金刚藤总黄酮栓的工艺研究

况成裕，郭小藤，张宪科，崔 燕

（山东省药学科学院，山东 济南 250014）

金刚藤为百合科植物菝葜（Smilax chinaL.），又名金刚刺、假萆解[1]，广泛分布于长江以南丘陵地区，药用其根茎，其性甘温无毒，有清热解毒、消肿散结之功效。现代药理学研究表明，金刚藤有抗感染和镇痛[2]、抗肿瘤、活血和增强免疫作用[3-4]，临床发现金刚藤在治疗输卵管梗阻性不孕、继发性不孕症[5]、慢性盆腔炎[6]等方面有较好疗效。

金刚藤总黄酮栓主治慢性盆腔炎，原料为金刚藤总黄酮，是由金刚藤药材经醇提、大孔吸附树脂分离纯化所得[7]。慢性盆腔炎是指女性内生殖器及其周围结缔组织、盆腔腹膜的慢性炎症[8]。目前，国内临床上治疗慢性盆腔炎多为口服药品，由于口服药品经消化系统，导致药物生物利用度降低，疗效不甚满意，且存在肝肾毒性。为有效快速达到治疗目的，并能减少肝肾毒性，直肠给药成为一种简便、有效、安全的替代途径。栓剂作为直肠给药的一种剂型，具有避免肝脏首过效应、生物利用度高等特点[9]。现行药典栓剂项下只收载了“融变时限”检查，没有对栓剂溶出度相关要求[10]。溶出度反映了有效成分从制剂中溶出的速度和程度，栓剂基质种类是影响溶出速度的主要因素[11]，所以本研究采用单因素试验考察金刚藤总黄酮栓的注模温度、聚乙二醇型号；以外观、硬度、融变时限及溶出度为指标，采用正交设计进行处方筛选[7]。

1 仪器和材料

1.1 仪器

8453型紫外-可见分光光度仪（Agilent）；恒温烘箱（上海一恒）；恒温水浴锅（浙江力辰）；RC806D溶出试验仪（天津天大天发）；子弹型栓剂模型（长沙益宏）；自动融变时限检查仪（天津药典标准仪器厂）；手术刀。

1.2 材料

金刚藤总黄酮（自制，落新妇苷含量58.29 %）；落新妇苷对照品（自制，含量97.82 %）[7]；聚乙二醇1500（PEG-1500，西安天正）；聚乙二醇-4000（PEG-4000，西安天正）；聚乙二醇-400（PEG-400，西安天正）；硬脂酸聚烃氧（40）酯（S-40，西安泰华）；甘油（禾大西普化学）；液体石蜡（西安晋湘）；亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠，甲醇，乙醇为分析纯，水为纯化水（自制）。

2 方法与结果

2.1 处方量初步确定

根据金刚藤总黄酮动物长期毒性试验中引起中毒症状或脏器出现可逆性变化剂量的l/10[12]，大鼠最低有毒剂量为100 mg/kg，Beagle犬可逆性中毒剂量为50 mg/kg计算，人体按60 kg计算，最大剂量应为3000 mg，根据临床实际可操作性及推荐临床剂量，初步确定最大剂量为200 mg/d；制备栓剂每粒含金刚藤总黄酮100 mg，每日2次，每次1粒。

2.2 制备方法

采用热熔法进行制备金刚藤总黄酮栓：将PEG1500与S-40混合，水浴融化[13]，搅拌使其分散均匀，加入甘油、金刚藤总黄酮，搅拌使其分散均匀，倒入已冷却并涂有液体石蜡的栓模中，冷却后，用手术刀削去溢出部分，打开模具，推出即得栓剂10粒[13]。

2.3 处方初步筛选

2.3.1 PEG型号的筛选 称取PEG1500，PEG400和PEG4000各7 g，各加入S40 3 g，分别于70 ℃水浴融化，搅拌使其分散均匀，倒入已冷却并涂有液体石蜡的栓模中，冷却后，用手术刀削去溢出部分，打开模具，脱模得空白栓剂。以外观、硬度为考察指标，发现PEG400、PEG-4000与S-40混合基质栓体断裂，较脆。PEG1500与S40混合基质成型性好，外观光滑，硬度适宜[11]。所以选择PEG1500与S40混合基质。

2.3.2 考察筛选 注模温度称取PEG1500各7 g，3份，各加入S40 3 g，于70 ℃水浴融化，搅拌使其分散均匀，分别加入甘油1 g、金刚藤总黄酮1 g，搅拌使其分散均匀，分别冷却至不同温度，倒入已冷却并涂有液体石蜡的栓模中，冷却后脱模，考察不同注模温度的影响，结果见表1。结果表明，注模温度影响成品质量，根据试验结果选择60 ℃作为注模温度。

表1 不同注模温度对栓剂的影响

2.4 溶出度测定方法的确定

2.4.1 对照品溶液的制备 精密称定干燥至恒重的落新妇苷对照品（含量为97.82 %）5.12 mg，置入50 ml量瓶，加乙醇40 ml，超声使溶解，加乙醇至刻度，摇匀，制成浓度为1.002 mg/ml的对照品溶液[14]。

2.4.2 金刚藤总黄酮供试品溶液的制备 称取金刚藤总黄酮10 mg，精密称定，置入250 ml圆底烧瓶，加乙醇100 ml，称定重量，加热回流提取1 h，放冷，加乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液[15-17]。

2.4.3 检测波长选择 精密量取对照品溶液、金刚藤总黄酮供试品溶液各1 ml，置入10 ml量瓶，加乙醇至刻度，摇匀，以乙醇为空白，在波长200～400 nm范围内扫描，对照品溶液、金刚藤总黄酮供试品溶液均在292 nm处有最大吸收峰，因此选择292 nm作为检测波长[7]。

2.4.4 标准曲线的绘制 精密量取对照品溶液0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 ml，分别置入10 ml量瓶，加乙醇至刻度，摇匀，在292 nm处测定吸光度，以浓度C为横坐标，以吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A=30.87C+0.042，R2=0.9994[7]。结果表明，落新妇苷在0～30.06 μg/ml浓度范围之内呈良好的线性关系。

2.4.5 溶出方法及溶出介质的选择 参考《中国药典》2015年版二部附录XC第三法进行溶出度测定。分别将样品置于250 ml纯化水、0.1 mol/L盐酸溶液、pH4.8醋酸盐缓冲液及pH 7.4磷酸盐缓冲液中，转速为100 r/min，水浴温度为（37±0.5） ℃[7]，分别于5，10，15，20，30和50 min取样2 ml，补液。用紫外分光光度法测定样品中总黄酮的含量，计算不同时间点取样总黄酮的平均累积溶出百分率，绘制溶出曲线，结果见图1。

结果表明，除了在0.1 mol/L盐酸溶液中，其余3种溶出介质在30 min内均能溶出80 %以上，由于栓剂系直肠给药，根据实验结果并考察文献[18]，选择接近人体直肠环境的pH 7.4磷酸盐缓冲液作为溶出介质。

2.5 处方筛选

用综合评分法评价栓剂的优劣，采用正交设计对金刚藤总黄酮（A）、PEG1500（B）、S40（C）和甘油（D）的用量比例进行考察，选择最优工艺[19]。考察因素水平见表2，综合评分见表3，正交试验结果见表4，方差分析见表5。

由表3直观分析得，最佳工艺为A2B2C3D1，即金刚藤总黄酮:PEG1500:S40:甘油=1:5:3:1，且该工艺产品的溶出度≥80 %。

2.6 工艺验证

按筛选的最佳处方（金刚藤总黄酮：PEG1500:S40:甘油=1:5:3:1）、工艺制备3批金刚藤总黄酮栓样品，每批30枚。评价金刚藤总黄酮栓的外观、检查重量差异和融变时限，测定溶出度。结果：3批样品均外观光滑均匀，硬度适宜，重量差异及融变时限均符合标准，30 min溶出度分别为85.54 %，86.91 %，4.67 %。结果表明上述处方、工艺稳定性好，操作简单。

图1 不同溶出介质中的释放情况（100 r/min，37 ℃）

表2 正交试验因素水平表

表3 综合评分表

表4 L9（34）正交试验结果

表5 方差分析

3 讨论

经大量预试验比较了PEG类、S40、甘油明胶等水溶性基质，发现甘油明胶体系在制备栓剂过程中出现气泡，导致外观不好且重量差异大。最终采用PEG、S40和甘油制成水溶性基质，并采用正交设计，筛选出以PEG-S40-甘油为基质的最佳处方为金刚藤总黄酮:PEG1500:S40:甘油=1:6:2:1，工艺操作简单，稳定性好，栓剂外观光滑、色泽均匀、硬度适宜、不变形、无气泡。而且栓剂中添加甘油，可减少PEG1500对腔壁的刺激性，增加栓剂的润滑性，而且能提高药物的溶出。同时甘油有一定保湿作用，可防止栓剂在贮藏过程中干燥变硬[20]。

在《中国药典》栓剂检查项中有“融变时限”，但是“融变时限”只能反应药品自己的溶解时间，却不能反映其中药物成分溶出情况。所以增加溶出度测定，选择接近人体直肠环境的pH 7.4磷酸盐缓冲液作为溶出介质，用紫外分光光度法检测总黄酮含量，为深入研究金刚藤总黄酮栓提供基础。