上皮性卵巢癌组织NFAT3、Maspin 表达及临床意义

王英，闪海霞，孙勃

（郑州大学附属南阳市中心医院妇产科，河南 南阳473000）

上皮性卵巢癌是卵巢肿瘤最常见的病理类型,但由于早期上皮性卵巢癌多无明显的临床表征，超过80%的患者确诊时已存在腹腔内种植、 淋巴转移或处于中晚期阶段,这也是造成上皮性卵巢癌患者较高病死率的最主要原因[1]。 临床研究[2]证实上皮性卵巢癌由于分级或分期不同,给予的手术方案也不尽相同,因此提高上皮性卵巢癌早期诊断和评估疾病进展准确率对提高治疗效果具有重要意义。 现临床针对上皮性卵巢癌的诊断主要依靠影像学检查联合血清标志物,但诊断的特异性较低且对肿瘤分期无法确准。 活化T 细胞核因子3(Activated T cell nuclear factor 3,NFAT3) 与转录关系密切，存在于多种非免疫组织细胞中，被证实可参与脂肪细胞分化、心肌细胞肥大及乳腺癌的发生、发展过程[3]；乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂（Mammary serine protease inhibitor，Maspin）是新发现的肿瘤抑制基因，具有诱导细胞凋亡，抑制肿瘤细胞转移和血管生成的作用,但现阶段NFAT3、Maspin 与卵巢癌的作用研究资料较少[4]。 故而，本研究探讨了上皮性卵巢癌组织NFAT3、Maspin 表达及临床意义，旨在为临床卵巢癌的诊断、 治疗和预后提供数据参考，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017 年1 月至2019 年4 月我院保存的上皮性卵巢癌组织97 例，同时选取良性卵巢肿瘤56 例，正常卵巢组织50 例作为对照，各组临床资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。纳入标准：⑴均经病理学确诊；⑵术前未行放疗、化疗等治疗；⑶患者及家属知情同意。 排除标准：⑴合并有其他系统恶性肿瘤；⑵有免疫缺陷性疾病、内分泌疾病、肝肾功能障碍等疾病。

表1 各组一般资料比较

1.2 实验方法 采用免疫组化染色法检测NFAT3、Maspin 表达： 取适量上皮性卵巢癌组织甲醛固定后常规石蜡包埋并切片;梯度乙醇水化;3 次PBS 冲洗;根据对应一抗要求修复相关组织;过氧化氢10 min 孵育后3 次PBS 冲洗; 分别滴加NFAT3、Mas pin 一抗，室温2h 孵育；分别滴加对应后1h 室温孵育；吸除PBS 液后，DAB 溶液显色；苏木精复染；封片观察;已知卵巢癌阳性切片为阳性对照;PBS 代替一抗作阴性对照[5]。

1.3 判断标准 采用半定量评分，染色范围：阳性细胞比例＜5%为0 分，5%～25%为1 分，26%～50%为2 分，51%～75%为3 分，＞75%为4 分； 染色强度：无着色为0 分，黄色为1 分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分。染色范围和染色强度得分之积≥4 分为阳性表达[6]。

1.4 统计学处理 统计分析采用SPSS22.0 软件，年龄、体质量等资料采用（x±s)表示，多组间比较使用方差分析,两两比较采用LSD-t 检验；各组NFAT3、Maspin 阳性率比较使用χ2检 验；NFAT3、Maspin相关性采用Spearman 秩相关分析。 P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组织NFAT3、Maspin 表达比较 上皮性卵巢癌NFAT3、Maspin 蛋白阳性表达率明显高于良性卵巢肿瘤和正常卵巢组织（P＜0.05）,见表2 和图1。

表2 各组织NFAT3、Maspin 表达比较

图1 免疫组化染色图

2.2 NFAT3 表达与临床病理特征关系 临床分期Ⅲ～Ⅳ期、中低分化和有淋巴结转移患者NFAT3 蛋白阳性表达率明显高于Ⅰ～Ⅱ期、高分化和无淋巴结转移患者（P＜0.05），见表3。

2.3 Maspin 表达与临床病理特征关系 临床分期Ⅲ～Ⅳ期和有淋巴结转移患者Maspin 蛋白阳性表达率明显低于Ⅰ～Ⅱ期和无淋巴结转移患者 （P＜0.05），见表4。

2.4 相关性分析 将上皮性卵巢癌组织NFAT3 和Maspin 蛋白进行相关分析，结果显示：上皮性卵巢癌组织NFAT3 和Maspin 蛋白呈负相关(rs=-0.373，P＜0.05)，见表5。

表3 NFAT3 表达与临床病理特征关系

表4 Maspin 表达与临床病理特征关系

3 讨论

上皮性卵巢癌是最常见的卵巢癌类型,属于女性生殖系统肿瘤死亡率最高的恶性肿瘤,由于缺乏高特异性的肿瘤标记物和早期诊断的特异性临床症状,上皮性卵巢癌的5 年生存率非常低,不足20%[7]。现阶段关于卵巢癌的发病机制尚存在分歧，但普遍认为可考虑从分子或基因水平研究细胞周期的相关调控机制,分析恶性肿瘤的发生、发展过程。

表5 相关性分析

NFAT 是表达于淋巴细胞和活化T 细胞的一种转录因子,可抵抗多种致癌物质，而激活的NFAT可诱导IL-8、TNF-α 及COX-2 等各种与癌症进展有关的细胞因子的表达[8,9]。 甲状腺、前列腺及乳腺等人体多种器官均可发现Maspin 的高表达, 而对应部位的恶性肿瘤细胞中存在Maspin 的表达下调甚至表达缺失, 这均提示Maspin 的表达可能与肿瘤的发生、发展具有密切相关性[10]。 但早期的研究[11，12]发现正常的卵巢组织并未发现Maspin 的表达，国内也有研究发现卵巢癌中Maspin 存在高表达，这也说明了Maspin 在卵巢肿瘤进展过程中的表达复杂化，需要研究者给予额外的重视。

本研究对各组织NFAT3、Maspin 表达比较结果显示上皮性卵巢癌NFAT3、Maspin 蛋白阳性表达率明显高于良性卵巢肿瘤和正常卵巢组织。 上述结果说明NFAT3、Maspin 均有可能成为诊断上皮性卵巢癌重要指标。 本研究中Maspin 的结果入前列腺癌及乳腺癌的结果相反可能是因为Maspi在肿瘤细胞中呈现出复杂的后生性改变,特别是甲基化和转录因子均可通过转录调节上调Maspin 的表达。

NFAT3 表达与临床病理特征关系结果显示临床分期Ⅲ～Ⅳ期、中低分化和有淋巴结转移患者N FAT3 蛋白阳性表达率明显高于Ⅰ～Ⅱ期、 高分化和无淋巴结转移患者。 该结果说明NFAT3 可能参与上皮性卵巢癌的发生、发展，与恶性肿瘤的恶性程度正相关。 Maspin 表达与临床病理特征关系结果显示临床分期Ⅲ～Ⅳ期和有淋巴结转移患者Maspin 蛋白阳性表达率明显低于Ⅰ～Ⅱ期和无淋巴结转移患者。 该结果提示Maspin 的阳性表达情况随卵巢肿瘤的发展而下降,可以成为卵巢癌预后的重要标记物。 相关研究[13-16]对胃癌及正常黏膜的Maspin 表达情况研究也发现了相似结果,我们推测Maspin 可能是通过抑制肿瘤细胞的侵袭和运动能力，增加细胞黏附性等抑制肿瘤细胞的转移。

本研究将上皮性卵巢癌组织NFAT3 和Maspin 蛋白进行相关分析，结果显示：上皮性卵巢癌组织NFAT3 和Maspin 蛋白呈负相关。该结果提示NFAT3 和Maspin 蛋白可通过相关信号通路或路径进行调控，NFAT3 的活化抑制了Maspin 的表达，并在肿瘤发生、发展中发挥重要作用，这为疾病的预后提供新的参考指标。

综上所述，上皮性卵巢癌组织NFAT3、Maspin表达上调，与临床分期、分化程度及淋巴结转移有关，两者间存在负相关关系。