磷酸川芎嗪滴丸溶出度测定方法的研究

孟 薇

（阜新市检验检测认证中心，辽宁 阜新 123000）

磷酸川芎嗪属于钙离子拮抗剂的一种，存于川芎根茎内，属于川芎嗪的磷酸盐，存在抑制血小板集聚、活血化瘀、动脉扩张以及调节微循环等功效[1]。此种药物在临床中缺血性脑血管疾病治疗中使用率较高，例如高血压、冠心病、脑栓塞诱发脑梗死、脑血栓、脑供血不足等[2]。此种药物属于处方药，通常有胶囊剂、注射剂和片剂，而近几年新研究出一种剂型为磷酸川芎嗪滴丸，主要是利用固体分散技术所制[3]。此种剂型存有生物利用率高、吸收迅速、易等优势。而药物的生物利用率和质量与溶出度密切相关。现阶段国内磷酸川芎嗪滴丸的溶出方法主要包括篮法和桨法，检测方式主要包括UV吸收系数法和UV对照品比较法，均有一定的差异性[4-5]。因此本次针对磷酸川芎嗪滴丸溶出度测定方式进行了研究，同时分析了6批药物在不同溶出介质的溶出曲线。详情报道如下。

1 试药和仪器

1.1 试药：磷酸川芎嗪对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100845-201002）100 mg；磷酸川芎嗪滴丸（批号：140638、140628、160104、151123、150804、160332）；阴性样品。

1.2 仪器：①电子天平(BP-210S)。②针头式微孔滤膜过滤器：津腾0.45 μm孔径、13 mm直径。③高效液相色谱柱：迪马C18（5μ，250 mm×4.6 mm）。④高效液相色谱仪：岛津高效液相色谱仪（LC-2030检测器）。⑤溶出度仪：。

1.3 试剂：甲醇为色谱纯、其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶出曲线

2.1.1 测定溶出曲线：①选择6丸磷酸川芎嗪滴丸，根据释放度和溶出度测定法（《中国药典》2015年版四部通则0931第二法）[6]，溶出介质分别为500 mL水、磷酸盐缓冲液（pH=6.8）、醋酸盐缓冲液（pH=4.5）、盐酸溶液（pH=1.2），以每分钟50转为转速，分别在5 min、10 min、15 min和20 min时采集3 mL溶出液，并选择微孔滤膜（0.45 μm）进行处理，取续滤液为供试品溶液，同时置入体积和温度相同的溶出介质。称取10 mg磷酸川芎嗪对照品并放入量瓶（100 mL）内，置入水溶解稀释，充分摇匀后分别用水、磷酸盐缓冲液（pH=6.8）、醋酸盐缓冲液（pH=4.5）或盐酸溶液（pH=1.2）制成10μg/mL的磷酸川芎嗪对照品溶液。取供试品溶液和对照品溶液各20 μL并置入高效液相色谱仪，分析每丸药品的磷酸川芎嗪溶出量。②色谱条件：20 μL进样体积、295 nm为检测波长、30 ℃柱温、1 mL/min为流速、流动相为甲醇-水（35∶65）、填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶。③四种溶出介质配制：水：纯化水。磷酸盐缓冲液（pH=6.8）：分别取0.2 mol/L氢氧化钠溶液（1000 mL水稀释0.2 mol/L氢氧化钠，充分摇匀）112 mL和0.2 mol/L磷酸二氢钾溶液（1000 mL水稀释27.22 g磷酸二氢钾，充分摇匀）置入1000 mL水中。醋酸盐缓冲液（pH=4.5）：用适量水溶解2.99 g醋酸钠（1000 mL水稀释114 mL冰醋酸，充分摇匀），再置入2 mol/L醋酸溶液14 mL，加入1000 mL水稀释。盐酸溶液（pH=1.2）：用1000 mL水稀释7.65 mL盐酸。

2.1.2 溶出曲线：四种溶出介质中的磷酸川芎嗪滴丸的溶出曲线详情，见图1、2、3、4。

图1 平均累积溶出度（%）

图2 平均累积溶出度（%）

图3 平均累积溶出度（%）

图4 平均累积溶出度（%）

2.2 溶出度方式：选择每分钟50转的低转速，四种溶出介质均能够快速溶出6批药品，15分钟的溶出量超过85%，随意取样溶出量差距＜5%。四种介质中的同一批次药品溶出行为无较大差距。因此选择溶出度方式：溶出介质500 mL水、每分钟50转为转速、桨法。由于受到制剂和用药方式的影响，需参照磷酸川芎嗪片与磷酸川芎嗪胶囊的限度和溶出度取样时间，将取样半小时修改为20 min，标示量的80%为限度不变。

2.3 溶出方法学检验：检验溶出介质为水的溶出度方法：①专属性检验：根据处方比例选择适当的阴性样品并置入水，充分溶解成空白样品，再通过溶出曲线测定方式检验，敷料无影响；②线性关系检验：选择适量磷酸川芎嗪对照品，加水制为浓度溶液，根据溶出曲线测定方式检验。结果：r=0.9999为相关系数、A=32339ρ-5797.9为回归方程，TMPP为1.0416～18.751 μg/mL，和峰面积有线性关系。③精密度检验：选择“2.4样品检测”中的20 μL供试品溶液和对照品溶液（批号：151123）。结果：6次持续平行进样。结果：RSD为0.72%与0.92%，n=6，存有较高的精密度。④回收率检验：根据处方比例选择磷酸川芎嗪对照品溶液110%、80%、50%和空白辅料，加水制为含有11 μg/mL、8 μg/mL、5 μg/mL主成分的溶液，充分摇匀，之后选择微孔滤膜（0.45 μm）进行处理，取续滤液通过溶出曲线测定法检测。结果：回收率高达99.9%，RSD=0.47%。⑤溶液稳定性检验：选择“2.4样品检测”中的适量供试品溶液和对照品溶液（批号：150804），在室内常温下放置0 h、1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、16 h、20 h、28 h、36 h、48 h，或者置于（37±0.5）℃的水中0 h、0.5 h、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h，分别采取20 μL，根据溶出曲线测定方式中的色谱条件测定法检验。结果：峰面积RSD是1.43%、1.19%或0.53%、1.11%。⑥吸附性检验：溶出度仪取样系统吸附性：选择6丸药品（批号：140638），溶出介质为500 mL水，设置温度为37 ℃，以每分钟50转为转速，桨法，20 min时进行自动取样和手动取样，分别取10 mL，通过微孔滤膜（0.45 μm）进行处理，取续滤液进行色谱条件检测，对每丸溶出量使用外标法计算。结果：手动取样和自动取样的溶出量无显著差异，RSD在0.13%～0.98%，见表1；微孔滤膜吸附性：选择“2.4样品检测”中的适量的供试品溶液和对照品溶液（批号：150804），选择希波氏、津隆以及岛津过滤器过滤，除去6 mL、4.5 mL、3 mL、1.5 mL、0 mL初滤液，选择续滤液进行色谱条件检测。三种过滤器未吸附主成分TMPP，能够用于过滤本实验中的试验待测溶液；⑦定量限：选择“2.4样品检测”中的3 mL对照品溶液，用水稀释后进行色谱条件测定，6.2 ng为定量限、11.03为主成分信噪比。⑧耐用性检验：选择6丸药品（批号：150804），溶出介质为500 mL水，根据溶出曲线测定方法进行操作，并使用两种不同厂家的色谱柱、高效液相色谱仪、自动溶出仪开展溶出曲线耐用性检测。溶出度不受不同的色谱柱、液相色谱仪、溶出仪的影响，耐用性较高。

表1 磷酸川芎嗪滴丸测定溶出度仪取样系统吸附性检验

表2 磷酸川芎嗪滴丸溶出度检测（%）

2.4 样品检测：选择各批次的药品各6丸，桨法，溶出介质选择500 mL水，37 ℃为温度，以每分钟50转为转速，20 min时采取10 mL溶液，通过微孔滤膜（0.45 μm）处理，供试品溶液为续滤液。并用水溶解适量磷酸川芎嗪对照品，称定后用水溶解，制成含有10 μg/mL TMPP溶液，归为对照品溶液。之后选取以上溶液通过HPLC进行色谱条件检测，最后计算每丸溶出量，见表2。

3 讨 论

3.1 选择溶出介质：临床研究显示，TMPP的pH值与饱和溶解度存有一定联系，溶解度会根据pH值的提升而降低[7-8]。在水、磷酸盐缓冲液（pH=6.8）、醋酸盐缓冲液（pH=4.5）、盐酸溶液（pH=1.2）这四种使用率较高的溶出介质内，同等温度条件下，TMPP溶解度较低的为水，这就说明磷酸川芎嗪滴丸用水作为介质，其溶出度的区分力较高。

3.2 检测方式：选择“2.4样品检测”中的适量供试品溶液和对照品溶液，分别使用UV吸收系数法、UV对照品比较法、HPLC，对比6批样品的溶出度，结果提示，UV吸收系数法、UV对照品比较法所得的溶出度一致，溶出量差值＜2%，然而使用对照品比较法得到的溶出量高于吸收系数法，大致为3%～5%。对照品比较法操作相对简单、检测所用时间较短，以水就可作为溶剂，不会对环境造成较严重影响，同时也不会受到辅料的干扰，但在磷酸川芎嗪滴丸内，还会存有一定剂量的杂质，但不会严重干扰测定结果，这也就说明此种方式结果的HPLC精准性较高、专属性较强[9]。

3.3 溶出度批内差异因素：本次实验所选的药品规格均为5 mg，检测含量均匀度提示，每丸之间的含量差异较明显，均一性稍低，因此样品检测和耐用性检验的溶出度检测结果批内存有较明显的差异，同时一些丸剂完全溶出后也无法得到80%的标准量。药品在水、磷酸盐缓冲液（pH=6.8）、醋酸盐缓冲液（pH=4.5）、盐酸溶液（pH=1.2）中的快速溶出详情中，虽然溶散时限可作为质量标准，能够对本类药品进行质量控制，分析吸收之前的溶解详情，但无法将主成分溶出量具体显示。针对一些含量均匀差的药品，使用收载溶出度检查的效果较好[10]。

总而言之，水、磷酸盐缓冲液 (pH=6.8)、醋酸盐缓冲液 (pH=4.5)、盐酸溶液（pH=1.2）四种溶出介质中6批磷酸川芎嗪滴丸的溶出曲线对比，以水为溶出介质的溶出度检测方式效果较好，并存在可靠性、准确性和重现性，可以准确将制剂溶出详情反映，进而对药品质量进行有效控制，此外还可以为此种药品的溶出度修订和统一提供参考。