不同浓度酒精对雌鼠卵巢功能的影响

邓雪冰，张江霖，廖 英，邹 艳，尹艳华，陶晓群

（1.湖南中医药高等专科学校，株洲 412007；2.湖南省妇幼保健院妇保科，长沙 410000）

卵巢衰老是卵巢储备功能逐渐下降直至最后衰竭的过程，受多种因素的影响[1-3]。除年龄外，外界环境、遗传因素、生活方式、社会心理、免疫等都可通过直接或间接途径影响卵巢功能，导致卵巢功能下降。近年来，发现卵巢早衰和卵巢储备下降的病人呈不断上升及年轻化的趋势［4-6］。原因之一可能是女性对内分泌疾病的重视及临床诊断水平的提高，其二可能是与现代女性生活方式有关。研究发现吸烟、饮酒、吸毒是影响女性卵巢储备功能的常见因素［7-9］。但目前各种行为方式对卵巢功能的影响权重及影响机制仍不明确，如何去趋利避害以最大限度保护女性卵巢功能具有重要的研究意义。因此本实验予不同浓度酒精灌胃雌鼠不同的时间，制造雌鼠饮酒模型，通过检测外周血清性激素含量和称量卵巢湿重，从而探讨酒精对卵巢功能损伤的规律及机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物40只健康成年SD雌性大鼠，采购于湖南长沙斯莱克景达实验动物有限公司，体重为200～220g之间，给予足够的水和食物。饲养条件：房间温湿度适宜，持续日光灯照射，温度为24℃，湿度为60%。

1.1.2 试剂与设备试剂为10%、20%、30%的酒精（配置方法：10%酒精：15mL 99%酒精加135mL 蒸馏水配至150mL ；20%酒精：30mL 99%酒精加120mL 蒸馏水配至150mL ；30%酒精：45mL 99%酒精加105mL 蒸馏水配至150mL ）；卵泡刺激素（FSH）、雌二醇（E2）、抗苗勒管激素（AMH）、抑制素B（INH-B）试剂检测盒，购自上海酶联生物科技有限公司。主要仪器设备：DNM-9606型酶标分析仪、ES-1000E电子天平。

1.2 方法

1.2.1 分组按随机数字法将40只大鼠分为 4 组，分别为10%酒精组（低浓度组）、20%酒精组（中浓度组）、30%酒精组（高浓度组）及对照组（蒸馏水组）。

1.2.2 动物模型制备研究组大鼠予 10%、20%、30%酒精2mL灌胃，早晚各1次，对照组予等体积的蒸馏水灌胃，方法与研究组相同。灌胃4周后每组随机处死5只SD大鼠，余下的20只大鼠继续灌胃至8周处死。

1.3 组织标本制备［10］雌鼠饮酒模型建立后，四组SD大鼠在麻醉的状况下断头摘眼球后取血，取血5mL于促凝管中，室温下自然凝固，离心机离心，取上方血清，用ELISA法（双抗夹心法）测定抗苗勒试管激素（AMH）、抑制素B（INH-B）、 卵泡刺激素（FSH）、雌二醇（E2）；然后取大鼠的脏器双侧卵巢，用电子天平称重。

1.4 统计学分析计量资料采用均数±标准差表示。组间比较采用多样本t检验，组内比较采用独立样本t检验，所有统计数据均输入SPSS 18.0 软件，通过软件包进行数据分析，P＜0.05为有显著差异性。

2 结果

2.1 不同浓度酒精灌胃对大鼠血清FSH、E2的影响

灌胃4周时，30%酒精组的血FSH、E2水平显著高于其他三组（P＜0.05），10%、20%酒精组血FSH、E2无显著变化（P＞0.05）。灌胃8周时，三种酒精组的FSH均升高，且较同浓度组4周时高（P＜0.05）。30%酒精组E2水平较灌胃4周时显著下降（P＜0.05）；而10%和20%酒精组E2水平较4周时显著升高（P＜0.05），且较对照组和同期30%酒精组明显升高（P＜0.05），见表1。

表1 不同浓度酒精灌胃雌鼠后血清FSH、E2水平比较（n=5）

2.2 不同浓度酒精灌胃后对大鼠血清AMH、INH-B的影响灌胃4周时，20%、30%酒精组血AMH、INH-B明显低于对照组（P＜0.05），而10%的酒精组AMH、INH-B无显著变化（P＞0.05）。灌胃8周时，三种浓度酒精组 AMH、INH-B 均显著降低（P＜0.05），且比灌胃4周时更低（P＜0.05），见表 2。

表2 不同浓度酒精灌胃雌鼠后血清AMH、 INH-B水平比较（n=5）

2.3 不同浓度酒精灌胃对卵巢湿重的影响灌胃4周时，30%酒精组的双侧卵巢湿重明显高于其他三组（P＜0.05），而灌胃8周时，大鼠双侧卵巢湿重较4周时减轻（P＜0.05）；灌胃8周时10%和20%酒精组双侧卵巢湿重较4周时显著升高（P＜0.05），并且高于同期 30%酒精组和对照组的卵巢湿重，有显著性差异（P＜0.05），见表3。

表3 不同浓度组大鼠卵巢湿重情况比较及同浓度组内前后比较（n=5）

3 讨论

临床上评价卵巢储备功能的指标主要有：年龄、AMH、卵巢体积、双侧窦卵泡数目、FSH、E2、INH-B等［11］。年龄一直被认为是预测卵巢储备功能最重要指标之一，随着年龄增长，女性卵巢储备能力不断下降［12］。卵巢体积、质量及窦卵泡数也是反映卵巢功能的重要指标，国际上普遍用窦卵泡数量来评定卵巢功能，卵巢体积、质量与窦卵泡数量有相关性［13］。血清FSH、E2水平是临床上评价卵巢储备能力的常用指标［14］，卵巢功能减退的早期表现E2水平上升，随之出现下降，血FSH水平上升，较其它症状出现较早。INH-B是由窦前卵泡和窦卵泡分泌的糖蛋白类激素，临床研究表明，INH-B的下降早于FSH的升高，能更早期反应卵巢储备功能，在临床运用越来越广泛［15］。AMH和女性卵巢储备功能关系密切，并具有一定的稳定性，是目前被认为反映卵巢功能最佳的内分泌学指标［16］。

本实验中，发现灌胃4周后30%酒精组血FSH水平明显高于其他三组，AMH、 INH-B明显低于其他三组，这表明酒精摄入可影响垂体促性腺激素和血清性激素的水平，其影响程度与摄取酒精的浓度有相关性，短时间内只有高浓度酒精出现该效应，血液酒精浓度越高，血清FSH水平升高得越明显，而AMH、INH-B降低的越明显，这与随璐［17］等人的研究结果基本上一致。灌胃8周时，10%和20%酒精组的血清FSH水平较灌胃4周时显著升高，较对照组也明显升高。这表明低浓度酒精短时间刺激对卵巢功能影响不大，只有长时间刺激才引起卵巢功能下降，从而导致FSH升高。20%酒精灌胃雌鼠4周，FSH与对照组比较无显著差别，但AMH、INH-B却降低，说明AMH、INH-B预测卵巢储备功能比FSH更加敏感。

本实验还发现灌胃4周后30%酒精组血E2水平明显高于其他三组，但灌胃8周后10%和20%酒精组的E2水平和较4 周时显著升高，且明显高于同期30%酒精组和对照组，但30%酒精组灌胃8周后，E2明显降低。这和王庆学研究的低浓度酒组使雌鼠E2升高，高浓度酒组使E2水平降低得研究结果基本一致［18］。E2是由卵巢合成和分泌的，E2水平越低，卵巢功能越差［5］。本研究还发现卵巢湿重的变化和E2水平基本保持一致，少量或短时间饮酒可能刺激卵巢，引起卵巢生长发育，从而导致卵巢质量增加，而大剂量的酒精刺激可能对卵巢产生毒性，导致卵巢萎缩，卵巢质量减轻，卵巢缩小，窦卵泡数目减少，因此E2水平降低。这和LINA［19］及王正朝［20］的研究结果基本一致。而林兵等人［21］研究发现只要连续饮酒4周就可以改变成年大鼠的营养结构，并使大鼠体重下降，但研究未发现对卵巢质量有影响，和我们的研究结果也基本基本一致。

通过本研究发现，长时间、过量饮酒会对卵巢产生毒性，导致女性生殖内分泌紊乱，加快卵巢的衰老，但其损伤机制有待进一步探索和研究。因此做好女性健康教育，崇尚健康生活方式，提醒妇女有节制饮酒，可以促进人类生殖健康。