Cu(Ⅰ)-新亚铜试剂分光光度法间接测定硫普罗宁肠溶胶囊中硫普罗宁

(嘉应学院 化学与环境学院，梅州 514015)

硫普罗宁化学名称为N-(2-巯基丙酰基)-甘氨酸(结构如图1)，是一种含有巯基的甘氨酸衍生物，其主要通过侧链具有游离活性的巯基对肝脏细胞进行保护，临床上广泛用于肝脏疾病的治疗[1]。此外，硫普罗宁还能用于治疗老年早期白内障和玻璃体混浊[2]。但过量服用硫普罗宁会引起胃不适、味觉丧失等不良反应[3]。因此，硫普罗宁含量的测定对于生命科学具有重要意义。

图1 硫普罗宁分子结构Fig.1 Molecular structure of tropronin

目前，测定硫普罗宁含量的标准方法[WS1-(X-054)－2002]为滴定法，其他主要测定方法包括分光光度法[4-6]、高效液相色谱法[7-9]、液相色谱-质谱法[10-11]、气相色谱-质谱法[12]、拉曼光谱法[13]和流动注射光度法[14]等，与分光光度法相比，其他方法可能存在操作复杂、选择性较差或仪器价格昂贵等缺点。

本工作通过试验发现，硫普罗宁中的巯基(－SH)能将Cu2＋定量还原为Cu(Ⅰ)，而Cu(Ⅰ)能与2，9-二甲基-1，10-二氮菲(新亚铜试剂)形成黄色络合物，通过测定络合物的吸光度可间接测定硫普罗宁的含量，据此建立了Cu(Ⅰ)-新亚铜试剂分光光度法测定硫普罗宁含量的方法，以期为药物中硫普罗宁含量的测定提供技术参考。

1 试验部分

1.1 仪器与试剂

岛津UV-2401 型紫外可见分光光度计;722s型可见分光光度计。

硫普罗宁标准溶液:100.0 mg·L－1，称取0.010 g硫普罗宁(分析纯)，用水溶解，转移至100 mL容量瓶中，用水定容，摇匀，置于4 ℃冰箱中避光保存，于48 h内使用。其他所需质量浓度均由此溶液稀释制得，现配现用。

Cu2＋溶液:200.0 mg·L－1，称取0.078 6 g五水合硫酸铜于100 mL 的烧杯中，用水溶解，加入3 mol·L－1硫酸溶液2.00 mL，转移至100 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。

新亚铜试剂溶液:0.010 0 mol·L－1。

硫普罗宁肠溶胶囊(标示值200 mg·粒－1)。

乙酸-乙酸钠缓冲溶液(pH 4.8)。

所用试剂均为分析纯;试验用水为二次蒸馏水。

1.2 试验方法

取出5粒硫普罗宁肠溶胶囊内的药粉并混合均匀，称取0.2 g，用水溶解并定容至500.0 mL，得到硫普罗宁样品溶液。在25 mL 比色管中加入硫普罗宁样品溶液2.00 mL，再加入0.0100 mol·L－1新亚铜试剂溶液1.00 mL，水10.00 mL，摇匀，加入200.0 mg·L－1Cu2＋溶液1.00 mL，p H 4.8的乙酸-乙酸钠缓冲溶液4.00 mL，用水稀释至刻度，摇匀，在室温中放置10 min。

同时做试剂空白。用1 cm 比色皿在分析波长为456 nm 处测量此反应体系的吸光度A，以试剂空白作参比。

2 结果与讨论

2.1 分析波长的选择

以100.0 mg·L－1硫普罗宁标准溶液为分析对象，试验考察了此反应体系在波长为400～600 nm时的吸收曲线，结果见图2。

图2 反应体系的吸收曲线Fig.2 Absorption curve of reaction system

由图2 可知，反应体系的最大吸收波长为456 nm，因此，试验选择分析波长为456 nm。

2.2 反应温度的选择

以100.0 mg·L－1硫普罗宁标准溶液为分析对象，试验考察了反应温度分别为20，30，40，50，60，70，80，90 ℃时对反应体系吸光度的影响。结果表明:反应温度为20～80 ℃时，吸光度基本稳定。试验选择反应温度为室温。

2.3 反应时间的选择

以100.0 mg·L－1硫普罗宁标准溶液为分析对象，试验考察了反应时间分别为5，10，20，30，40，50，60，90，120 min 时对反应体系吸光度的影响。结果表明，吸光度在选择的反应时间内基本不变，综合考虑，试验选择反应时间为10 min。

2.4 缓冲溶液酸度的选择

以100.0 mg·L－1硫普罗宁标准溶液为分析对象，试验考察了乙酸-乙酸钠缓冲溶液的pH 分别为3.6，4.0，4.4，4.8，5.0，5.2，5.6时对反应体系吸光度的影响。结果表明，吸光度在pH 为3.6～5.6时基本不变。综合考虑，试验选取缓冲溶液的pH 为4.8。

2.5 缓冲溶液用量的选择

以100.0 mg·L－1硫普罗宁标准溶液为分析对象，试验考察了乙酸-乙酸钠缓冲溶液的用量分别为0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00，7.00，8.00，9.00 mL时对反应体系吸光度的影响。结果表明，吸光度在缓冲溶液用量为3.00～9.00 mL时有较大值且基本不变。综合考虑，试验选取缓冲溶液的用量为4.00 mL。

2.6 Cu2＋溶液用量的选择

以100.0 mg·L－1硫普罗宁标准溶液为分析对象，试验考察了Cu2＋溶液的用量分别为0.50，1.00，1.20，1.40，1.60，1.80，2.00，2.20，2.40，2.60 mL时 对反应体系吸光度的影响。结果表明，吸光度在所选择的Cu2＋溶液用量范围内基本不变。综合考虑，试验选择Cu2＋溶液的用量为1.00 mL。

2.7 新亚铜试剂溶液用量的选择

以100.0 mg·L－1硫普罗宁标准溶液为分析对象，试验考察了新亚铜试剂溶液用量分别为0.20，0.40，0.60，0.80，1.00，1.20，1.40，1.60，1.80，2.00 mL时对反应体系吸光度的影响，结果见图3。

图3 新亚铜试剂溶液用量对吸光度的影响Fig.3 Effect of amount of neocuproine solution on absorbance

由图3可知:反应体系吸光度在新亚铜试剂溶液用量为0.60～2.00 mL 时基本不变。综合考虑，试验选择新亚铜试剂溶液用量为1.00 mL。

2.8 共存物质的影响

选取了对本方法可能造成干扰的葡萄糖、蔗糖、D-果糖、L-谷氨酸、DL-苹果酸、L-丝氨酸、L-腈氨酸、L-精氨酸、D-甘露醇、淀粉、乳糖等11种物质进行试验，相对误差需控制在±5% 以内。以100.0 mg·L－1硫普罗宁标准溶液为分析对象，试验考察了以上11种共存物质对反应体系吸光度的影响。结果表明:1 000倍的葡萄糖、蔗糖、D-果糖、L-谷氨酸、DL-苹果酸、L-丝氨酸、L-腈氨酸，100倍的L-精氨酸、D-甘露醇，200倍的淀粉，500倍的乳糖对硫普罗宁的测定无干扰。

2.9 标准曲线和检出限

按照试验方法对0.800 0，1.600，2.400，3.200，4.000，4.800，5.600，6.400，7.200，8.000，8.800，9.600，10.40，11.20，12.00，12.80，13.60，14.40，15.20，16.00，16.80，17.60，18.40，19.20，20.00 mg·L－1标准溶液系列进行测定，以硫普罗宁的质量浓度为横坐标，其对应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线。硫普罗宁的质量浓度在0.800 0～20.00 mg·L－1内符合朗伯-比尔定律，摩尔吸光系数(ε)为8.7×103L·mol－1·cm－1，线性回归方程为y＝0.042 01x＋0.005 4，相关系数0.999 8。

按照试验方法对试剂空白进行11次平行测定，以3倍测定值的标准偏差(s)和标准曲线斜率(k)的比值计算得检出限(3s/k)，以10s/k计算测定下限，检出限和测定下限分别为0.057，0.19 mg·L－1。

2.10 精密度和准确度试验

按照试验方法测定硫普罗宁肠溶胶囊中硫普罗宁的含量，平行测定5 次，平均测定值为200.31 mg·粒－1，与标示值(200 mg·粒－1)相符，且与国家药品标准方法[WS1-(X-054)－2002]分析结果(198.05 mg·粒－1)结果基本吻合;测定值的相对标准偏差(RSD)为0.20%。

2.11 回收试验

按照试验方法对硫普罗宁肠溶胶囊进行加标回收试验，并计算回收率，结果见表1。

表1 回收试验结果Tab.1 Results of test for recovery

本工作建立了Cu(Ⅰ)-新亚铜试剂光度法测定硫普罗宁肠溶胶囊中硫普罗宁含量的方法，该方法设备简单、样品无需特殊前处理，操作便捷、灵敏度高、选择性好，其测定结果与标准方法的相近，具有一定的实用价值。

致谢：本工作是在嘉应学院化学与环境学院温欣荣老师指导下完成的，在此深表谢意。