祛毒胶囊中栀子的定性与定量分析

曾芳俐 张 磊* 李 敏 冯 华 李宝忠

1.贵州省遵义市产品质量检验检测院，贵州 遵义 563002; 2.贵州省遵义市播州区中医院药学部，贵州 遵义 563100

祛毒胶囊处方由葛根、栀子、桃仁、赤小豆、山楂、红花、牡蛎、薏苡仁、大黄九味中药材组成[1]，具有清热解毒、活血祛瘀、通便泻火的功效，用于血瘀热结证所致湿疮、肤痒、潮红、疱疹、渗出等症。作为中药复方制剂,具有药味较多，现有标准只对山楂药材做熊果酸对照定性鉴别。因此，笔者对祛毒胶囊中栀子药材进行定性与定量分析，建立定性与定量检验方法，可作为祛毒胶囊中栀子药材内控制指标。

1 仪器与材料

1.1 仪器 岛津 LC-20AD高效液相色谱议(包括二元泵，紫外检测器，柱温箱，自动进样器，Shimadzu 分析仪器工作站和处理软件)，Diamosil®C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)为色谱柱；AB265-S型梅特勒电子天平(北京中恒日鑫科技有限公司)，KQ-300DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 材料 栀子对照药材、栀子苷对照品(购于中国食品药品检定研究院，批号分别：120986-201610、110749-200714)，乙腈为色谱纯(天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：20180400)，水为娃娃哈纯净水，其他试剂均为分析纯，3批祛毒胶囊(批号分别为：161201、171101、180901)遵义市中医院购买，阴性样品自制。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别[2-3]取样品约2.0 g，加50%甲醇10 mL,超声处理40 min，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取栀子对照药材1 g，同法制成对照药材溶液，再取栀子苷对照品，加甲醇制成每1 mL含4 mg的溶液，作为对照品溶液。同样品制法制成阴性样品溶液。吸取上述4种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶H板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5∶5∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在日光下检视，于对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的黄色斑点；再喷以10%硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果表明，分离度好，斑点显色清晰，而阴性无干扰。如图1所示。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件[2,4-6]Diamosil®C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)为色谱柱，乙腈-0.1%磷酸(12∶88)为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长为238 nm，柱温30 ℃。进样量10 μL，相连两峰分离度应符合规定，理论塔板数按栀子苷峰计，应不低于1500。

未显色 日光下检视 显色后1～3 样品 4.对照药材 5.阴性样品 S.栀子苷对照图1 TLC薄层色谱图

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取栀子苷照品适量，加甲醇溶解制成含栀子苷0.170m g/mL的对照品溶液，摇匀，用0.45 μm 的微孔滤膜滤过，即得。

2.2.3 供试品溶液制备 取内容物约1.6g(批号：180901),精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25 mL，超声处理40 min，取出，放冷，用甲醇补足重量，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 阴性溶液制备 取缺栀子药材处方下自制阴性样品，按“2.2.3”项下供试品溶液制备方法制备成阴性对照溶液。精密吸取10 μL注入高效液相色谱仪，按照色谱条件下测定，结果表明阴性对照的色谱图在葛根素相应的保留时间无干扰峰。如色谱图2、图3、图4所示。

图2 对照HPLC图谱

图3 供试品HPLC图谱

图4 阴性样品HPLC图谱

2.2.5 线性关系的考察 精密吸取对照品混合溶液2 μL、6 μL、10 μL、14 μL、18 μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，分别以栀子苷浓度(mg)为横坐标，峰面积积分值(A)为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，回归方程分别为：Y=320744X-16664，R=0.9999；在0.340～ 3.060 mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。

2.2.6 精密度试验 精密吸对照品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪中，连续测定6次，记录峰面积，结果栀子苷峰面积的RSD为0.81%，结果表明仪器精密度良好。

2.2.7 稳定性试验 分别吸取(批号180901)同一供试品溶液于0、4、8、12、16、20、24 h，精密吸(批号180901)样品制备的供试品溶液10 μL进样，测得峰面积，RSD均值为0.14%，表明在24 h内稳定。

2.2.8 重复性试验 取同一批样品(批号180901)6份，精密称定，按照“2.2.3”项下方法制备成供试品溶液。测定峰面积，计算栀子苷平均含量为2.05 mg/g，RSD为0.23%，结果表明重复性好。

2.2.9 加样回收试验 取(已知含量含栀子苷2.05 mg/g)的样品6份，每份约0.8 g，精密称定，精密称取栀子苷对照品适量，按“2.2.3”项下的方法操作，计算回收率,栀子苷平均回收率为100.66%、RSD为0.34%。见表1。

2.2.10 3批样品含量测定结果 详见表2。

表1 加样回收试验结果

表2 祛毒胶囊3批样品含量测定结果

3 讨论

通过祛毒胶囊中栀子苷的研究。笔者增加栀子药材中栀子苷作为对照，进行定性与定量分析。在TLC中以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5∶5∶1∶1)为展开剂[2]，展开效果好，与各斑点均能有效分离，斑点显色清晰，且阴性无干扰；采用HPLC法测定处方中栀子药材有效成分栀子苷[4-6]，供试品色谱中，在与对照品色谱相应保留时间阴性无干扰。

对甲醇-水、甲醇-磷酸溶液、乙睛-水、乙睛-磷酸溶液4个系统的流动相考察结果表明，乙睛-0.1%磷酸溶液效果最好。同时采用DAD检测器进行紫外区全波长扫描，在250 nm、238 nm波长下有最大吸收，根据所测目标峰在238 nm波长下检测，分离好，峰面积较大，因此选择238 nm为本实验的检测波长。

综上所述，所建立TLC法和HPLC法，样品处理简单，分析速度快，结果准确可靠，可为祛毒胶囊中栀子药材控制打下基础。