地黄养阴颗粒对耳廓微循环药效学作用*

王 莉，乔 园，穆庆丽，郭 冬△

1.西电集团医院(西安 710077)； 2.陕西省中医药研究院(西安 710003)

斑秃(Alopecia areata，AA)是一种发病率较高，在任何年龄阶段均可发生的皮肤科常见疾病，表现为良性、局限性、非瘢痕性的脱发。根据其严重程度可分为局限性斑状斑秃、全秃和普秃[1]。斑秃的发病机制至今尚未阐明，一般认为是一种T细胞介导的自身免疫性疾病，且与精神神经、遗传因素有关。中医认为斑秃属“油风”范畴，主因肾虚不足，气血虚衰，继而血瘀、血热及劳倦情志等所致，此外还应注意肝失疏泄至气机不畅，继而气滞血淤，阻塞毛窍，导致脱发。中药治疗此疾病有悠久历史，效果良好[2-5]。地黄养阴颗粒是陕西省中医医院临床经验处方，主要由熟地黄、红花、当归、补骨脂等组成，采用水提，浓缩，加辅料制成的颗粒剂。具有活血生发，益肾填精功效，临床使用其治疗斑秃多年，且效果良好。本研究通过称取标记区域毛发重量、测定微循环相关指标和碳粒廓清实验，探讨验证地黄养阴颗粒的主要药效学，为临床用药服务。

材料与方法

1 实验材料

1.1 实验动物：(KM)小鼠，SPF级，60只，体重18～22 g，♀♂各半，来源于西安交通大学实验动物中心，许可证号：SCXK(陕)2015-003。饲养室温(24±2)℃，相对湿度40%～60%。实验动物雌雄分笼喂养，动物自由饮食饮水。动物实验室保持干净整洁。

1.2 试剂与药物：地黄养阴颗粒，陕西省中医医院自制，批号：190501，含量为每g含生药0.6 g；口服，每日2次，每次1袋(10 g/袋)，人日用量为1/3 g/kg(体重按60 kg计)。养血养阴胶囊，广州白云山敬修堂药业股份有限公司生产(国药准字Z44020913)，批号：Y01014；口服、每次4粒(0.5 g/粒)、每日2次、人日用量约为0.667 g/kg(体重按60 kg计)。印度墨水(Solarbio生产)，规格为100 ml/瓶，批号：20181024。

2 实验方法

2.1 动物剂量设计：地黄养阴颗粒小鼠大剂量10 g/kg为人用量(1/3 g)的30倍，中剂量5 g/kg为人用量的15倍，小剂量2.5 g/kg为人用量的7.5倍(分别相当于生药量6、3、1.5 g/kg)。地黄养阴颗粒小鼠用量2 g/kg为人用量的30倍。

2.2 药物配制：取地黄养阴颗粒10 g加纯净水至20 ml，配成50%的混悬液为大剂量，中小剂量对半稀释。取地黄养阴颗粒2粒，加纯净水至10 ml，配成10%的混悬液。灌胃体积均为20 ml/kg。

2.3 小鼠毛发生长实验：参考文献方法[6]，各组小鼠均按体重0.2 ml/10g灌胃给药，第一组为正常对照组灌胃去离子水0.1 ml/10 g，第二组灌胃地黄养阴颗粒2 g/kg，相当于人临床用量30倍，第三至五组分别灌胃地黄养阴颗粒10、5、2.5 g/kg。每日一次，连续给药14 d，第15天时对小鼠同一位置相同大小皮肤标记，取该区域毛发并称重，记录为小鼠毛发重量，继续给药16 d后用同样方法测得小鼠新生处毛发的重量，与空白组对比。

2.4 小鼠耳廓微循环实验：参考文献方法[7]，采用实验1小鼠，给药前用2%水合氯醛0.2 ml/10 g腹腔注射麻醉实验小鼠(严格消毒)，背部向上固定在小鼠实验台上，使耳廓平展在耳托上，并用苦味酸标记耳边界实验处，滴加少许液体石蜡在耳托上和耳廓表面，将观察台置于BL-420生物机敏实验系统显微载物台上，调节泛光源至适当亮度，在10倍镜下观察，画出血管分布草图(以备下次观测时找到原测血管部位)，测量其毛细血管开放量，血流速度(μm/s)，血管输入口径(μm)及血管输出口径(μm)，实验当天开始给药，连续给药30 d。末次给药后，测10、20、30 min小鼠原部位的血管开放量、血流速度(μm/s)、血管输入口径(μm)及血管输出口径(μm)，减去给药前小鼠的相应值即为血管开放量变化值，血流速度变化值，血管输入及输出口径变化值。

2.5 小鼠碳粒廓清实验：按文献方法[7]，采用实验1小鼠，连续给药30 d。末次给药后，尾静脉注入生理盐水配制的10%印度墨汁0.1 ml/10 g。在注入2 min和12 min时，分别用微量移液器从小鼠内眦静脉丛取血20 μl，立刻加入到2 ml 0.1% Na2CO3溶液中，摇匀。试验结束后，可见分光光度计，680 nm处以对照管作为空白，分别测定各管OD值。同时取小鼠肝、脾称重，按下公式计算吞噬指数κ及校正吞噬系数α值。吞噬指数κ=(logOD1-logOD2)/(t2-t1)，α = κ的开立方×体重/(肝重+脾重)。

3 统计学方法 采用SPSS 20.0 统计学软件进行统计学处理。所有实验数据均以平均值±标准差表示，在正态分布且方差齐的情况下对其行单因素方差分析，两两比较采用LSD法，P<0.05 表示差异有统计学意义。

结 果

1 地黄养阴颗粒对小鼠毛发生长的影响 见表1。阳性组、地黄养阴颗粒大中剂量14 d可促进小鼠毛发生长(P<0.05)，阳性组、地黄养阴颗粒大中小剂量30 d可明显促进小鼠毛发生长(P<0.01)。

表1 地黄养阴颗粒对小鼠毛发生长的影响(g)

注：与对照组比较，*P<0.05，△P<0.01

2 地黄养阴颗粒对小鼠耳廓微循环的影响 由表2可见阳性组、地黄养阴颗粒大中剂量组可增加小鼠毛细血管开放量(P<0.05或P<0.01)。由表3可见阳性组、地黄养阴颗粒大中小剂量组可促进小鼠毛细血管血流速度(P<0.01)。由表4可见阳性组、地黄养阴颗粒大中小剂量组可增大小鼠毛细血管输入口径(P<0.05或P<0.01)。由表5可见阳性组、地黄养阴颗粒大中小剂量组可增大小鼠毛细血管输出口径(P<0.01)。因此，地黄养阴颗粒可明显改善小鼠耳廓微循环。

表2 地黄养阴颗粒对小鼠毛细血管开放量的影响(个)

注：与对照组比较,*P<0.05，△P<0.01

表3 地黄养阴颗粒对小鼠毛细血管血流速度的影响(μm/s)

注：与对照组比较,*P<0.05，△P<0.01

表4 地黄养阴颗粒对小鼠毛细血管输入口径的影响(μm)

注：与对照组比较,*P<0.05，△P<0.01

表5 地黄养阴颗粒对小鼠毛细血管输出口径的影响(μm)

注：与对照组比较,*P<0.05，△P<0.01

3 地黄养阴颗粒对小鼠炭粒廓清的影响 见表6。阳性组、地黄养阴颗粒大中剂量组可明显增加小鼠吞噬指数(κ)和校正吞噬系数(α)，因此地黄养阴颗粒可明显增强小鼠网状内皮系统的吞噬功能(P<0.05或P<0.01)。

表6 地黄养阴颗粒对小鼠炭粒廓清能力的影响

注：与空白组比较,*P<0.05 ，△P<0.01

讨 论

斑秃是世界性的皮肤问题，发病率达到19.9%，我国已超1亿，呈年轻化趋势[8]。中医认为“发为血之余，发为肾之候”，肾藏精，肝藏血，精血互生互化，滋养毛发，若精血、肝肾不足时，则会出现头发干枯或稀疏等症状[9]。地黄养阴颗粒为陕西中医医院制剂，本制剂以治疗肝肾不足型斑秃为原则，处方主要由补肝益肾、滋养精血为主，包括熟地黄、红花、当归、补骨脂等中药。熟地黄为君药，补血滋润，益精填髓。现代研究证明熟地黄对造血干细胞亦有一定的增殖、分化作用，且多用于治疗斑秃[10]。环烯醚萜苷类及多糖类为其主要活性成分[11]，能够调节内分泌系统功能，增强机体免疫力。此外熟地黄含有丰富的铁、锌、铜等微量元素，这些元素是头发中不可或缺的物质[12]。红花活血通经，散瘀止痛。其成分红花黄色素可抗氧化、改善微循环作用[13]。当归，味甘、辛、温，归肝、新、脾经，具有补血活血功效，是治疗脂溢性脱发的高频中药[14]。补骨脂，味辛、苦、温，归肾、脾经，具有温肾助阳功效，用于肾阳不足等病症，外用可治疗斑秃[15]。

毛发的生长和再生有赖于机体对毛囊的供血。由于毛囊被丰富的血管床包围，当微循环灌注出现损伤时，微循环中血液流动速度降低，因此毛囊所需营养的正常供给受到严重影响影响，导致毛囊养分缺失，进而出现脱发现象[16]。实验发现，地黄养阴颗粒给药30 d后，可明显促进小鼠毛发生长。通过耳廓微循环实验发现，地黄养阴颗粒可增加小鼠毛细血管开放量，促进小鼠毛细血管血流速度，增大小鼠毛细血管输入口径和输出口径，这与中药治疗斑秃的作用机制一致，即改善毛囊血液微循环，调节毛囊关键部位的生长周期，进而促进毛发生长[17]。大量实验研究表明，斑秃是一种T淋巴细胞介导的自身免疫性疾病[18-19]，因此增强自身免疫能力，有利于治疗斑秃疾病。碳粒廓清实验是通过测定单核巨噬细胞的吞噬功能，来反映机体的免疫功能强弱。单核巨噬细胞是机体中尤为重要的免疫细胞，其碳粒廓清指数(κ)的大小可以反映系统吞噬功能的强弱，当某些可溶性异物或异物颗粒等抗原性物质进入机体后，单核巨噬细胞可迅速清除体内产生的有害物质[20]。本实验结果显示，地黄养阴颗粒可明显增加小鼠网状内皮系统的吞噬作用，具有增强机体免疫功能的作用。

综上，本研究通过观察地黄养阴颗粒口服对小鼠毛发生长、小鼠耳廓微循环、小鼠碳粒廓清实验发现，该制剂能改善小鼠微循环，增强小鼠自身免疫功能，促进小鼠毛发生长，对治疗斑秃具有良好的效果。