清炎合剂的定性鉴别研究

邹昱蕾 张韶湘 杨皓然 余晓玲

昆明市中医医院制剂科，云南 昆明 650011

清炎合剂是在我院老中医行医多年的验方基础上研制的医院制剂，由金银花、连翘、防风、荆芥、白芷、蔓荆子、黄芩、天花粉、生地黄、赤芍、当归、香附、桑白皮、桔梗、高良姜、陈皮、炒建曲、甘草等18味药组成，以金银花、连翘清热、解毒为君药；荆芥、防风、白芷、蔓荆子、黄芩祛风清热，天花粉、生地黄增强清热之功共为臣药；当归、赤芍、香附活血散瘀，桑白皮、桔梗合甘草泻热利咽。苦寒清热药中反佐高良姜以免药物格拒，且配香附行气温中以制苦寒太过，陈皮、炒建曲理气行滞和胃，均为佐药；甘草调和诸药为使，全方共奏清热解毒、活血祛风之功效，主治风热毒邪上扰，脉络阻滞所致喉痹、乳娥、鼻塞、目赤肿痛，用于咽炎等五官科慢性炎症。临床使用多年，疗效较好。为加强对制剂质量控制，综合分析处方中各药味的性质，从该方君药中选取连翘、臣药中选取黄芩、佐药中选取赤芍，对其主要有效成分进行薄层色谱法研究，制定该制剂的质量标准，为临床安全用药提供理论基础和科学依据。

1 药品与试药

清炎合剂(批号：20180916、20181228、20190328昆明市中医医院)；连翘苷对照品(批号110821-201816)、黄芩苷对照品(批号110715-201821)、芍药苷对照品(批号110736-201943)，均来源于中国食品药品检定研究院；1%香草醛硫酸溶液、 2%三氯化铁乙醇溶液、乙酸乙酯、丁酮、甲酸、乙醚、正丁醇、正己烷、1%氢氧化钠、浓氨液、三氯甲烷、甲醇、氯仿、水；试剂均为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 连翘的鉴别 取清炎合剂50 mL，水浴浓缩至约25 mL，放冷，乙醚振摇提取2次，每次25 mL，弃去乙醚提取液，水层用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次25 mL ，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的水30 mL洗涤1次，弃去水洗液，取正丁醇提取液置水浴上蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，加于中性氧化铝柱(100～200目，2.5 g，内径1～1.5 cm，干法装柱)上，用甲醇30 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液[1]。另取处方中除去连翘的其他药味, 按处方比例同法制成缺连翘的阴性对照样品。取阴性对照样品50 mL, 同供试品溶液的制法, 制成阴性对照溶液。取连翘苷对照品，加甲醇制成2 mg/mL的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典通则0502)试验，吸取上述3种溶液各5～10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(7∶1)为展开剂展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点[2]。阴性对照在相应位置无斑点, 表明阴性对照无干扰。如图1所示。

2.2 黄芩的鉴别 取清炎合剂30 mL，水浴蒸干，残渣加甲醇20 mL使溶解，静置，取上清液作为供试品溶液。

另取处方中除去黄芩的其他药味, 按处方比例同法制成缺黄芩的阴性对照样品。取阴性对照样品30 mL, 同供试品溶液的制法, 制成阴性对照溶液。

取黄芩苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法(中国药典通则0502)试验，吸取上述供试品溶液、阴性对照溶液各5～10 μL、对照品溶液5 μL，分别点于同一4%醋酸钠溶液制备0.4%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇溶液。在供试品的薄层色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点[3-4]。阴性对照在相应位置无斑点, 表明阴性对照无干扰。如图2所示。

2.3 赤芍的鉴别 取2.1项下的供试品溶液作为供试品溶液。另取处方中除去赤芍的其他药味, 按处方比例同法制成缺赤芍的阴性对照样品。取阴性对照样品50 mL, 同供试品溶液的制法, 制成阴性对照溶液。取芍药苷对照品，加甲醇制成2 mg/mL的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典通则0502)试验，吸取上述3种溶液各3～5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点[5]。阴性对照在相应位置无斑点, 表明阴性对照无干扰。如图3所示。

图1 连翘TLC色谱 图2 黄芩TLC色谱 图3 赤芍TLC色谱

3 讨论

清炎合剂经临床验证疗效确切、效果显著。有研究表明，清炎合剂除直接具有抑菌作用外还有增强机体免疫力而达到抑菌的作用[6]。连翘清热解毒，为方中君药，具有抗菌、抗病毒等多种药理活性[8]，其中木脂素类有效活性成分连翘苷含量较高；黄芩祛风清热，为清炎合剂中的臣药之一,其黄芩苷含量较高, 有大量文献阐述黄芩中黄芩苷为主要药效成分, 且被证实存在广泛的药理活性, 具有解热抗炎、抗微生物等多种药理作用[9-10]；赤芍活血散瘀，主要含有芍药苷, 羟基芍药苷等丰富的苷类化合物, 故选定其主要活性成分芍药苷作为定性指标。综上，采用薄层色谱法对制剂中连翘、黄芩、及赤芍进行定性鉴别, 对于清炎合剂的质量控制具有重要意义。

清炎合剂处方药味较多，在检测中相互之间有干扰，研究中发现，黄芩的鉴别如采用《中国药典》方法[1]，样品以乙酸乙酯-甲醇(3∶1)提取，无法得到清晰斑点，原因可能为乙酸乙酯-甲醇(3∶1)溶剂系统极性较弱，增加了脂溶性成分的溶出和分离难度；本研究采用甲醇为溶剂进行提取，因甲醇极性较大，对弱极性成分提取效率较低，干扰较少，故可得到清晰斑点。连翘及赤芍的鉴别，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显一个相同颜色的斑点，而按处方比例同法制成的阴性对照样品，无相应斑点，即阴性无干扰，说明此鉴别有一定的专属性。

本研究对制剂中连翘、黄芩、赤芍进行TLC 定性鉴别，建立的质量控制分析方法,并经过对多批产品的验证,结果表明，该质量控制所采用的方法专属性强、灵敏度高、重复性好、方法简便、准确，可用于清炎合剂质量控制中的定性鉴别方法。