妊娠期糖尿病患者外周血中Th1/Th2细胞及相关细胞因子表达水平变化的研究

何可人 王珊 于敬会 单莉莉 陈惠娜

【摘要】 目的：观察妊娠期糖尿病患者外周血中Th1/Th2细胞及相关细胞因子表达水平的变化。方法：选择在笔者所在医院就诊的50例妊娠期糖尿病患者为观察组，50例健康妊娠的孕妇为对照组，收集观察组和对照组产妇的外周血，通过流式细胞术分析Th1/Th2细胞比例，采用ELISA检测白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-10（IL-10）、干扰素-γ（IFN-γ）的表达水平。结果：观察组患者外周血中Th1/Th2细胞的比例高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;观察组患者外周血中IL-2、IFN-γ的表达水平高于对照组，IL-4、IL-10的表达水平低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：妊娠期糖尿病患者外周血中Th1/Th2细胞比例失衡，Th1细胞因子表达升高，Th2细胞因子表达降低，Th1/Th2免疫平衡的改变可能是妊娠期糖尿病免疫诊断和干预的新靶点，为妊娠期糖尿病的治疗提供试验依据。

【关键词】 妊娠期糖尿病患者 Th1/Th2细胞 外周血 细胞因子 表达水平

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.19.026 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2020）19-00-03

Changes of Th1 / Th2 Cells and Related Cytokines Expression in Peripheral Blood of Gestational Diabetes Mellitus/HE Keren， WANG Shan， YU Jinghui， SHAN Lili， CHEN Huina. //Chinese and Foreign Medical Research， 2020， 18（19）： -68

[Abstract] Objective： To observe the expression of Th1/Th2 cells and related cytokines in the peripheral blood of patients with gestational diabetes mellitus. Method： Totally 50 cases of gestational diabetes in our hospital were selected as the observation group and 50 cases of healthy pregnant women as the control group. The peripheral blood of the observation group and the control group were collected. The proportion of Th1/Th2 cells was analyzed by flow cytometry. The levels of IL-2， IL-4， IL-10， IFN-γ were detected by ELISA The level of expression. Result： The proportion of Th1/Th2 cells in the peripheral blood of the observation group was higher than that of the control group， the difference was statistically significant （P<0.05）. The expression level of IL-2 and IFN-γ in the peripheral blood of the observation group were higher than those of the control group， and the expression level of IL-4 and IL-10 were lower than those of the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion： The imbalance of Th1/Th2 cell proportion， the increase of Th1 cytokine expression and the decrease of Th2 cytokine expression in the peripheral blood of patients with gestational diabetes mellitus may be the new target of immunodiagnosis and intervention of gestational diabetes mellitus， and provide experimental basis for the treatment of gestational diabetes mellitus.

[Key words] Gestational diabetes mellitus Th1/Th2 cells Peripheral blood Cytokines Expression level

First-authors address： Shenzhen Polytechnic， Shenzhen 518000， China

妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）是妊娠階段常见的并发症之一，多发生于妊娠中晚期，表现为妊娠后首次发现葡萄糖耐量异常，容易引发患者出现产科并发症，危及母体和胎儿的生命健康[1]。研究显示，GDM的发生可能和遗传因素、代谢紊乱、胰岛素抵抗、妊娠激素和免疫反应等相关，探索其具体发病机制和治疗策略仍是当前亟待解决的科学难题[2]。辅助性T细胞是机体免疫系统的重要组成成分，可分为Th1、Th2等多种亚群，对体液免疫和细胞免疫均有重要的调节作用[3]。吕芳等[4]研究发现GDM患者外周血中IL-6和TNF-α表达增多，其变化与胰岛素抵抗呈正相关，提示免疫功能改变可能参与GDM病理过程。本研究对GDM患者外周血中的Th1/Th2细胞及相关细胞因子水平的变化进行研究，探讨Th1/Th2细胞平衡在GDM中的作用及可能的机制，为GDM的防治提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

以2018年1月-2020年1月在笔者所在医院就诊的GDM孕妇和正常妊娠产妇各50例为研究对象，纳入标准：（1）单胎且足月妊娠;（2）GDM患者符合2015年10月国际妇产科联盟发表的关于GDM的实用指南，即餐后2 h血糖值≥8.5 mmol/L或餐后1 h血糖值≥10.0 mmol/L或静脉血空腹血糖值≥5.1 mmol/L;

（3）无妊娠合并症和并发症;（4）能够配合完成研究。排除标准：（1）妊娠期高血压或慢性高血压患者;（2）存在反复流产病史患者;（3）存在免疫病史患者;（4）近3个月有急慢性感染情况;（5）存在内分泌疾病或使用类固醇皮质激素或免疫抑制剂治疗的患者;（6）存在精神疾病或心脑血管疾病。GDM孕妇为观察组，年龄22～45岁，平均（30.48±8.17）岁;分娩孕周37～42周，平均（38.97±1.94）周。正常妊娠产妇为对照组，年龄23～41岁，平均（29.75±8.13）岁;孕周38～41周，平均（39.83±1.97）周。两组患者的年龄和孕周等一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05）。研究经医院伦理委员会批准，且所有研究对象知情同意并签署协议书。

1.2 方法

于分娩前抽取各研究对象空腹时的静脉血6 ml。

取3 ml外周血置于EDTA处理过的抗凝管中，加入淋巴细胞分离液，2 000转20 min离心，吸取中间淋巴细胞层，获得外周血单个核细胞悬液，调整细胞浓度至1×107/ml，加入至细胞培养板中，加入250×PMA/lonomycin和250×Monensin/BFA，混合均匀后于细胞培养箱中37 ℃ 5%CO2培养5～6 h，加入anti-CD3 FITC（eBiosciences公司）和anti-CD4 PERCP（eBiosciences公司）对细胞表面抗原进行染色，使用FIX&PERM Reagent A进行细胞破膜，使用anti-IFN-γ APC（Miltenyi公司）和anti-IL-4 PE（eBiosciences公司）进行细胞内细胞因子染色，以同型IgG抗体（eBiosciences公司）作为对照，应用BD FACS流式细胞仪检测Th1和Th2细胞，Th1为INF-γ+的CD4+细胞，Th2细胞为IL-4+的CD4+细胞。取3 ml外周血置于促凝管中，3 000转10 min离心，将上清分离至无菌EP管中，使用IL-2、IL-4、IL-40和IFN-γ的ELISA试剂盒（均购于联科生物技术有限公司）检测各细胞因子的外周血表达水平，具体步骤按照说明书进行。

1.3 统计学处理

本研究数据采用SPSS 20.0统计学软件进行分析和处理，计量资料以（x±s）表示，采用Students t检验，计数资料以率（%）表示，采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者外周血中IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ表达水平的变化

观察组患者外周血中IL-2和IFN-γ的水平高于对照组，组间差异有统计学意义（P<0.05）;观察组患者外周血中IL-4和IL-10的水平低于对照组，组间差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2 两组患者外周血中Th1/Th2细胞比例变化

观察组患者外周血中Th1细胞数量多于对照组，Th2细胞数量少于对照组，Th1/Th2细胞比例高于对照组，组间比较差异均有统计学意义（P<0.05），见图1、表2。

3 讨论

GDM患者更容易引发产妇或胎儿出现先兆子痫、早产、低体重儿等严重情况，逐渐成为当前关注的焦点问题之一。流行病学数据显示，亚洲女性GDM的发生风险明显高于其他种族女性，且发病率呈现逐年增长的趋势[5-6]。研究表明，GDM的发病机制与胰岛素抵抗、机体免疫反应等因素密切相关[7]。T淋巴细胞是机体重要的免疫细胞，根据细胞表面特异性抗原的不同分为不同的亚群，CD4+T淋巴细胞也被称为辅助性T淋巴细胞，根据其功能和细胞表面标志物的差异分为Th1、Th2、Treg等细胞亚群，对于机体的特异和非特异、体液免疫和细胞免疫有重要的调节功能[8]。

Th1和Th2细胞在正常免疫系统和疾病过程中有重要的作用，Th1细胞可介导细胞免疫，分泌IL-1、IL-2、IFN-γ、TNF-α等细胞因子，产生免疫功能;Th2细胞分泌IL-4、IL-6、IL-10和GM-CSF等细胞因子，介导体液免疫[9]。曹向可等[10]发现GDM患者体内的C-RP、TNF-α和IL-6的水平高于健康孕妇组，提示GDM病理过程中存在炎症反应和免疫功能异常。本试验通过ELISA检测GDM患者和正常孕妇的外周血中细胞因子水平发现，GDM患者外周血中Th1细胞因子IL-2和IFN-γ的水平升高，Th2细胞因子IL-4和IL-10水平降低，和上述实验结果一致，提示GDM病理过程中的炎症反应。李晓雅等[11]提出对促炎因子和抗炎因子的检测可能会为GDM的早起诊断和干预提供重要依据。

对外周血中的Th1和Th2细胞进行流式细胞术检测，结果显示GDM患者外周血中Th1细胞增多，Th2细胞减少，Th1/Th2细胞比例升高，提示GDM患者外周血中存在Th1/Th2免疫失衡。王芬等[12]发现2型糖尿病患者外周血中Treg细胞的抑制功能减弱，使得体内Th1、Th2、Th17等效应细胞功能增强，参与糖尿病的病理过程。在对GDM孕妇外周血中的淋巴细胞分析发现CD3+CD4+ICOS+细胞比例升高，说明GDM患者存在免疫功能紊乱，和本文研究结果一致，提示Th1/Th2细胞的改变可能會成为GDM患者的治疗靶点之一。胰岛素抵抗是糖尿病重要的发病原因，Th1/Th2细胞及细胞因子的改变与胰岛素抵抗的关系值得进一步探索。

综上所述，Th1/Th2细胞及相关细胞因子水平与GDM患者的炎症反应和免疫调节密切相关，GDM患者外周血中IL-2和IFN-γ的水平升高，IL-4和IL-10的水平下降，Th1/Th2细胞平衡紊乱，为GDM的诊断和治疗提供理论依据。

参考文献

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[2]王立强，周静鑫，苗桂珍，等.妊娠糖尿病中西医临床治疗的思考[J].中国实验方剂学杂志，2019，25（23）：229-234.

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[11]李晓雅，刘军.细胞因子与妊娠糖尿病关系的研究进展[J].医学综述，2018，24（12）：2422-2426，2433.

[12]王芬，朱红霞，高玉斌.2型糖尿病患者调节性T细胞的抑制功能[J].中国老年学杂志，2018，38（2）：291-292.

（收稿日期：2020-03-06） （本文編辑：郎序莹）