Ddx5 和Ddx17在人脑胶质瘤中的表达及其与病人生存期的关系

孙宇婷 冯钰珉 戴科芳 郝进敏

胶质瘤是颅内常见的原发性肿瘤，WHO分级Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤5 年存活率在30%～70%，Ⅳ级存活期仅9～12 个月[1]。DEAD 盒蛋白（DEAD-box protein，Ddx）是一类高度保守的RNA 解旋酶。多种癌症Ddx5和Ddx17表达水平升高，参与肿瘤的发生、发展[2]。本文探讨人脑胶质瘤Ddx5和Ddx17表达水平变化及其与病人临床预后的关系。

1 资料与方法

1.1 标本来源 选取2013 年1 月至2016 年6 月手术切除的胶质瘤组织120 例，术前均未接受过放、化疗，其中男62 例，女58 例；年龄24～77 岁，平均（52.64±3.24）岁；肿瘤全切除71 例，次全切除49 例；WHO分级Ⅰ级14例，Ⅱ级36例，Ⅲ级22例，Ⅳ级48例；星形胶质瘤42例，少突胶质瘤38例，室管膜瘤17例，混合胶质瘤23例；术后化疗62例。另选取50例颅脑损伤内减压术中切取正常脑组织为对照，其中男33 例，女17 例；年龄36～65 岁，平均（52.06±8.96）岁。两组性别、年龄无统计学差异（P＞0.05）。

1.2 免疫组化法检测Ddx5 和Ddx17 的表达 取胶质瘤组织和正常脑组织石蜡切片（4～8 μm），经二甲苯脱蜡、梯度酒精水化、枸橼酸溶液抗原修复后，聚乙二醇辛基苯基醚通透，用3%H2O2灭活内源性过氧化物酶，随后用山羊血清封闭。滴加兔抗人Ddx5 或Ddx17一抗（1:500，美国Invitrogen 公司），4 ℃孵育过夜。用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法显色，苏木精复染。显微镜下观察Ddx5 为黄褐色，染色位于细胞核；Ddx17 为黄褐色，染色位于细胞质（图1）。每张切片观察5个视野，每个高倍镜至少观察100个细胞。染色强度评分：无着色0分；淡黄色1分；棕黄色2分；棕褐色3分。染色细胞百分比评分：阳性细胞数＜5%为0 分；5%～25%为1 分；26%～50%为2分；51%～75%为3分；＞75%为4分。染色强度评分+染色细胞百分比评分在0～3分为低表达，＞3分为高表达[3]。

1.3 随访 术后以电话和门诊方式进行随访，随访时间截止至2018年9月。

1.4 统计学方法 采用SPSS 20.0软件分析；计量资料用±s表示，采用t检验；计数资料采用χ2检验；用Kaplan-Meier 法绘制生存曲线，采用log-rank 检验；采用多因素Cox比例回归风险模型分析生存预后危险因素；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 人脑胶质瘤组织Ddx5 和Ddx17 的表达情况 胶质瘤组织Ddx5 和Ddx17 高表达分别为84 例、79 例，低表达分别为36例、41例。对照组Ddx5和Ddx17高表达分别为14 例、19 例，低表达分别为36 例、31例。胶质瘤组织Ddx5（70.0%）和Ddx17（65.8%）高表达率均明显高于对照组（分别为28.0%、38.0%；P＜0.05）。高级别胶质瘤Ddx5 和Ddx17 高表达率明显高于低级别胶质瘤（P＜0.05）。

2.2 胶质瘤病人生存期的影响因素 多因素Cox比例回归风险模型分析结果显示，年龄≥60岁、术前KPS评分＜80 分、高级别胶质瘤、术后未化疗、Ddx5 和Ddx17高表达是胶质瘤病人PFS和OS较短的独立影响因素（P＜0.05），见表1、2。

2.3 Ddx5和Ddx17与胶质瘤病人生存期的关系120例胶质瘤随访86～2178 d，死亡39例，复发89例。与低表达组比较，Ddx5和Ddx17高表达组PFS和OS均明显缩短（P＜0.05，图2）。

3 讨论

Ddx5是一种具有多种生物活性功能的核蛋白，在转录、前mRNA 处理或选择性剪接和miRNA 处理等生物学过程中发挥重要作用[2]。本文结果发现，人脑胶质瘤组Ddx5 表达水平明显增高。这与Luo 等[4]发现一致。研究发现Ddx5 可能通过Wnt/β-catenin信号通路发挥促癌作用[2]。但Quan等[5]发现Ddx5可能通过抑制酪氨酸激酶2/信号转导和转录激活因子3 通路抑制基底细胞的增殖、侵袭和迁移。这种差异可能与组织特异性有关。本文多因素Cox比例回归分风险模型分析结果显示，Ddx5高表达是胶质瘤病人PFS 和OS 缩短的独立危险因素。这与练晓文等[6]发现一致。

表1 胶质瘤病人无进展生存期影响因素的Cox比例回归风险模型分析结果

表2 胶质瘤病人总生存期影响因素的Cox比例回归风险模型分析结果

Ddx5 和Ddx17 具有高度同源性。Ddx5/Ddx17作为转录共同调节因子在肿瘤发生发展中起重要作用。本文发现Ddx17 与胶质瘤病人的不良预后有关。放疗和化疗是高级别胶质瘤的主要辅助治疗手段。研究显示，术后放疗和/或化疗后Ddx5和Ddx17高表达病人生存率明显低于低表达病人，提示Ddx5和Ddx17表达水平可有用于评估放、化疗效果[4]。

总之，胶质瘤Ddx5 和Ddx17 表达水平显著增高，二者均与胶质瘤病人的不良预后有关。