鸡屎藤蒸馏物的免疫增强效果评价

朱锋钊 吴强 杨帆 段俊红 罗杰

摘要：在对鸡进行新城疫免疫的同时，利用鸡屎藤蒸馏物滴鼻，研究了鸡屎藤蒸馏物对雏鸡脾脏、法氏囊等免疫器官和机体抗体水平的影响。研究结果表明，鸡屎藤蒸馏物可显著促进雏鸡脾脏（p<0.05）、法氏囊（p<0.01）等免疫器官的发育和增长，显著提升雏鸡抗体水平（p<0.01）。因此，鸡屎藤蒸馏物可显著增强鸡新城疫疫苗的免疫效果，可开发为鸡新城疫疫苗的免疫佐剂。

关键词：鸡屎藤;蒸馏物;新城疫;免疫佐剂

近年来，随着我国养鸡业的高速发展和集约化养殖程度的不断提高，疾病传播机会也大大增加，再加上病原结构变异增加，亚临床型感染病例逐渐增多，多种类型病原混合感染，疫苗免疫效果往往不佳，出现鸡只免疫接种后一些传染病仍然暴发流行的情况。鸡新城疫（Newcastle disease，ND）是由副粘病毒引起的鸡高度接触性、急性和烈性传染病，感染率和致死率均较高，严重危害养鸡业的发展。最常用的预防方式是接种疫苗，为保证抗体效价达到期望的水平，疫苗常与免疫增效剂共同使用。作为免疫佐剂，中草药具有独特的优势，其卓越的双向调节功能和较小的毒副作用已得到医学界的普遍认可。鸡屎藤是一种常用中草药，含有丰富的挥发油活性成分，如芳樟醇、松油醇、樟脑、丁香酚等，具有抗菌、抗应激、镇痛、镇静、抗惊厥等多种药理活性。鸡屎藤可作为雏鸡垫料用于预防多种鸡传染性疫病，其挥发油还可通过口腔、鼻黏膜、眼结膜、皮肤等多种途径进入机体，提升雏鸡小肠横断面肥大细胞数量，降低感染肠炎沙门氏菌患鸡小肠隐窝深度，提高脾脏、法氏囊指数，促进T淋巴细胞的增殖，表现出对雏鸡特异性与非特异性免疫力的提升作用，特别是黏膜免疫的激活作用。因此，鸡屎藤挥发油为主要成分研制鸡屎藤滴鼻剂并评价其免疫增强效果，可为免疫增强剂的开发与临床应用提供参考。

一、仪器与材料

（一）主要试验仪器

Microfuge 22R高速冷冻台式离心机（美国贝克曼库尔特有限公司生产）;R124CN电子分析天平（奥豪斯国际贸易（上海）有限公司生产）;P100微量可调移液器（瑞士Soco-rex生产）;HH-8数显恒温水浴锅（江苏省金坛市恒丰仪器制造有限公司生产）;SHZ-82振荡培养箱（常州华普达教学仪器有限公司生产）;YX-280D高压灭菌锅（合肥华泰医疗设备有限公司生产）;FA-N分析天平（天津市精拓仪器科技有限公司生产）;以及冰箱、96孔V型微量血凝板、滴头等仪器耗材。

（二）试剂

鸡屎藤蒸馏物，由民族中兽药分离纯化国家地方联合工程中心提取，并用蒸馏水制成混悬液，鸡屎藤蒸馏物与蒸馏水的比例分别为3：3（高浓度），2：3（中浓度）和1：3（低浓度），原料药采于贵州省铜仁市松桃县;鸡新城疫疫苗、生理盐水、肝素钠等。

（三）饲料

二、试验方法

（一）试验动物分组

1日龄三黄鸡80只，在实验室条件下孵化，用不含任何抗菌药物的全价饲料饲喂至7日龄。称重后随机将其分成鸡屎藤蒸馏物高剂量组、中剂量组、低剂量组、对照组共4个组，每组20只鸡，共计80只雏鸡用于试验。

（二）试验过程、病理造模、临床观察

在第7日龄，对所有鸡只采用鸡新城疫疫苗滴鼻免疫。从第8日龄起，每天针对高剂量组、中剂量组、低剂量组分别采用高浓度（0.3mL/0.3mL）、中浓度（0.2mL/0.3mL）、低浓度（0.1mL/0.3mL）各0.3mL滴鼻给药，对照组采用蒸馏水0.3mL滴鼻，连续用药7天。

（三）抗体水平测定

连續用药7天后，从存活的雏鸡中随机抽取5只，称重后用一次性注射器空腹翅根静脉采血并抗凝处理（抗凝剂与血液比例1：4），放入冰箱带回试验室，采用新城疫抗体检测技术，检测抗体增长情况。

（四）脏器指数测定

在以上实验的同时，脱臼处死上述试验鸡只，采集分离脾脏、法氏囊并称重。脏器指数计算公式如下：

脏器指数=所测日龄器官重/所测日龄体重×100%

（五）数据处理

用PASWStatistics18分析软件进行数据统计、分析、处理，以平均值和标准差（X±S）表示，并用t检验进行样本均数差异显著性检验。

三、结果

（一）临床观察

从图1直观分析可以看出，高剂量组、中剂量组、低剂量组法氏囊外观体积均明显增大，并且在高剂量组、中剂量组、低剂量组法氏囊增大情况较为均匀。从图2直观分析可以看出，高剂量组、中剂量组、低剂量组亦出现了一定程度的增大，个别增大特别明显并且外观体积明显大于对照组，但在高剂量组、中剂量组、低剂量组之间，均有个别增大的情况，高剂量组、中剂量组、低剂量组之间则看不出明显差异。以上结果表明，鸡屎藤蒸馏物具有促进雏鸡法氏囊、脾脏等免疫器官发育与增长的作用，但未见明显的剂量相关性。

（二）抗体水平直观分析

从图3、图4等反应板直观分析发现，阴性与阳性对照显示正常，说明本试验检测方法可行。对比分析高剂量组、中剂量组、低剂量组和对照组抗体检测水平发现，高剂量组、中剂量组和低剂量组抗体水平与剂量呈正相关，剂量越大，抗体水平提升越明显，并且均明显高于对照组。以上结果表明，鸡屎藤蒸馏物具有提升机体抗体水平的作用，并且与其剂量呈正相关。

（三）脏器指数及抗体水平

从表1可以看出，在脾脏脏器指数方面，中剂量组和低剂量组均显著高于对照组（P<0.05），但高剂量组、中剂量组和低剂量组间未见显著性差异。在法氏囊脏器指数方面，中剂量组极显著高于对照组（P<0.01），中剂量组亦极显著于高剂量组和中剂量组（P<0.01），高剂量组和低剂量组均显著高于对照组（P<0.05），但高剂量组与低剂量组之间却未见显著性差异。在抗体滴度方面，高剂量组和低剂量组均极显著高于对照组（P<0.01），中剂量组显著高于对照组（P<0.05），但高剂量组、中剂量组和低剂量组之间未见显著性差异。以上研究结果表明，鸡屎藤蒸馏物具有明显的促进脾脏和法氏囊发育与增长的作用，亦具有明显提高机体抗体水平的作用，但不具有剂量依赖性，中剂量和低剂量效果更加明显。

四、讨论与结论

21世纪，生命科学的蓬勃发展与人类返朴归真、崇尚自然的科学热潮，给中兽医的振兴提供了良好的机遇。作为科技前沿的现代蛋白质合成技术和基因重组技术已经可以研制出新型优良佐剂，但其免疫激活作用较弱。中草药以其低残留、低毒性，且能调节机体的免疫机能和不易产生耐药性等優点，受到了广大兽医工作者的高度关注。作为免疫佐剂，中草药具有独特的优势，其卓越的双向调节功能和较小的毒副作用已得到世界医学界的普遍认可，中草药免疫佐剂将成为新世纪免疫增强剂研究的重点对象。鸡屎藤为茜草科植物毛鸡屎藤的全草，在民间（特别是少数民族地区）广泛应用，具消食健胃、益气补虚、止咳、止痛、清热解毒、祛风活血、行气解郁等功效，可通过熏蒸、内服等途径用于防治畜禽传染性或非传染性腹泻病，如食积停滞、消化不良、疳积、胃肠瘀痛、热毒疮疡等胃肠道疾病。鸡屎藤在常温下就有一种特殊气味，在贵州及四川一些偏远山区，常将鸡屎藤用作雏鸡垫料，用于预防雏鸡腹泻病，并且均取得了较好的预防效果。

首先，从鸡屎藤蒸馏物对免疫器官的直观分析看出，鸡屎藤蒸馏物具有促进雏鸡法氏囊、脾脏等免疫器官发育与增长的作用，说明鸡屎藤蒸馏物对机体免疫力增强具有显著的促进作用。鸡屎藤挥发油可以激活机体的肠粘膜免疫系统而激发机体粘膜免疫，本研究采用鸡屎藤蒸馏物滴鼻给药，作用靶位在机体呼吸系统粘膜，并激活了机体全身免疫系统，说明鸡屎藤蒸馏物对激活机体粘膜免疫具有普遍性意义，但其呼吸系统激活机制和途径有待进一步研究与证实。其次，已有研究表明，鸡屎藤富含氨基酸、蛋白质、维生素样物质等营养物质，可增加机体抵抗力和抗应激能力。但本研究直接采用鸡屎藤蒸馏物滴鼻，并且通过鸡屎藤蒸馏物对抗体水平作用效果的直观分析和抗体水平差异显著性比较可知，鸡屎藤蒸馏物具有明显提升机体抗体水平的作用，进一步说明了鸡屎藤蒸馏物对雏鸡免疫水平的提升作用具有重要的针对性作用，不仅仅只是通过其营养作用而实现其对机体免疫力的提升，其作用可能是通过其对免疫器官生长的促进作用和T淋巴细胞增殖的促进作用来实现的。第三，鸡屎藤蒸馏物对免疫器官及抗体水平的影响不具有剂量依赖性，中剂量和低剂量组作用效果更加明显，可能与鸡屎藤蒸馏物对肥大细胞等粘膜免疫细胞或者T淋巴细胞等免疫细胞的激活有关，仅需要适量剂量的鸡屎藤蒸馏物即可激活机体粘膜免疫系统，从而发挥其粘膜免疫作用。

综上所述，鸡屎藤蒸馏物具有重要的免疫佐剂作用，可以在鸡新城疫免疫时，配合鸡屎藤蒸馏物滴鼻给药，并表现出促进免疫器官发育与增长，提升机体免疫水平的作用，但其作用机理及其是否可以配伍其他疫苗使用，有待进一步研究。

（责任编辑 冯会利）