紫外分光光度法测定栀子中绿原酸含量

罗娜 王雪 黄丽佳 陈建雯 冯国华 郭亚东 邓亮

摘要：目的 建立栀子中绿原酸含量的测定方法。方法 采用紫外分光光度法，以60%乙醇为空白，在波长329nm处测定绿原酸含量。结果 绿原酸在（2.5-15）μg/mL范围内，线性关系良好（r=0.9993），回归方程y=0.0457x+0.0005，平均加样回收率为98.1%，RSD为2.7%。结论 紫外分光光度法操作简便、准确、重复性好，可作为栀子中绿原酸含量测定的方法。

关键词：栀子;绿原酸;紫外分光光度法，含量测定

中图分类号：R927.2 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2020）06-0067-03

Determination of Chlorogenic Acid in Gardenia by Ultraviolet Spectrophotometry

LUO Na1， WANG Xue1， HUANG Li-jia1， CHEN Jian-wen2， FENG Guo-hua3， GUO Ya-dong1， DENG Liang1

（1. School of Pharmacy， Kunming Medical University and Key Laboratory of Natural Medicineand Pharmacology of Yunnan Province， Kunming 650500， China; 2. Honghe Vocational College of Health， Mengzi 661101， China; 3. Biomedical Engineering Center， Kunming Medical University， Kunming 650500， China）

【Abstract】Objective： To establish a method for determining the content of chlorogenic acid in gardenia. Methods： Ultraviolet spectrophotometry was used with 60% ethanol as the blank to measure the chlorogenic acid content at a wavelength of 329 nm. Results： Chlorogenic acid had a good linear relationship （r=0.9993） in the range of 2.5 to15 μg/mL. Regression equation was y=0.0457x+0.0005 and the average sample recovery rate was 98.1%， and RSD was 2.7%. Conclusion： Ultraviolet spectrophotometry is simple and accurate with good reproducibility and can be used as a method for the determination of chlorogenic acid in gardenia.

【Key words】gardenia， chlorogenic acid， ultraviolet spectrophotometry， content determination

栀子是茜草科植物山栀Gardenia jasminoides Ellis 的果实，性苦寒，具有保肝，降血糖，泻火除烦、清热利尿、凉血解毒之功效，栀子属植物中含有多种化学成分，如黄酮类、环烯醚萜类、三萜类、有机酸酯类、西红花苷类、挥发油等[1-2]。中国药典对栀子药材只测定栀子苷的含量[3]，绿原酸是梔子中的有效成分之一，其含量较高，具有抗氧化、清除自由基、降血脂等活性。文献报道测定栀子中绿原酸含量的方法主要是高效液相色谱[4-5]，少数采用紫外分光光度法测定其含量[6]，本文用紫外分光光度法测定了不同产地的栀子中绿原酸含量，并进行了系统的样品提取方法学的研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器和试剂 紫外一可见分光光度计（TU1810，北京普析），超声提取器（SK3200H，上海仪器制造厂），CP225D电子天平（德国Sartorius公司）。

绿原酸标准品（纯度≥98%，中国食品药品检验研究院），水为纯净水，其他试剂为分析纯。

1.2 样品 栀子样品购自当地医药公司，经粉碎后过100目筛。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品7.5 mg于25 mL容量瓶中，加60%乙醇制成300μg/mL 的对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备 称取干燥栀子粉末各1.0 g，放入锥形瓶中，加入60%乙醇25 mL，超声处理25 min，放冷，过滤，滤液全部转移于100 mL容量瓶中定容，即得供试品溶液。

2.2 吸收波长的选择及标准曲线制作 用60%乙醇分别配制栀子供试品溶液和对照品溶液。用紫外分光光度计在波长为（200-400）nm进行扫描，结果见图1。绿原酸在329 nm波长处有最大吸收。

分别吸取不同体积的300 μg/mL 的对照品溶液用60%乙醇稀释后得到浓度为2.5，5，7.5，10，12.5，15 μg/mL的系列对照品溶液，以60%乙醇为空白，在329 nm波长处测定吸光度，以绿原酸浓度C（μg/mL）为横坐标x，吸光度A为纵坐标y作图，绘制标准曲线，得回归方程：y=0.0475x-0.0075，r=0.9993，表明在2.5-15 μg/mL范围内，绿原酸的吸光度与浓度之间有良好的线性关系。

2.3 单因素实验 影响提取效率的因素主要有乙醇浓度、提取时间、料液比等。

2.3.1 乙醇浓度对栀子中绿原酸提取率的影响 称取3份栀子粉末各1.0 g，置于3个锥形瓶中，分别加入25 mL的50%、60%、70%的乙醇，超声提取25 min，过滤，用60%乙醇稀释定容至100 mL，适当稀释后在329 nm处测定吸光度，用回归方程计算绿原酸的提取率，用50%、60%、70%的乙醇所得的绿原酸的提取率分别为1.91%，2.01%和1.92%，可见60%乙醇的提取效果最好。

2.3.2 提取时间对栀子中绿原酸提取率的影响 称取3份栀子粉末各1.0 g，置于3个锥形瓶中，各加入25 mL的60%的乙醇，分别超声提取15、25和35 min，过滤，用60%乙醇稀释定容至100 mL，适当稀释后在329 nm处测定吸光度，用回归方程计算绿原酸的提取率，测得提取时间为15 mim、25 mim和35 mim时绿原酸的提取率分别为2.16%、2.01%和2.14%，可见15 min的超声时间提取效果最好。

2.3.3 料液比对栀子中绿原酸提取得率的影响 称取3份栀子粉末各1.00 g，置于3个锥形瓶中，分别按1：20、1：25、1：30的料液比加入60%乙醇，超声提取25 min，过滤，用60%乙醇定容至100 mL，适当稀释后在329 nm处测定吸光度，用回归方程计算绿原酸的提取率，当料液比为1：20、1：25和1：30時，绿原酸的提取率分别为1.91%、2.03%和2.01%，可见1：25 的料液比提取效果最好。

2.4 正交试验设计

2.4.1 正交试验的设计 在提取单因素实验的基础上，采用正交实验优化提取条件。以乙醇浓度、提取时间、料液比3个因素作为考察对象，每个因素选用3个水平。选用L9（34）表，安排实验优化工艺条件，因素水平见表1。

2.4.2 正交试验结果及分析 试验结果及分析见表2 和表3。从表2可以看出，最佳工艺组合是 A3B3C2，即乙醇浓度70%，提取时间25 min，料液比1：25。对极差贡献最大的是A因素，其次是C因素，B因素影响最小。

从方差分析的结果看，A、B、C三个因素对提取率没有显著性差异。

2.5 精密度试验 取对照品溶液，在329nm波长处测定吸光度值，重复6 次，测得RSD为1.2%。

2.6 重复性实验 精密称取6份栀子粉末各0.50 g，按2.1.2项下供试品溶液的制备方法平行制备6份供试品溶液，329nm测定吸光度，测得的RSD为2.3%。

2.7 加样回收率试验 精密称取已经测定含量的栀子粉末6份各0.5 g，放入锥形瓶中，分别加入60%乙醇25 mL，各加入浓度为300 μg/mL对照品溶液4 mL，超声处理25 min，放冷，过滤，全部转移于100 mL容量瓶中定容，适当稀释后，于329 nm测定吸光度值。计算平均加样回收率为98.1%，RSD为2.7%。

2.9 绿原酸含量测定 取不同产地的栀子样品，用70%乙醇超声提取，过滤，稀释后于329 nm测定吸光度，由回归方程计算样品中绿原酸的含量，结果：江西1.64%，云南1.54%，贵州1.75%，安徽1.89%，河南2.16%，广西1，57%，四川1.10%。

3 讨论

3.1 提取方法的考察 以乙醇为溶剂，比较热回流、超声、浸泡等方法进行提取，以栀子中绿原酸的提取量为考察指标，结果表明超声提取法简便，快速，效果好。

3.2 通过正交实验考察了超声提取时乙醇浓度，提取时间和料液比的影响，最佳提取条件是70%乙醇浓度，提取时间25 min时，料液比1：25。

3.3 绿原酸是栀子中的重要活性成分，测定其含量可用于对栀子药材的质量控制，用紫外分光光度法来测定绿原酸的含量，该方法简便、准确、重复性好.可作为栀子中绿原酸含量的测定方法。

参考文献：

[1]任治军，张立明，何开泽.栀子主要成分的提取工艺及药理研究进展[J].天然产物研究与开发，2005，17（6）：831-836.

[2]于洋，高昊，戴毅，等.栀子属植物化学成分的研究进展[J].中草药，2010，41（1）：148-153.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部[S].北京：中国医药科技出版社，2015：248.

[4]关皎，朱鹤云，李菁，等.UFLC 法同时测定栀子中4种活性成分的含量，中药新药与临床药理[J].2017，28（2）：219-222.

[5]王先敏，曹馨元，毛婷，等.HPLC 同时测定栀子中的4种成分[J].华西药学杂志，2017，32（4）∶436-438.

[6]陈亮，林培玲，丁春花，等.栀子绿原酸含量的紫外-分光光度法测定[J].福建中医药大学学报，2013，23（5）：36-37.

（收稿日期：2020-01-13）