高效液相色谱技术在噁虫威杀虫剂及其微胶囊有效含量测定中的应用研究

周蓉(南京市产品质量监督检验院，江苏 南京 210000)

0 引言

噁虫威杀虫剂是一种氨基甲酸酯类杀虫剂，具有触杀和胃毒作用，能够高效杀虫，并且残留率低[1-2]，是一种卫生和农业生产两用的广谱杀虫剂。但由于噁虫威在碱性介质中易分解、难溶于水且具有中等危害毒性[3]，因此可以将噁虫威杀虫剂进行微胶囊化从而降低毒性，延长其有效期。杀虫剂分析方法报道的有分光光度法、液相色谱法、气相色谱-质谱联用法等。目前，对于噁虫威杀虫剂及其微胶囊有效含量的测定方法的研究相对较少。本研究采用反相高效液相色谱法，对噁虫威杀虫剂及其微胶囊的有效含量进行分析研究，并对此方法的有效性进行评估。高效液相色谱技术简称HPLC技术是一种利用高压泵将极性溶剂泵入装有填充剂的色谱柱中，经进样阀注入的样品被流动相带入色谱柱内进行分离后进入检测器，由记录仪记录色谱信号并进行数据处理得到分析结果的一种新型技术[4-5]。由于HPLC技术具有响应快速、反应灵敏、准确度好、精密度高的优点，目前已广泛使用于农药、氨基酸、蛋白质、多糖、金属有机物等物质的分析[6]。

1 实验部分

1.1 实验仪器与试剂

仪器：920-LC高效液相色谱仪(美国Varian公司)；Millipore Q超纯水器(美国Millipore公司)；Inertsil ODS-2色谱柱(岛津(上海)实验器材有限公司)；超声波清洗机(上海科导超声仪器有限公司)；FA1604N分析天平(上海菁海仪器有限公司)；0.22μm有机相滤膜。试剂：噁虫威杀虫剂标样(上海谷研有限公司)；噁虫威杀虫剂原药(某公司)；噁虫威杀虫剂微胶囊(自制)；乙腈：色谱纯(西格玛奥德里奇贸易有限公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 高效液相色谱检测条件

①色谱柱：Inertsil ODS-2(4.6×250mm，5μm)；②流动相：乙腈：水=6:4(V:V)；③流速：1.0mL/min；④柱温：35℃；⑤进样量：20μL；⑥检测波长：254nm。

1.2.2 标准曲线制作

确称取噁虫威杀虫剂标样0.0500g(精确到0.0001g)置于100mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容，摇匀，配制500ppm的噁虫威标样储备液。分别移取噁虫威储备液1、2、5、10、2、50mL 置于100mL容量瓶中，用乙腈定容，摇匀。测试前用0.22μm的有机相滤膜过滤。在上述高效液相色谱条件下进行测试，以噁虫威杀虫剂浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。然后利用精密度、检出限和加标回收率来对本测试方法进行评价。

1.2.3 噁虫威杀虫剂微胶囊有效成分提取

准确称取0.1000g噁虫威杀虫剂微胶囊样品于样品瓶中，加入10mL乙腈，室温下超声萃取60min，取上清液用0.22μm的有机相滤膜过滤，待检。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的选择

在190～400nm的波长范围内，扫描了噁虫威的吸收光谱。结果显示，噁虫威在254nm处有最大吸收波长，因此选择254nm作为试验的检测波长。根据噁虫威的性质，选择乙腈作为有机溶剂，研究发现乙腈-水体系不仅溶解度高，且柱压低，因此选择乙腈-水作为流动相。经测定，选用乙腈：水=6:4作为流动相。当流速分别为0.8、1.0、1.5、2.0mL/min，考察不同流速对分离效果的影响。研究发现当流速达到1.0mL/min时，有效成分噁虫威和其他杂质能够很好的分离且峰形对称完整；柱压随着流速的增大而不断增加。综合考虑分离效果、峰形、柱压等因素，选择流速为1.0mL/min。在上述高效液相色谱条件下对噁虫威标样和原药进行测定，分别在2.34、2.33min时出峰，保留时间一致。图1、2中噁虫威有效成分和杂质均能够有效分离，且峰形对称完整，基线稳定，出峰时间短，能够准确高效地进行检测。

图1 噁虫威杀虫剂标样高效液相色谱图

图2 噁虫威杀虫剂原药高效液相色谱图

2.2 标准曲线

定量分析主成分时，要求标准曲线的线性相关系数高于0.999。在上述高效液相色谱检测条件下，噁虫威杀虫剂浓度与峰面积响应值线性关系如图3所示。标准曲线的线性方程为y=2730.7x+13103.3，线性相关系数为0.99925，满足定量分析要求。

图3 噁虫威杀虫剂浓度与峰面积响应值线性关系图

由于本方法将用于噁虫威原药及其微胶囊样品的定量分析，因此需要通过精密度、检出限、加标回收率来进行评价。

2.3 精密度测试

选择浓度为50ppm的噁虫威溶液样品，在上述高效液相色谱条件下连续进样7次进行相对标准偏差(RSD)计算，用相对标准偏差来表征该方法的精密度。如表1。

对主成分进行定量分析时，要求此方法的RSD在0～3%之间。计算得RSD为0.64%，可以达到定量分析的要求。

2.4 加标回收率测试

取浓度为100ppm的噁虫威溶液样品0.8mL，加入浓度为100ppm的噁虫威杀虫剂/甲醇标准溶液0.2mL中，形成加标样进行测定。

表1 精密度分析结果

计算得到加标回收率R=104.1%，符合95%～105%的要求。如表2。

表2 加标回收率分析结果

2.5 噁虫威杀虫剂微胶囊有效成分测定

在上述液相色谱条件下，测定噁虫威杀虫剂微胶囊有效成分的萃取液，保留时间为2.32min。在相同的高效液相色谱条件下，噁虫威杀虫剂标样、原药与噁虫威杀虫剂微胶囊有效成分萃取液二者保留时间一致。

3 结语

文章建立了一种测定噁虫威杀虫剂及其微胶囊有效含量的高效液相色谱方法，采用C18反向色谱柱，以乙腈：水=6:4作为流动相，流速为1.0mL/min，柱温为35℃，实现了噁虫威有效成分和其他杂质的有效分离。该液相色谱条件有良好的精密度和回收率，能够高效、准确地对噁虫威杀虫剂及其微胶囊有效成分进行定量分析。