紫杉醇脂质体联合顺铂通过PI3K/AKT信号通路对不同化疗途径治疗宫颈癌的疗效及安全性

刘忠 周晓明 张永妍

宫颈癌是女性常见癌症之一，发病率在女性恶性肿瘤中居第3位，占女性癌症总数的10%，2010年至2014年病死率每年增长3%［1］。宫颈癌的治疗包括根治性子宫切除术，化学疗法或放射疗法［2］。但根治性手术仅限早期宫颈癌患者，晚期患者通常由于病灶较大，局部出血、炎症、坏死和子宫旁膜浸润而接受传统治疗，如放射治疗而不是切除术。顺铂是治疗各种恶性肿瘤的一线化疗药物［3］。在复发或转移性疾病中，将顺铂与紫杉醇联合使用是最常用的治疗方案之一。PI3K/AKT信号通路涉及细胞存活和凋亡，肿瘤发生及进展的几个生物学过程。本文探讨紫杉醇脂质体联合顺铂通过PI3K/AKT信号通路对不同化疗途径治疗宫颈癌的疗效及安全性。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择本院收治的宫颈癌患者64例，随机数字表法分为对照组与观察组各32例。对照组：年龄36～61岁，平均年龄（46.8±2.3）岁。鳞癌17例，腺癌9例，鳞腺癌6例；Ⅰ期10例，Ⅱ～Ⅲ期13例，Ⅳ期9例。观察组：年龄38～60岁，平均年龄（48.3±2.7）岁。鳞癌19例，腺癌8例，鳞腺癌5例。Ⅰ期11例，Ⅱ～Ⅲ期14例，Ⅳ期7例。两组患者年龄和病理类型差异无统计学意义（P>0.05）。（1）纳入标准：①患者经组织病理学确诊为宫颈癌；②患者尚未接受化疗或其他治疗；③患者预期生存>1年。（2）排除标准：①患者肿瘤已发生远处转移；②患者接受过化疗。以上患者及其家属均知晓并签署同意书，本项目通过本院伦理委员会批准。

1.2 方法 对照组采用静脉滴注化疗：对患者进行预处理，通过肌肉注射苯海拉明40mg，静脉推注地塞米松5mg，并静脉滴注西咪替丁100mg，30min后以紫杉醇脂质体（155mg/m2）静脉滴注D1 30min，顺铂（75mg/m2）静脉滴注D2，4周为1个疗程，共治疗2个疗程。观察组采用动脉灌注化疗：先穿刺股动脉，进行插管，开始在盆腔动脉进行DSA造影，以患者肿瘤实际情况选择插管型号，将明胶海绵栓塞的导管头部置入肿瘤供血的血管内，最后行动脉灌注，用药剂量与静脉滴注一致，灌注完后拔管，穿刺口加压包扎，平卧休息至少8h。

1.3 用qRT-PCR检测PI3K、AKT mRNA表达水平 使 用 Trizol试 剂（Invitrogen，United States） 提取总RNA，根据检测说明，然后逆转录cDNA。ABI 7900系统中的 SYBR Green Premix Ex Taq II（Takara）用于定量逆转录PCR（qRT-PCR），GAPDH作为内部参考。采用2-ΔΔCT方法计算基因的相对表达水平。

1.4 用Western blotting检测PI3K、AKT、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达 收集各患者化疗后未进食时的外周血，离心后获得血清，通过电泳法从血清中获得蛋白，并通过SDS-PAGE分离，然后转移至PVDF膜上，用5%脱脂乳封闭后。将膜用Tris缓冲盐水（TBS）处理，并在4℃下暴露于一抗。此后，用适当的二抗处理细胞，并通过增强的化学发光试剂ECL将目的蛋白可视化。

1.5 临床疗效和安全性 根据WHO近期疗效评价标准［4］：（1）完全治愈（CR）：体内无肿瘤，完全治愈；（2）部分治愈（PR）：体内肿瘤数量减少和肿瘤体积减少>50%；（3）病情稳定（SD）：体内肿瘤体积减少<50%或增加<原体积25%；（4）病情发展（PD）：体内肿瘤体积>原体积25%或出现肿瘤扩散。通过阴道镜检查确定患者体内有无肿瘤。根据WHO化疗［5］毒副作用分级标准考察安全性：化疗不良反应大部分出现在消化系统胃肠道反应，包括呕吐、血便、腹泻等；及肝肾功能损害、外周神经炎、过敏反应、骨髓抑制及免疫力下降。

1.6 统计学方法 采用SPSS 19.0统计学软件。计量资料以（）表示。两组间比较用t检验，多组间比较用方差分析；计数资料用卡方检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同化疗途径对PI3K、AKT mRNA表达的影响 两组患者宫颈癌组织中PI3K、AKT mRNA的表达高于癌旁组织，差异有统计学意义（P<0.05）；观察组患者PI3K、AKT mRNA的表达显著低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

表1 各组PI3K、AKT mRNA表达比较（）

表1 各组PI3K、AKT mRNA表达比较（）

注：与癌旁组织比较，*P<0.05；与对照组比较，#P<0.05

组别 PI3K AKT观察组癌组织 2.53±1.43*# 1.87±1.27*#对照组癌组织 4.42±2.11* 3.62±2.01*癌旁组织 1.23±0.26 0.53±0.16

2.2 不同化疗途径对PI3K、AKT、p-PI3K和p-AKT蛋白表达的影响 两组患者宫颈癌组织中PI3K、AKT、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达高于癌旁组织，差异有统计学意义（P<0.05）；观察组患者PI3K、AKT、p-PI3K和p-AKT蛋白表达低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。见图1。

图1 各组PI3K、AKT、p-PI3K和p-AKT蛋白表达比较

2.3 不同化疗途径对治疗宫颈癌临床疗效的影响 观察组临床疗效总有效率高于对照组，差异有统计学意义（χ2=2.86，P<0.05），见表2。观察组5年无病生存期（DFS）高于对照组（P<0.05），见表3。观察组远期疗效5年生存率显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表4、图2。

表2 两组宫颈癌患者临床疗效比较［n（%）］

表3 两组患者无病生存率比较

表4 两组患者远期疗效比较［n（%）］

2.4 不同化疗途径对治疗宫颈癌安全性的影响 两组患者肝肾功能损害和外周神经炎差异无统计学意义（P>0.05）；观察组不良反应出现胃肠道反应、过敏反应、骨髓抑制及免疫能力下降低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表5。

表5 两组宫颈癌患者的安全性比较［n（%）］

3 讨论

宫颈癌占女性癌症的10%，对女性的健康造成严重危害［6］。研究表明，复发或转移性肿瘤的预后相对较差，其一年生存率仅15%～20%［7］。将顺铂与紫杉醇联合使用是最常用的治疗方案之一。顺铂在肿瘤中的耐药机制是多因素的，包括药物代谢：转运蛋白的异常表达；细胞解毒机制：增强细胞内解毒；基因水平：提高DNA修复能力，增强抑制细胞凋亡的能力［8］。目前已在较多种癌症中发现了PI3K/AKT信号通路的激活［9］。AKT是一种在PI3K下游起作用的丝氨酸/苏氨酸激酶，其是PI3K/AKT信号传导的关键因素，也被称为蛋白激酶B（PKB）。其包含三种高度同源的亚型：AKT1（PKBa），AKT2（PKBb）和 AKT3（PKBc），在细胞存活和凋亡中起关键作用，在获得性肿瘤抗药性细胞倾向于增加AKT的激活［10］。相关研究表明，AKT过表达在化疗过程中调节癌细胞的耐药性。如，在乳腺癌细胞中，耐药细胞中的AKT1表达被激活［11］。AKT3是AKT家族中最关键的成员之一，其参与细胞增殖、肿瘤发生、细胞分化和凋亡等过程。AKT3也与癌细胞的化学抗性有关。研究表明，敲除AKT3会增加迁移及乳腺癌细胞对顺铂的敏感性［12］。此外，AKT3的敲除还诱导A549肺癌细胞的线粒体功能障碍［13］，但宫颈癌细胞中AKT3表达的上调与临床疗效、安全性之间的关系有待进一步研究。本资料结果显示，对照组和观察组患者宫颈癌组织中PI3K、AKT mRNA和蛋白的表达高于癌旁组织，观察组患者PI3K、AKT mRNA和蛋白的表达显著低于对照组。

随着化疗药物的不断研发和改良，化疗的给药途径也被研究者重视，不同的化疗途径可以显示不同的临床疗效，对患者恢复期的安全性也有一定影响。采用适当的化疗途径可以提高临床疗效且减轻患者后期的不良反应，提高患者的存活期。本资料结果显示，观察组临床疗效总有效率显著高于对照组，观察组远期疗效5年生存率显著高于对照组，两组患者的肝肾功能损害和外周神经炎差异无统计学意义，观察组不良反应出现胃肠道反应、过敏反应、骨髓抑制及免疫能力下降的频率低于对照组。提示，动脉灌注可以有效提高化疗疗效和减少不良反应，提高安全性。

综上可知，PI3K/AKT信号通路参与宫颈癌的临床疗效和不良反应过程，动脉灌注作为化疗途径可以有效提高化疗疗效和减少不良反应，提高安全性。