以功效为目标的五味安神片的提取工艺优化研究

赵权

（吉林农业科技学院中药学院，吉林 吉林132101）

中医中药作为传统的医药卫生和养生文化,是我国保健食品研制的重要理论基础和有效的物质来源，特别是中药类保健食品已经普遍受到了人们的认可和欢迎，并且具有广阔的前景和需求。研究表明，北五味子具有补肾宁心的功效[1-2]，酸枣仁、灵芝、天麻等都具有养心安神的功效[3-4]。本产品根据中医传统理论，以五味子为君药，酸枣仁为臣药，佐以灵芝、天麻组成之复方，经提取制得的片剂。方中五味子配伍使用，可以起到收敛心气，安神定志的作用；天麻调达肝气，与五味子合用具有补益肝肾、宁心安神的功效；灵芝补气安神，止咳平喘，临床与酸枣仁、五味子配伍具有补肺心脾,止咳平喘，安神等功效。诸药配伍，气血并补，重在益气，是气血不足，心神不宁证的代表方。中药提取主要以目标成分和浸膏得率的提取率为考核指标，但是复方中药组分多，成分复杂，具体哪种中药哪种成分起到作用很难判别，提取工艺是复方中药开发产品的主要瓶颈，本产品开发提取部分改变以成分为考核指标的研发思路，以功效大小为考核指标，对药材提取工艺进行优化，为后续的产品开发的中试及规模化生产提供技术支持。

1 材料与方法

1.1 实验材料

五味子、酸枣仁、灵芝、天麻购自吉林市东鹏大药房。

1.2 试验方法

1.2.1 提取。本方五味子：酸枣仁：天麻：灵芝的比列为2:2:1:1。考虑药材成分的化学性质特点，五味子、酸枣仁、天麻中的木脂素、生物碱、皂苷及天麻素等成分更适合醇提，而灵芝多糖更适合水提，而灵芝多糖提取技术非常成熟和完善，因此灵芝多糖提取不做提取工艺优化处理。参考他人的工艺并适当修改，灵芝粉碎过80 目筛，料液比为1:20(g/mL)，浸提温度为80℃，浸提时间为4h，提取后浓缩定容10ml[5]。方中五味子为非药食同源，因此根据中药学教材规定计量进行计算给药[6]。五味子按成人体重50kg计算，每天6g即0.12g/kg，实验小鼠体重0.02kg，通过计算得知小鼠每天五味子给药量为0.0024g，按照给药28 天计算，三次重复总量为0.2g，每次重复10 只小鼠，即总药材量为2g。即每个单因素实验药材用量为五味子2g，酸枣仁2g、天麻1g，灵芝1g。前三种按照组方的比列混合粉碎进行提取工艺筛选，灵芝单独水提取。提取次数分别为1 次、2 次和3 次；提取时间分别为4h、6h 和8h；料液比分别为1：8、1：12 和1：16，提取温度分别为40℃、60℃和80℃，按照一定料液比加入75%的乙醇溶液进行提取，提取后挥干乙醇，加入灵芝提取液，定容到600ml 作为小鼠给药原液。

1.2.2 阈下值催眠剂量戊巴比妥钠小鼠入睡率试验。由于戊巴比妥钠通过肝酶代谢，而对该酶有抑制作用的药物，也能延长戊巴比妥钠睡眠时间，所以为了排除这种影响，应进行阈下剂量实验[7]。每天取不同单因素提取液2ml 小鼠给药，三次重复，第28 天给药后，对照组给予等体积蒸馏水，30min 后，各组均按150mg/kg·bw腹腔注射戊巴比妥钠，以翻正反射消失30s 以上作为入睡判断标准，观察受试物对注射阈下戊巴比妥钠的小鼠入睡率的影响。

1.2.3 正交试验优选提取工艺。根据单因素试验结果，选择提取工艺中对小鼠入睡率影响较大的因素，进行L9（34）正交试验，以小鼠入睡率为评价指标确定最佳提取工艺。

2 结果与分析

2.1 提取次数对小鼠入睡率的影响

图1 提取次数对小鼠入睡率的影响

提取次数对药材有效成分提取影响很大，同时也影响处方药的功效，提取次数增加有助于药材功效成分浸出，但是次数增加相应增加成本。本实验单因素设置了三次提取，由图可以看出随着提取次数的增加，小鼠入睡率也不断增加，三次提取的入睡率分别为50.43%、55.62%和56.27%。三次重复数据进行方差分析，得出提取2次和3 次与提取1 次差异极显著，2 次和3 次差异不显著。故以提取次数为2 次为较优提取次数。

2.2 提取时间对小鼠入睡率的影响

图2 提取时间对小鼠入睡率的影响

大量研究表明，提取时间与有效成分的提出成正比，但是有些成分会随着时间的增长出现分解等现象，因此合理的提取时间对产品的功效影响很大。本实验单因素设置了提取时间为4h、6h、8h。由图可以看出随着提取时间的增加，小鼠入睡率也不断增加，三个时间提取的入睡率分别为50.16%、54.33%和54.61%。三次重复数据进行方差分析，得出提取6h 和8h 与提取4h 差异极显著，6h 和8h 次差异不显著。故以提取时间为6h 为较优提取时间。

2.3 提取料液比对小鼠入睡率的影响

图3 提取料液比对小鼠入睡率的影响

合理的料液比是增加提取率和节约成本关键因素，理论上料液比越大提取率越高，但是会增加溶剂的投入。本实验单因素料液比设置了1:8、1:12、1:16。由图可以看出随着料液比的增加，小鼠入睡率也不断增加，三个时间提取的入睡率分别为49.41%、54.62%和55.63%。三次重复数据进行方差分析，得出提取1:12 和1:16 与提1:8 小鼠入睡率差异极显著，1:12 和1:16 差异不显著。故以1:12 为较优提取料液比。

2.4 提取温度对小鼠入睡率的影响

图4 提取温度对小鼠入睡率的影响

温度对中药材提取率影响很大，温度过低有效成分不宜浸出，温度过高可能成分降解。本实验根据三中药材五味子、酸枣仁、天麻主要成分的特点，单因素料液比设置了40℃、60℃、80℃。由图可以看出随着温度的增加，小鼠入睡率也不断增加，三个温度入睡率分别为53.23%、56.49%和55.38%。但是80℃入睡率低于60℃的入睡率，可能是某些有效物质高温降解所致。三次重复数据进行方差分析，得出60℃和80℃与40℃小鼠入睡率差异极显著，60℃和80℃差异不显著。故以60℃为较优提取料液比。

2.5 正交试验优选处方药材提取工艺

表1 因素水平表

由表2 可知，影响处方药材提取出膏率的的4 个因素的主次顺序是：C＞B＞D＞A，即提取的料液比是最主要的影响因子，其次是提取次数，再次是提取时间，影响最小的是提取温度。处方药材提取的最优组合为A2B2C3D1，即提取温度为60℃，提取次数为2次，提取料液比为1:12，提取时间为6h。

表2 处方药材提取优化正交试验结果（n=3）

3 讨论与分析

药理作用五味子具有明显的镇静作用，五味子提取物能减少小鼠自主活动，延长巴比妥睡眠时间、抑制动物攻击行为，对抗电休克和化学性惊厥，作用与安定药相似，尚有镇痛作用、肌肉松弛作用。酸枣仁富含黄酮、皂苷、多糖类、油脂和生物碱成分，甘、酸，平，具有养心补肝，宁心安神，敛汗，生津功效。主要治疗虚烦不眠，惊悸多梦。用于心脾气虚血亏、心悸失眠，常与当归、黄芪、党参等同用，如归脾汤。天麻含天麻苷，天麻苷元，β- 甾谷醇和胡萝卜苷，柠蒙酸及其单甲酯，棕榈酸、琥珀酸和蔗糖等，肝风内动，惊痫抽搐，眩晕，头痛。药理作用表明，天麻水、醇提取物及不同制剂，具有镇静、抗惊厥、镇痛、保护脑神经细胞作用，天麻及天麻制剂有扩张血管、降低血压、抗炎作用，还有抗血小板聚聚、抗血栓形成作用，天麻多糖有免疫活性。灵芝多糖类化合物，尚含三萜类、生物碱、核酸类、氨基酸以及微量元素。具有补气安神，止咳平喘之功效，主要治疗心神不宁，失眠，惊悸。本实验根据四味中药的成分特点，五味子、酸枣仁、天麻采用了有机溶剂乙醇作为提取溶剂，更多是考虑一些脂溶性物质的有效提出，但是像天麻多糖、酸枣多糖及五味子中的水溶性物质的会有一定损失，另外灵芝中不溶于水的物质也会损失一定部分，但是综合考虑，采取了乙醇和水的双重提取方法，实验还存在很多不完善的地方，应该对主要成分如五味子甲素、五昧子乙素、五味子丙素、五味子醇甲、五昧子醇乙、皂苷、黄酮、生物碱等有效成分进行检测，把成分和功效一起作为提取工艺的最佳标准进行优化更为合理，相关实验项目组还会进行深入研究。