血清miR-26b表达与多囊卵巢综合征患者糖脂代谢关系

钟晓燕 赵维英

东南大学附属中大医院江北院区(南京，210000)

多囊卵巢综合征(PCOS)多发于女性青春期或育龄期，常伴有月经减少、多毛、不孕或闭经等症状[1]。PCOS患者中肥胖比例较高，且常出现糖脂代谢异常[2]。微小RNA(miRNAs)为一种单链RNA，在胚胎发育、细胞增殖或分化以及肿瘤形成等多种病理生理进程中发挥重要作用。miR-26b作为miRNA的成员，在机体中的表达可随着脂肪细胞的不断分化成熟而自主上调，并与胰岛素抵抗有一定联系[3-4]。本文研究血清miR-26b表达与PCOS患者糖脂代谢的关系，为临床诊治提供监测靶点及指标。

1 资料和方法

1.1 临床资料

收集2016年3月-2019年1月在本院接受治疗的PCOS患者80例临床资料为PCOS组。纳入标准：①患者均符合PCOS诊断标准[5]；②年龄>20岁；③患者或家属知情并签署同意书。排除标准：①有其他类别不孕症或雄激素增多症；②入组前3个月口服过激素药物；③有血液疾病；④有高血压或糖尿病等其他内分泌性疾病；⑤有恶性肿瘤。另选同期本院治疗的非PCOS不孕患者80例为对照组。本次研究已得到医院伦理委员会的评审通过。

1.2 研究方法

查阅病历资料，记录其基础指标，主要内容包含：年龄、体质指数(BMI)、舒张压(DBP)和收缩压(SBP)。糖脂代谢指标的检测：于月经周期的第3～5d取空腹静血清，使用UniCel DxI 800型全自动化学发光免疫分析仪(美国贝克曼库尔特公司)及美国拜耳公司的试剂盒测定空腹血糖(FBG)及空腹胰岛素(FINS)，使用稳态模型法计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。7600型全自动生化测定仪(日本日立公司)及美国罗氏公司的试剂盒测定甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度型脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度型蛋白胆固醇(LDL-C)。血清miR-26b测定：血清标本提取RNA，紫外分光光度法检测RNA的纯度及完整性，美国Gibicol公司的逆转录系统及金斯瑞生物科技公司制成的引物序列常规逆转成cDNA，并在定量7500型PCR检测仪(美国ABI公司)辅助下行RT-PCR反应，予琼脂糖凝胶电泳，将U6用于miRNA内参对照并紫外灯下观察分析，计算miR-26b相对表达量。RT-PCR反应条件：95℃下30s，相同温度下15s，72℃下15s，共40个循环。

1.3 观察指标

比较两组一般情况、血清miR-26b表达及糖脂代谢指标，分析血清miR-26b表达与各项指标的相关性，并对PCOS组血清miR-26b表达进行多元逐步回归分析。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两组一般情况比较

两组一般情况比较无差异(P>0.05)，见表1。

表1 两组基础指标对比

2.2 两组血清miR-26b表达及糖脂代谢指标比较

两组HDL-C水平无差异(P>0.05)，其他指标PCOS组均高于对照组(P<0.05)，见表2。

表2 两组血清miR-26b表达及糖脂代谢指标比较

2.3 血清miR-26b表达与各指标相关性

Pearson法分析相关性，PCOS组血清miR-26b表达与LDL-C、HOMA-IR、BMI均呈正相关(P<0.05)，对照组各项指标均无相关性(P>0.05)，见表3。

表3 两组各项指标与血清miR-26b表达相关性分析

2.4 血清miR-26b表达相关因素回归分析

根据多元逐步回归分析结果显示，HOMA-IR是PCOS组血清miR-26b表达的危险因素(OR>1)，见表4。

表4 PCOS组血清miR-26b表达因素多元逐步回归分析

3 讨论

PCOS是导致无排卵型不孕症状的重要诱因，在育龄女性中发病率达15%，在无排卵型不孕中占75%[6]。由于PCOS症状表现有高度复杂性及异质性，确切病因及发病机制仍未完全明晰，目前公认的是基因及环境为主要诱因。有报道指出，miR-26b为miRNA家族中的一个重要成员，其在人类机体中的表达和胰岛素抵抗的关系较为密切[7-8]。而肥胖患者更易患有PCOS，分析血清miR-26b表达与PCOS患者糖脂代谢关系十分必要[9]。

本文结果显示，PCOS患者机体中普遍存在明显的糖脂代谢异常，且miR-26b水平升高，这与邱秀容等[10]报道结果相符，提示miR-26b可能参与了PCOS的发病过程。究其原因，miRNAs能够调控细胞增殖及分化等过程，并通过和靶基因3’非翻译区的互补配对结合转录，最终调控蛋白编码有关基因表达。miR-26b能抑制PCOS患者体内葡萄糖转运蛋白的正常表达，干扰葡萄糖和脂肪组织细胞代谢，参与PCOS发病过程[11]。同时，miR-26b在机体血清或卵泡液等含量较高，并能自由传播扩散，可对卵巢激素形成及卵泡发育和闭锁等产生重要影响。而激素水平以及卵泡的不正常发育均为PCOS的重要临床特征，因此miR-26b与PCOS的发病间联系较为密切。另有研究发现，PCOS患者机体内卵丘颗粒细胞的凋亡数量明显增多，且与卵泡液内的miRNA表达谱变化有关[12]。miR-26b能够抑制并调控DNA修复有关蛋白的自主mRNA转录，并促使DNA断裂使细胞凋亡。一项将富含miR-26b质粒转移到雌性动物颗粒细胞的研究发现，颗粒细胞凋亡率明显升高，说明miR-26b与PCOS发病有关[13]。此外，本文相关性分析发现，PCOS组的血清miR-26b表达与LDL-C、HOMA-IR及BMI均呈正相关，而与对照组各项指标均无相关性；进一步分析仅有HOMA-IR是PCOS组血清miR-26b表达的危险因素。考虑是因为LDL-C及BMI作为肥胖的反馈性指标，miR-26b的表达及PCOS的发病产生了表面的肥胖症状联系，而HOMA-IR与miR-26b则属于相对内在关联。有报道表明[14]，40%～80%的PCOS患者有肥胖或超重表现，由于有肥胖症状的PCOS患者常伴有胰岛素抵抗，加之脂肪组织内miR-26b发生的异常性表达和葡萄糖及脂肪代谢的异常联系紧密，因此miR-26b的表达与患者机体糖脂代谢异常也明显相关。在胰岛素抵抗层面，miR-26b可能是调控了机体内胰岛素有关信号通路或MAPK信号通路当中胰岛素样生长因子及受体底物，以及蛋白激酶B与促性腺激素释放激素等物质，致使正常通路被干扰或阻断，最终导致胰岛素抵抗，并由此参与了PCOS的发病。这在Jiang等[15]结果中也有类似结论佐证。

综上所述，血清miR-26b表达与PCOS患者糖脂代谢关系紧密，且HOMA-IR是患者血清miR-26b表达的危险因素。临床可将血清miR-26b作为监测靶点，为临床诊断治疗PCOS提供依据。