HPLC-MS/MS法同时测定水中联苯肼酯和乙螨唑残留量

魏杰 谢源 杨浪 黄玉贵 廖朝选

摘 要：为了快速而准确地测定水中联苯肼酯和乙螨唑残留量，以甲醇-0.1%甲酸水溶液（V/V=90︰10）为流动相，使用Eclipse Plus-C18柱和AJS-ESI离子源，建立了同时测定两种农药的痕量分析方法。在联苯肼酯（3.0～150.0μg/L）和乙螨唑（1.0～50.0μg/L）范围内，浓度与峰面积具有良好的线性关系，相关系数分别为0.9999、0.9997，检出限分别为7.9×10-5、1.2×10-5mg/L，定量限为2.6×10-4、3.9×10-5 mg/L。通过加标回收试验，方法的回收率分别为联苯肼酯98.67%～103.33%、乙螨唑97.50%～104.40%。因此得出结论，该方法简单、快速、准确，可有效分析水中联苯肼酯和乙螨唑的含量。

关键词：液相色谱-串联质谱法  联苯肼酯  乙螨唑  残留

联苯肼酯（bifenazate）和乙螨唑（etoxazole）分别属于联苯肼类及2，4-二苯基噁唑衍生物类选择性杀螨[1-2]，对螨类均有优异的活性，常被混配或搭配轮换应用于柑橘全爪螨等害螨的防治[3-4]。由于两种农药在田间的大量应用，经雨水冲刷、土壤淋溶等进入水体，可能造成残留风险。因此，建立同时测定两种农药的检测方法十分必要。当前，对于两种农药的检测分析，已有高效液相色谱法的相关研究报道[2，5]，但由于其在水中的残留量较低，导致该方法无法满足快速或痕量检测的要求。液相色谱-串联质谱联用法是农药痕量分析的主要方法，张月等、王蒙岑等[1，6]分别使用相关方法对木瓜中联苯肼酯和柑橘与土壤中乙螨唑的残留量进行分析。针对联苯肼酯和乙螨唑的同时分析，潘静等[7]建立了40%联苯肼酯·乙螨唑悬浮剂的高效液相色谱分析方法。但是，并未见到采用液相色谱-串联质谱法同时分析两种农药在水中残留的相关报道。农药进入水体可能产生水生态暴露风险，该风险程度与残留量有关。因此，本试验以甲醇-0.1%甲酸水溶液（V/V=90︰10）为流动相所建立的快速、简单、准确的液相色谱-串联质谱法可用于两种农药在水中的残留分析。

1 试验部分

1.1 仪器与试材

液相色谱-串联质谱联用仪：Agilent 1290-6470A，美国安捷伦科技有限公司;色谱柱：Eclipse Plus-C18 50×2.1mm，1.8?m;电子天平：XSE105DU，梅特勒-托利多仪器（中国）有限公司，0.0001g;离心机：LD5-10低速离心机。

联苯肼酯标准品：质量分数ω=97.5%，Dr.Ehrenstorfer;乙螨唑标准品：质量分数ω=99%，Dr.Ehrenstorfer;甲醇：色谱纯，默克股份有限公司;甲酸：HPLC级，天津市科密欧化学试剂有限公司;去离子水：经美国Milli-Q纯水机制备，电阻率为18.2MΩ/cm。

1.2 实验方法

1.2.1 标准溶液的制备

称取0.0103g联苯肼酯标准品和0.0102g乙螨唑标准品置于称量瓶中，用甲醇少量多次溶解后，将其分别定量转入100mL容量瓶中，定容至刻度线，摇匀后得到100.4mg/L（联苯肼酯）和101.0mg/L（乙螨唑）的标准储备液。然后，分别量取3.0mL联苯肼酯标准储备液和1.0mL乙螨唑标准储备液置于100mL容量瓶中，用甲醇稀释为联苯肼酯和乙螨唑分别为3.0、1.0mg/L的混合标准储备液。之后，吸取不同体积的混合标准储备液，用甲醇依次制备联苯肼酯浓度为3.0、6.0、15.0、30.0、75.0、150.0μg/L，乙螨唑浓度为1.0、2.0、5.0、10.0、25.0、50.0μg/L的混合标准溶液，待测。

1.2.2 加标样液制备

以曝气生态水为基质，分别向其中添加混合标准溶液，制备得到联苯肼酯（乙螨唑）浓度为3.0（1.0）、15.0（5.0）μg/L的加标样液。取加标样液10mL，以4000r/min离心5min后经0.25μm滤膜过滤，待测。

1.2.3 仪器操作条件

1.2.3.1 HPLC操作条件

进样体积：2μL;流速：0.3mL/min;柱温：25℃;保留时间：联苯肼酯0.56min、乙螨唑1.01min。

1.2.3.2 MSD操作条件

离子源：AJSESI源，正离子模式;离子源参数：干燥气，N2;干燥气温度，250℃;干燥气流速，5L/min;鞘气：N2;鞘气温度：250℃;鞘气流速：11L/min;雾化器压力（Nebulizer）：45psi;喷嘴电压：500V;毛细管电压（Capillary）：3500V。监测模式：MRM，MRM离子采集参数如表1所示。

1.3 样品测定

在上述操作条件下，待仪器基线稳定，且相邻2次标样溶液的峰面积相对变化<1.5%后对样品进行测定。

2 结果与讨论

2.1 方法选择性

将空白基质样品、混合标准溶液（联苯肼酯3.0μg/L、乙螨唑1.0μg/L）分别进行测定分析，在仪器最高灵敏度下空白样品无可见干扰;联苯肼酯和乙螨唑可实现同时监测，标准样品的保留时间分别为0.56、1.01min，通过提取特征离子后，无互相干扰现象。两种农药的标准样品色谱图见图1。

2.2 线性相关性与检出限、定量限

将制备的系列標准溶液在设定的分析方法下进行测定，以联苯肼酯或乙螨唑的质量浓度为横坐标（x），响应的峰面积为纵坐标（y）进行线性拟合，得到联苯肼酯和乙螨唑的标准曲线（见图2）。结果表明，两种农药在一定质量浓度范围内，即联苯肼酯3.0～150.0μg/L、乙螨唑1.0～150.0μg/L具有良好的线性关系。回归方程为联苯肼酯y=-37.9573+57.7016x，r2=0.9999;乙螨唑y=397.562x+204.957，r2=0.9997。通过信/噪比（S/N）=3，确定联苯肼酯和乙螨唑的检出限为7.9×10-5、1.2×10-5mg/L;通过信/噪比（S/N）=10，确定联苯肼酯和乙螨唑的定量限为2.6×10-4、3.9×10-5mg/L。联苯肼酯和乙螨唑的标准曲线见图2。

2.3 方法的回收率

取水样加标样品分别按上述色谱操作条件进行测定，计算回收率，确定方法的准确度，结果见表2。当联苯肼酯的添加浓度为3.0μg或15.0μg时，回收率在98.67%～103.33%，平均回收率为101.56%，变异系数为1.78%;当乙螨唑的添加浓度为1.0μg或5.0μg时，回收率在97.50%～104.40%，平均回收率为100.28%，变异系数为2.65%。由此可知，该方法准确度良好。

3 结论

本文使用高效液相色谱-串联质谱建立了同时测定联苯肼酯和乙螨唑的分析方法。在甲醇-0.1%甲酸水溶液（V/V=90︰10）作为流动相下，联苯肼酯、乙螨唑分别在3.0～150.0μg/L和1.0～50.0μg/L范围内具有良好的线性关系，说明该方法的准确度良好，操作简单、快速，可同时分析水中联苯肼酯和乙螨唑的残留量。

参考文献：

[1] 张月，韩丙军，赵方方.超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法测定木瓜中联苯肼酯及其代谢产物[J].食品科学，2015，36（24）：280-273.

[2] 姜宜飞，李友顺，王小丽.乙螨唑110克/升悬浮剂高效液相色谱分析方法研究[J].农药科学与管理，2009，30（12）：36-38.

[3] 杨振国，谢道燕，倪婧，等.联苯肼酯对朱砂叶螨致死剂量效应[J].农药，2017，56（6）：453-456.

[4] 蒋庆琳，赵庆阳，张武鸣，等.40%联苯肼酯·乙螨唑悬浮剂防治柑橘红蜘蛛田间药效试验[J].广西植保，2018，（4）：9-11.

[5] 杨德毅，刘莉，吾建祥，等.高效液相色谱测定佛手中联苯肼酯残留量的不确定度评定[J].农药，2019，58（2）：125-129.

[6] 王蒙岑，吴慧明，刘少颖，等.超高效液相色谱_串联质谱法分析乙螨唑在柑桔和土壤中的残留消解动态[J].农药学学报，2009，11（4）：456-461.

[7] 潘静，东琴，高敬雨，等.40%联苯肼酯·乙螨唑悬浮剂的高效液相色谱分析[J].世界农药，2018，40（4）：53-55.