究内容并自愿签署研究知情同意书；⑥研究通过医院伦理委员会批准。排除标准：①入组前接受过抗肿瘤坏死因子药物治疗；②入组前半年内有糖皮质激素类药物、非类固醇类药物使用史；③大剂量使用抗风湿药物。

1.3 方法 ①血清14-3-3η、DKK-1、TGF-β1检测：所有研究对象均于入组后即刻采集血清样本，采用酶联免疫吸附法检验，试剂盒购自武汉博士德，均严格参照试剂盒说明书操作。② BASDAI[6]评估：主要对AS组患者的疲劳程度 、颈背髋部疼痛程度、除颈背髋部以外的关节肿痛程度、区域触压后的不适程度、晨僵程度等进行评价，单个维度分值按0～10分对应无症状～非常严重。③BASFI[7]评估：主要评价AS组患者过去1周内完成穿袜、弯腰捡钢笔、仰卧位站起等行为的难易程度，总计10个条目，单个条目按0～10分对应容易～无法完成。2种评分分值越高，病情越严重，评价时间均为患者入院时。

1.4 观察指标 记录并比较两组研究对象血清14-3-3η、DKK-1蛋白、TGF-β1水平；并分析血清14-3-3η、DKK-1蛋白、TGF-β1与病情评价指标的相关性。

2 结果

2.1 两组研究对象血清14-3-3η、DKK-1、TGF-β1 比较 AS组14-3-3η、TGF-β1高于对照组，DKK-1低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组研究对象血清14-3-3η、DKK-1、TGF-β1 比较

2.2 AS组血清14-3-3η、DKK-1、TGF-β1与BASDAI评分、BASFI评分的相关性分析 AS组患者60例，平均BASDAI评分(40.12±2.63)分，BASFI评分(42.67±5.22)分。经Pearson相关性分析发现，AS组患者血清14-3-3η、TGF-β1与BASDAI评分、BASFI评分呈正相关(r=0.556、0.533、0.459、0.433，P<0.001)；DKK-1则与BASDAI评分(r=-0.285，P<0.05)、BASFI评分呈负相关(r=-0.464，P<0.001)。见图1。

图1 AS患者血清14-3-3η、DKK-1蛋白、TGF-β1与病情的相关性分析

3 讨论

AS的病因至今尚未完全阐明，AS早期无特异性症状，起病隐匿，多数患者以颈、腰背部及外周关节疼痛等为起病症状，可累及骶髂关节、椎体、椎间盘等，引起功能丧失甚至致残，且当前无特效治疗方法[8]。14-3-3η作为高度保守酸性蛋白家族成员，因其具备两性凹槽，故可与多种配体蛋白结合，在真核生物中表达广泛，也是细胞内重要的信号转导蛋白之一，参与多种疾病的发生及进展。Maksymowych等[9]报道，14-3-3η在AS患者中存在异常表达，诊断AS的曲线下面积值高达0.86。而 BASDAI、BASFI评分是AS临床诊疗中常用的评分指标，前者主要评价疾病相关症状、后者则主要评价活动能力等，均是反映AS病情严重程度的重要指标。本研究结果显示，AS患者血清14-3-3η明显高于对照组，并与BASDAI评分、BASFI评分呈正相关，与吴颖等[10]报道类风湿性关节炎、脊柱关节炎患者血清14-3-3η存在明显高表达的结果相似。

同时，以新骨形成为骨重塑形式是AS最典型的病理特征之一，新骨形成也是AS患者脊柱活动受限、僵硬、融合甚至残废的重要原因，且至今仍无特异性手段逆转AS骨赘形成[11]。近年来研究[12]证实，Wnt信号通路在AS新骨形成中有重要作用，其可通过干预骨细胞分化程度促进新骨形成。DKK-1则是Wnt信号通路的重要抑制因子。本研究结果显示，AS组血清DDK-1蛋白表达显著低于对照组，这与扶忠超等[13]的报道结论一致。另一项研究[14]有类似报道，并认为骨形成蛋白7(bonemorphogenetic protein-7,BMP-7)/DKK-1比值与骶髂关节炎症程度、BASDAI放射学指标等反映病情、病程的指标显著相关。这与本研究结论相似，均提示AS患者血清DKK-1与病情密切相关。既往亦有研究[15]报道，DKK-1低表达可促进骶髂关节X型胶原表达，软骨细胞肥大,形成骨性强直，诱导骶髂关节融合；DKK-1功能的修复可增强其对Wnt/β-action信号通路的调节作用，从而抑制新骨形成，可在一定程度上预防关节僵硬。但也有研究持相反意见，如Daoussi等[16]报道AS患者血清DKK-1较正常人群呈异常高表达。分析造成DKK-1表达不一的原因或受Wnt信号通路激活后代偿性增加、检测方式、DKK-1无效生成等多因素影响，仍有待规范检测方式后深入探究。

TGF-β1则是TGF-β超家族的核心成员。TGF-β1可通过诱导结缔组织生长因子 (connectivetissuegrowthfactor,CTGF)分泌，参与软骨细胞增殖、血管形成等软骨形成过程，在炎症、纤维化过程中发挥关键作用[17]。本研究结果显示，AS组血清TGF-β1显著高于对照组，且与BASDAI评分、BASFI评分呈正相关，与王庆文等[18]报道结论存在差异，其报道AS患者骶髂关节存在TGF-β1异常高表达，但血清TGF-β1与正常人群差异无统计学意义，分析或与样本量较小有关。

综上所述，AS患者血清14-3-3η、DKK-1蛋白、TGF-β1存在异常表达现象，并与BASDAI评分、BASFI评分等反映病情的指标存在相关性，14-3-3η、DKK-1蛋白、TGF-β1在AS患者血清中呈异常表达，或可成为反映病情严重程度的敏感指标。本研究存在一定局限性，如样本狭窄、存在一定混杂因素影响，尤其是血清DKK-1蛋白、TGF-β1与在AS患者中的表达与既往报道存在一定差异。因此，AS患者血清14-3-3η、DKK-1蛋白、TGF-β1的表达仍有极大深入探究空间，拟采集大样本量后设计更严谨的研究进一步深入探究。