血清Klotho 蛋白在妊娠期糖尿病早期肾损伤中临床意义

吴昌志，余兴火

（江西省妇幼保健院检验科，江西 南昌330006）

随着经济社会的发展及二胎政策的放开，妊娠期糖尿病已成为威胁孕产妇尤其是高龄产妇健康的一大公共卫生问题[1-3]。 妊娠期糖尿病既是巨大儿、新生儿黄疸、新生儿低血糖和孕妇2 型糖尿病的高危因素,又可导致妊娠期糖尿病肾脏疾病并发症[4,5]。 近年来，妊娠期糖尿病导致的肾功能损伤发病率日益增高。 妊娠期糖尿病早期肾损伤疾病在临床上的早期表现主要是蛋白尿、肾小球滤过率升高和后期肾功能缓慢减退[6]。 klotho 蛋白是1997年由日本科学家在自发性高血压大鼠中发现的具有抗衰老活性的蛋白,既往的研究主要集中在细胞存活、增值和凋亡等抗衰老功能，近年发现其也参与调节机体能量代谢过程[7,8]。 klotho 对能量代谢方面的影响,促使我们对其在妊娠期糖尿病早期肾损伤疾病的可能作用进行了系列研究,我们前期的研究发现klotho 蛋白在妊娠期糖尿病表达水平显著降低，并与血糖控制指标呈负相关。 因此我们推测klotho 蛋白对妊娠期糖尿病可能起到保护作用，而其在妊娠期糖尿病早期肾损伤疾病相关研究还未见文献报道。 本研究以妊娠期糖尿病早期肾损伤疾病为研究对象，分析klotho 蛋白在该病过程中的变化趋势,为妊娠期糖尿病早期肾损伤疾病预防与治疗提供新的实验依据。

1 材料与方法

1.1 临床资料 妊娠期糖尿病诊断标准：采用美国糖尿病协会推荐的OGTT 试验,孕妇在24~28 周75 g 葡萄糖口服后,分别采集空腹、口服葡萄糖1、2h三次标本进行血糖检测,三次血糖值分别达到或超过5.1mmol/L、10.0mmol/L、8.5mmol/L 则 判 定 为 妊娠期糖尿病[9]。本研究招募入研究对象共158 例,其中妊娠期糖尿病早期肾损伤疾病患者49 例、妊娠期糖尿病58 例和正常妊娠孕妇51 例, 均于20 18年11 月至2019 年11 月在江西省妇幼保健院孕期检查或住院治疗的孕妇， 年龄24~46 （28±4.8）岁，孕妇于24~28 周行OGTT 试验，测量孕妇空腹Glu、口服葡萄糖后1、2h 血糖及24h 微量白蛋白尿等指标。 其中妊娠期糖尿病早期肾损伤疾病组按照24h 微量白蛋白尿分为妊娠期糖尿病微量白蛋白尿组（20~300mg/24h) 28 例和妊娠期糖尿病大量白蛋白尿组（>300mg/24h）21 例，所有入组的孕妇均为中低危人群、单胎妊娠、无高血压、心血管疾病、肝肾疾病史,近期无外伤手术史,此次怀孕排除急慢性感染史、无呼吸系统和泌尿生殖系统炎症疾病史，无其他产科并发症和合并症。

1.2 血清Klotho 蛋白含量检测 采用人α-Klotho和β-klotho 蛋白酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒,分别购自钦城生物有限公司、百奥莱博有限公司，操作步骤按照商品试剂盒说明书进行。

1.3 统计学处理 采用SPPS17.0 软件进行统计分析。计量资料以mean±s 表示,非正态分布变量以四分位间距表示而后进行分析。 多组间比较采用单因素方差分析,血浆Klotho 蛋白水平与指标参数的关系采用Pearson 相关分析, 其各组分的相对危险度采用多元逐步回归分析。 P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 α-Klotho 和β-klotho 蛋白在妊娠期糖尿病早期肾损伤疾病组、 妊娠期糖尿病组和正常妊娠组分布情况 α-Klotho 和β-klotho 蛋白在妊娠期糖尿病早期肾损伤疾病组表达水平明显低于妊娠期糖尿病组及正常妊娠组,差异具有统计学意义（P<0.05），α-Klotho 和β-klotho 蛋白在各组表达水平为正常妊娠组>妊娠期糖尿病组>妊娠期糖尿早期肾损伤疾病组, 且α-Klotho 和β-klotho 蛋白在正常妊娠组及妊娠期糖尿病组比较差异同样有统计学意义（P<0.05），见表1。

表1 各组α-Klotho 和β-klotho 蛋白水平

2.2 在妊娠期糖尿病早期肾损伤疾病组α-Klotho和β-klotho 蛋白与24h 微量白蛋白尿相关性 在妊娠期糖尿病早期肾损伤疾病人群中血清α-Klotho 和β-klotho 蛋白随着24h 微量白蛋白尿升高表达水平下降，差异具有统计学意义。

表2 妊娠期糖尿病早期肾损伤疾病组α-Klotho和β-klotho 蛋白与24h 微量白蛋白尿分布

3 讨论

妊娠期糖尿病是一种特殊类型的糖尿病，一般指妊娠期首次出现或发现的糖耐量异常。 妊娠期糖尿病发病率各国家和地区有很大差异,流行病学数据提示在1.7~16.7%之间，并且近年来有上升趋势[10]。 在我国，随着经济社会的发展及二胎政策的放开,肥胖和高龄孕妇所导致的妊娠期糖尿病发病率急剧升高,对妊娠期糖尿病展开相关研究为该病的防治提供重要作用[11]。

由于妊娠期糖尿病是临床上威胁孕产妇和围产儿健康和生命的重要疾病之一， 其主要原因之一是长期高血糖可引起一系列微血管并发症，包括妊娠期糖尿病伴肾脏并发症和视网膜病变，其中肾脏并发症可导致妊娠期糖尿病孕妇肾功能减退甚至衰竭[12]。研究数据显示Klotho 基因主要表达在肾脏,并在各种肾病模型中表达下降。 如急性肾损伤往往表现Klotho 蛋白减少, 慢性肾脏疾病Klotho 的表达也处在下调水平[13,14]。那么，妊娠期糖尿病及相关并发症患者体内Klotho 基因表达呈现什么样的趋势，Klotho 蛋白能否可以作为妊娠期糖尿病合并肾脏疾病进展的生物学标志物值得进一步详细研究。 目前关于Klotho 基因在糖尿病患者体内表达水平报道较多,而血清中Klotho 蛋白水平在妊娠期糖尿病伴肾脏并发症相关研究尚无相关报道。 基于我们前期的研究已经证实Klotho 蛋白与妊娠期糖尿病相关,我们猜测Klotho 蛋白与妊娠期糖尿病伴肾脏并发症同样存在某种相关性。

首先我们检测了娠期糖尿病早期肾损伤疾病患者、妊娠期糖尿病患者和正常妊娠孕妇三类人群中血清Klotho 蛋白水平差异,研究数据显示无论是α-Klotho 还是β-klotho 蛋白在妊娠期糖尿病早期肾损伤疾病组表达水平明显低于妊娠期糖尿病组及正常妊娠组，差异具有统计学意义（P<0.05）。 此外，α-Klotho 和β-klotho 蛋白在各组表达水平高低依次是正常妊娠组、妊娠期糖尿病组、妊娠期糖尿病早期肾损伤疾病组, 且α-Klotho 和β-klotho蛋白在正常妊娠组及妊娠期糖尿病组同样具有统计学意义(P<0.05)。由于肾脏近、远曲小管是Klotho基因的主要表达部位，因此，妊娠期糖尿孕妇长期的高血糖会导致肾脏近、远曲小管上皮细胞出现衰老及功能障碍，进而使得klotho 蛋白的表达受到抑制[15]。

众所周知，肾脏为非可再生器官，如何在慢性肾脏疾病进展的过程阻止肾脏功能进一步恶化， 从而最大程度保护肾脏功能是目前临床医生面对的一大难题。近年来klotho 蛋白在糖尿病肾病诊断中的作用备受关注[16]。考虑到妊娠期糖尿病可导致肾脏功能异常病理改变,于是我们以妊娠期糖尿病早期肾损伤疾病为研究对象,将其分为微量白蛋白尿和大量白蛋白尿组, 分析蛋白尿程度与Klotho 蛋白相关性。我们研究数据表明在妊娠期糖尿病合并肾脏疾病人群中血清α-Klotho 和β-klotho 蛋白随着24h 微量白蛋白尿升高表达水平下降。进一步提示Klotho蛋白可能是预测妊娠期糖尿病合并肾脏疾病损伤的早期标志物,将有助于妊娠期糖尿病合并肾脏疾病进展监测及早期干预治疗。

综上所述,我们不难发现，klotho 蛋白在妊娠期糖尿病早期肾损伤疾病的表达水平随着肾脏功能逐渐降低而下降，提示klotho 蛋白可能参与妊娠期糖尿病早期肾损伤疾病进程。