差分脉冲伏安法测定黑枸杞中多酚的方法研究

董宏博，崔桂花，李文亮

(吉林医药学院化学教研室，吉林 吉林 132013)

黑果枸杞藏药名“旁玛”，其成熟浆果中富含多酚类物质。枸杞子多酚系植物多酚的一种，其改善认知功能、抗菌消炎、抗肿瘤与抗氧化等多种药理功效已有了科学理论支持[1-2]。目前检测枸杞多酚的方法有很多，但电化学方法较少。本研究利用差分脉冲伏安法测定绿原酸，建立了测定黑枸杞中多酚含量的简单、快速的方法。

1 材料与仪器

LK2005电化学工作站(南京兰力科仪器有限公司)；超声波清洗机KQ-250DE型(昆山市超声仪器有限公司)。

绿原酸(上海麦克林生化科技有限公司)；黑枸杞干果(购于药房)；其他试剂均为分析纯。

配制绿原酸储备液：准确称取绿原酸标准品10.6 mg，用去离子水溶解，定容至100 mL冷藏保存,浓度3.0×10-4mol/L。

2 方法与结果

2.1 差分脉冲伏安法建立

2.1.1玻碳电极的极化

将玻碳电极在金相砂纸上打磨，再用Al2O3抛光粉(3000目)抛光，然后用去离子水淋洗、擦拭干净。采用循环伏安法，在0.5 mol/L的硫酸溶液中，利用工作站的三电极体系(工作电极是玻碳电极，对电极是铂电极，参比电极是Ag/AgCl电极)，在-1.2～1.1 V范围内，灵敏度为100 μA、0.2 V/s的扫速下循环20圈至稳定，每次测定前都要活化。

2.1.2循环伏安法测定

准确移取3 mL绿原酸标准溶液，加入10 mL pH=4.2醋酸-醋酸钠缓冲溶液和1 mL氯化钠溶液，用去离子水定容至50 mL。采用循环伏安法[3]，利用工作站的三电极体系，在0.1～0.8 V范围内，灵敏度为10 μA、0.05 V/s的扫速下循环1圈，进行测定，结果如图1所示。由图1可见，在0.276 4 V和0.395 5 V附近处出现一对明显的氧化还原峰，表明绿原酸在硫酸活化电极表面发生了氧化还原反应。峰电流分别是2.696 0 μA和3.713 1 μA，峰电位之差是119.1 mv，峰电流之比近似为1，说明这是一个可逆的电极反应。

2.1.3差分脉冲伏安法测定

准确移取3 mL绿原酸标准溶液至50 mL容量瓶，加入10 mL pH=4.2的醋酸-醋酸钠缓冲溶液和1 mL氯化钠溶液，用去离子水定容至50 mL。利用差分脉冲伏安法[4]，采用工作站的三电极体系，在0.1～0.6 V范围内,灵敏度为10 μA、电位增量为0.02 V、脉冲幅度为0.05 V、脉冲宽度为0.05 s、脉冲间隔为2 s、等待时间为2 s进行测定，结果如图2。

准确移取1 mL枸杞提取液的稀释液，置入到50 mL容量瓶，加入10 mL pH=4.2的醋酸-醋酸钠缓冲溶液和1 mL氯化钠溶液，去离子水定容至50 mL。利用差分脉冲伏安法，进行测定。结果见图3。

由图2可知，绿原酸标准溶液在0.40 V处出现氧化峰，峰电流为5.221 0 μA。由图3可知，枸杞提取液在0.38 V处出现氧化峰，峰电流为1.500 1 μA。二者峰电位基本一致，说明此方法可行。

图 1 绿原酸标准溶液循环伏安图 图 2 绿原酸标准溶液差分脉冲伏安图 图 3 枸杞提取液差分脉冲伏安图

2.2 方法学考察

2.2.1标准曲线的绘制

分别准确移取0.6、1.0、2.0、3.0、6.0 mL绿原酸标准溶液，置于50 mL容量瓶，加入10 mL pH=4.2的醋酸-醋酸钠缓冲溶液和1 mL氯化钠溶液，用去离子水定容至刻度,进行差分脉冲伏安法测定。实验发现绿原酸峰电流随其浓度的增大而逐渐增大，但峰电位基本不变，且氧化峰电流与绿原酸溶液浓度在1.27～8.48 mg/L范围内呈现良好的线性关系，得线性回归方程为y=0.699 4x+0.746 8，R2=0.998 3。

2.2.2精密度试验

分析天平精密称取5.500 7 g黑枸杞，加入100 mL去离子水，置入100 mL锥形瓶中，于20 ℃下超声提取20 min，减压抽滤，滤液用去离子水定容至100 mL，得枸杞样品溶液。准确移取5 mL提取液，加去离子水定容到50 mL，得到样品液的稀释液。分别准确移取黑枸杞样品稀释液1 mL 4份平行测定，相对标准偏差为0.88%，说明仪器精密度良好。并计算得出黑枸杞中多酚含量为1.002 4%。

2.2.3加样回收率试验

准确移取1 mL黑枸杞样品稀释溶液4份，分别加入绿原酸标准溶液0.3、0.4、0.5、0.6 mL，进行差分脉冲伏安法测定。结果回收率在95%～105%之间，平均回收率为102.38%，表明此法较为准确。

2.2.4稳定性试验

准确移取4 mL绿原酸标准溶液，分别在0、45、75、105 min进行测定，测定结果表明本测试品溶液在45 min内稳定性良好。

3 结 论

本次实验初次采用差分脉冲伏安法测定黑枸杞中的多酚，以绿原酸为标准物质，绿原酸溶液浓度在1.27～8.48 mg/L范围内呈现良好的线性关系，并且绿原酸溶液和样品溶液的峰电位基本一致。此方法测得枸杞中的多酚的百分含量为1.002 4%，平均加样回收率为102.38%，说明此方法适合测定枸杞中的多酚，为黑枸杞的开发应用提供一定的参考价值。