芦丁脂质体冻干的制备和性能研究*

郑 颖，李恩博，朱俊飞，余秀娟

(1 河北北方学院理学院，河北 张家口 075000；2 河北北方学院药学系，河北 张家口 075000)

芦丁，又名紫槲皮甙 ，是一类主要从豆科、芸香科类植物中提取获得的天然黄酮类化合物，具有消炎止痛，抗自由基氧化，防晒抗辐射，缓解肌肉疲劳等功效，是草本防晒护肤用品的主要配方成分。通常芦丁水溶性较差，不利于皮肤的涂抹吸收，严重影响了它的使用效果[1-3]。脂质体是一类在医药领域中常见的药物载体物质，具有水溶性好，毒副作用小，易于生物降解吸收等优势，常用于各类口服药物的包封使用[4-6]。为增强芦丁的水溶吸收性，提高它的使用效率，本次研究中，我们采用冷冻干燥技术以芦丁为原料，制备了它的脂质体冻干，考察了药脂比，醇酯比等制备条件对产品包封率的影响，并对芦丁脂质体冻干的溶解性和稳定性进行考察。

1 实 验

1.1 实验药品和仪器

芦丁，大连美仑生物技术有限公司；卵磷脂、甘露醇、胆固醇，上海麦克林生化科技有限公司；磷酸缓冲盐溶液(PBS)自行配制；其余试剂等均为国产分析纯试剂；Modulyo冷冻干燥机，美国Thermo FIsher公司；722分光光度计，上海光学仪器厂；超声波清洗器，昆山超声仪器有限公司；TGL-20M冷冻离心机，上海卢湘仪离心机仪器有限公司。

1.2 芦丁脂质体冻干的制备

称量芦丁2 mg，按比例将芦丁、胆固醇，卵磷脂溶解于100 mL无水乙醇，超声分散至获得浅黄色溶液。常压条件下，40 ℃水浴旋蒸至溶剂挥发，待容器壁形成透明薄膜之后，减压蒸馏至溶剂完全挥发，加入PBS缓冲溶液10 mL，45 ℃水合反应1 h，所得乳浊液超声分散后，既得芦丁脂质体，将所得脂质体置于冰箱中4 ℃冷藏。在经过预冷冻的芦丁脂质体溶液中加入质量比为10%的甘露醇后，置于冷冻干燥机中，于-40 ℃减压冷冻干燥至样品升华界面消失。既得芦丁脂质体冻干试样。

1.3 芦丁含量及包封率测定

所制芦丁脂质体冻干中的芦丁含量及包封率采用紫外分光光度法测定并计算获得，首先称取标准芦丁样品，加入无水乙醇溶解，依次配置0 mg/mL，0.01 mg/mL，0.02 mg/mL，0.03 mg/mL，0.04 mg/mL，0.05 mg/mL系列标准溶液，测定溶液在357 nm处吸光度[7]，制作标准样品吸光度工作曲线。

称取待测冻干样品加入10 mL乙醇溶解，测定吸光度，根据吸光度工作曲线确定脂质体冻干中芦丁总浓度，称取相同质量冻干样品加入10 mL乙醇溶解，并经过冷冻离心分离，称取上清液，测定吸光度，确定脂质体中游离芦丁总浓度。

包封率E根据冻干中芦丁总浓度C总与游离芦丁浓度C游计算获得，计算公式为：

E=(C总-C游)/C总×100%

2 结果与讨论

2.1 醇脂比对芦丁脂质体冻干包封率影响

固定芦丁的质量为2 mg，卵磷脂质量为100 mg，考察醇脂质量比对样品包封率影响，结果见表1。由表1知，芦丁脂质体冻干的包封率随胆固醇含量的增加而增大，当醇酯比为2:5时，所得芦丁脂质体冻干包封率达最高值46.3%，胆固醇作为表面活性剂，增加它的使用量，有利于提高脂质体乳液的稳定性，但是含量过高时，会造成脂质体膜亲水性增强，膜体发生破裂，从而影响其包封效果。

表1 醇脂比对样品包封率的影响Table 1 The influence of alcohol fat ratio on the encapsulation efficiency of samples

2.2 药脂比对芦丁脂质体冻干包封率影响

固定芦丁使用量2 mg，胆固醇使用量40 mg时，考察药脂比对样品包封率影响，结果见表2。由表2知，样品的包封率同样随卵磷脂含量的增加而增加，但是持续增加卵磷脂用量，会造成脂质体聚集，稳定性变差，发生渗漏，降低了脂质体的包封率，同时增加卵磷脂用量也会造成试样中芦丁含量的相对降低，影响上清液中游离芦丁的浓度，从而导致了测定包封率数值的下降。当药脂比为1:50时，所得芦丁脂质体冻干具有最大包封率。

表2 药脂比对样品包封率的影响Table 2 The effect of drug lipid ratio on the encapsulation efficiency of samples

2.3 脂质体溶解性测试

将经过上述工艺优化处理的过量芦丁脂质体冻干分别溶于10 mL的PBS缓冲溶液(pH=6.5)、去离子水及无水乙醇溶液中，经超声分散20 min后，0.22 μm过滤膜过滤，所得滤液经吸光度测定，确定浓度。按同样方法采用芦丁原料进行空白实验，结果见表3，由表3可知，相对于未经处理的芦丁原料，芦丁脂质体冻干在三种不同溶液中的溶解性得到了明显提升。相对于弱酸性缓冲溶液和乙醇溶液，其在中性去离子水中溶解度增加最为明显。芦丁通过脂质体的包封作用，有效地改善了芦丁的亲水性能，促进了其在水中的分散，因此溶解度得到大幅度的上升。

表3 样品在不同溶剂中的溶解度Table 3 Solubility of samples in different solvents

2.4 芦丁脂质体冻干稳定性测试

优化工艺得到的脂质体冻干经过4 ℃低温保存，每隔10天，测定样品的包封率，结果见表4，由表4可知，所制样品经过40天时间保存，仍具有很高的包封率，具备较好的稳定性，可实现长期保存。

表4 样品包封率随时间变化结果Table 4 Results of sample encapsulation rate changing with time

3 结 论

采用冷冻干燥技术，制备了芦丁脂质体冻干，研究发现，当制备工艺为芦丁2 mg，胆固醇40 mg，卵磷脂100 mg时，以甘露醇作为冻干剂，-40 ℃条件下冷冻干燥所制芦丁脂质体冻干具备最好的包封率，所制芦丁冻干脂质体具有很好的水溶性和稳定性，便于长期保存和溶解使用。有利于芦丁作为护肤用品成分的使用和存储。