甲状腺癌组织中NF-κB及HMGB1水平与肿瘤直径和淋巴结转移的相关性研究

叶 果，张玉莲，陈 瑜

（重庆大学附属肿瘤医院，重庆市肿瘤研究所，重庆市肿瘤医院，重庆 400030）

甲状腺癌属内分泌恶性肿瘤的一种，生长缓慢，容易发生淋巴结转移，主要类型是乳头状癌，恶性程度很低。甲状腺癌的发病机制尚不明确，涉及多种肿瘤相关因子［1-2］。最常用的甲状腺癌诊断方式主要为病理形态学检查，但该方法用于诊断微小甲状腺癌或某些不典型甲状腺癌存在一定困难［3-4］。研究发现，HMGB1与细胞的异常增殖密切相关。NF-κB 是一种核转录因子，其表达异常与炎症、病毒感染、恶性肿瘤等多种疾病有关。NF-κB p50、p65是NF-κB家族的最重要成员［5-6］。为了探究甲状腺癌组织中NF-κB及HMGB1水平与肿瘤直径和淋巴结转移的相关性，本研究特选取了我院收治的甲状腺癌患者进行研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料2017年1月～2018年12月我院收治的150例甲状腺癌患者进行回顾性分析。本研究通过医院伦理委员会批准，所有患者均签署知情同意书。患者男89例、女61例，年龄24～73岁，平均年龄（47.1±4.8）岁，淋巴结转移51例。肿瘤直径＜1.0 cm45例，直径≥1.0 cm 105例。根据WHO组织学分类标准分为乳头状腺癌136例、髓样癌14例。根据AJCC临床病理分期标准：Ⅰ期～Ⅱ期97例、Ⅲ期～Ⅳ期53例。

纳入标准：患者病情经术后病理组织学检查确诊。排除标准：合并其他内分泌疾病、继发性肿瘤或1个月内接受过放、化疗治疗的患者。

1.2 检测方法

1.2.1 样本处理将手术收集的甲状腺癌组织样本，经常规石蜡包埋，制成石蜡切片，切片厚度4μm。

1.2.2 免疫组织化学染色采用链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物（SABC）法，SABC试剂盒购自武汉博士德公司。将切片脱蜡复水，PBS缓冲液清洗，使用柠檬酸抗原修复液热修复处理，山羊血清封闭，分别滴加HMGB1、NF-κB p50、NF-κB p65一抗，置于湿盒-4℃过夜，抗体均购自上海田源生物技术有限公司。取出湿盒，室温复温2h，PBS缓冲液清洗。滴加二抗，二氨基联苯胺（DAB）显色，苏木素复染，梯度酒精脱水后封片。阴性对照：PBS代替一抗平行操作染色。

1.2.3 HMGB1、NF-κB p50、NF-κB p65表达结果判定（1）细胞质未着色记0 分、淡黄色记1 分、棕黄色记2 分、棕褐色记3 分；（2）阳性细胞率＜5% 记0 分、5%～25%记1分、26%～50%记2分、＞50%记3分。总分为两者得分乘积，≤1分为阴性（-），≥2分为阳性（+）。

1.3 统计学方法采用SPSS 22.0统计学软件进行数据分析，计量资料用mean±SD表示，计数资料采用%表示，采用配对t检验，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同临床病理分期甲状腺组织的HMGB1表达分析肿瘤直径≥1.0 cm、临床病理分期为Ⅲ期～Ⅳ期、存在淋巴结转移的甲状腺患者HMGB1表达阳性率显著更高（P＜0.05），见表1。

表1 不同临床病理分期甲状腺组织的HMGB1表达分析［n（%）］

2.2 不同临床病理分期甲状腺组织的NF-κB p50、NFκB p65表达分析肿瘤直径≥1.0 cm、临床病理分期为Ⅲ期～Ⅳ期、存在淋巴结转移的甲状腺患者NF-κB p50、NF-κB p65表达阳性率显著更高（P＜0.05），见表2。

表2 不同临床病理分型甲状腺组织的NF-κB p50、NF-κB p65表达分析［n（%）］

2.3 NF-κB p50、NF-κB p65、HMGB1蛋白表达的相关性经spearman等级相关分析，HMGB1和NF-κB p50、NF-κB p65蛋白表达呈正相关（r=0.725、0.684，P＜0.05）。

2.4 甲状腺癌的多因素 logistic 回归分析NF-κB p50阳性、NF-κB p65阳性、HMGB1阳性均为甲状腺癌的独立危险因素，见表3。

3 讨论

甲状腺癌是内分泌系统的常见恶性肿瘤，不同的组织类型甲状腺癌的恶性程度不同［7-8］。目前，甲状腺癌的发病机制尚未明确，可能与多种癌基因异常激活和抑癌基因失活有关。其外，肿瘤的浸润转移与多种肿瘤相关因子的异常表达和相互作用相关［9-10］。

表3 甲状腺癌的多因素 logistic 回归分析

HMGB1 是非组蛋白染色体结合蛋白，在真核细胞核内存在。正常情况下，HMGB1 主要存在于细胞核中。外界刺激时，从细胞核释放到细胞外，参与DNA修复、重组和复制等过程［11-12］。研究发现，HMGB1在胰腺癌、胃癌、肺癌等多种肿瘤中异常表达，通过激活 Ras 和MAPK 信号通路，参与细胞恶变，促进细胞异常增殖，加剧炎症反应［13-14］。本研究中，肿瘤直径≥1.0 cm、临床病理分期为Ⅲ期～Ⅳ期、存在淋巴结转移的甲状腺患者HMGB1表达阳性率显著更高；说明HMGB1与甲状腺癌的发生、发展密切相关。

NF-κB是一类核蛋白因子，可特异性结合免疫球蛋白重链和κ轻链基因增强子序列。研究发现，NF-κB转录因子与细胞增殖和凋亡密切相关，其表达失控与肿瘤发生有关［15-16］。通常情况下，NF-κB以非活性形式存在于胞浆中，激活后转为到细胞核发挥作用。研究发现，NF-κB被不恰当激活，无法返回胞浆，功能异常增高，导致细胞的正常信号转导发生改变，促进细胞癌变［17-18］。本研究中，肿瘤直径≥1.0 cm、临床病理分期为Ⅲ期～Ⅳ期、存在淋巴结转移的甲状腺患者NF-κB p50、NF-κB p65表达阳性率显著更高；NF-κB p50阳性、NF-κB p65阳性、HMGB1阳性均为甲状腺癌的独立危险因素。NFκB p50、NF-κB p65在临床分期增高患者中，表达阳性率显著升高，可能作为新的治疗靶点，促进甲状腺癌细胞凋亡，抑制细胞增殖，达到治疗目的。NF-κB的致癌机制可能为：（1）抑制细胞死亡信号转导，使细胞对凋亡信息产生抗性；（2）NF-κB上调细胞周期素D1表达，促使细胞周期向S期转化，细胞增殖旺盛［19-20］。NF-κB p50、NF-κB p65在甲状腺癌中的表达趋势为临床分期越高、肿瘤直径越大，其表达越显著，在发生淋巴结转移组织中更是高表达，说明NF-κB p50、NF-κB p65不仅与甲状腺癌的发生有关，还影响其转移和侵袭生长进程。HMGB1和NF-κB p50、NF-κB p65蛋白表达呈正相关；提示HMGB1和NF-κB p50、NF-κB p65可能共同参与甲状腺的发病，猜测可能是NF-κB p50、NF-κB p65可能通过调控细胞凋亡相关因子，促进HMGB1表达，发挥协同作用，具体机制需要进一步研究。可见，甲状腺癌组织中NF-κB p50、NF-κB p65、HMGB1异常表达，与肿瘤直径和淋巴结转移密切相关，可能与甲状腺癌的发生发展有关。