融水香鸭重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗二次免疫效果评估

韦 钰 蒙文娟 曾庆伦 刘佳佳 谢艳林 王 敏 蒋才淼 覃超林

广西融水苗族自治县动物疫病预防控制中心，广西融水 545300

禽流感是由A 型流感病毒感染引起的一种人畜共患病，其病毒变异快、传播快、范围广，已成为危害禽类与人类健康的重大动物疫病，临床上分为高致病性禽流感、低致病性禽流感和无致病性禽流感，其中高致病性禽流感造成的危害最为严重。禽流感一年四季都可发生，禽流感病毒也一直威胁家禽养殖业发展的安全，一旦暴发将会给养殖业造成巨大的经济损失，危害十分严重。禽流感毒株不断变异，当今危害世界各地的家禽禽流感主要由高致病性的H5 和H7 2 种亚型引起，做好疫苗免疫接种工作是防控禽流感的重要举措、也是主要手段。为了有效防控禽流感疫情的发生，2017年我国农业部推广使用重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗。融水香鸭是中国国家地理标志产品，肉鸭养殖周期为90～120日龄，周期较长，而禽流感往往一次免疫后免疫应答水平普遍偏低、免疫效果不理想。为了解这个新疫苗免疫效果情况，本文进行疫苗二次免疫后免疫抗体水平效果评估试验。

1 材料与方法

1.1 试验对象

选择在广西融水县融水镇存栏量分别为5 300、6 800、8 900、5 000 羽的4 个融水香鸭肉鸭养殖场，对应为试验A、B、C、D 场，均采用半放养+半圈养模式饲养。

1.2 试验疫苗

重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗（H5N1 Re-8 株+H7N9 H7-Re1 株）为青岛某生物工程有限公司生产，批号为171514501，有效日期为20180813，有效期1年。

1.3 检测试剂

哈尔滨维科生物技术有限公司生产的禽流感H5 亚型血凝标准抗原（Re-8 株）、批号2018007，禽流感H7 亚型血凝标准抗原（Re-1 株）、批号2018008，阳性血清H5、批号2018003，阳性血清H7、批号2018002。

1.4 试验方法与剂量

试验A、B、C、D 场分别于14、29日龄全场进行2 次重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗颈部皮下注射免疫接种、使用剂量分别为0.5、1.0 mL，并做好免疫接种后7 d 内免疫副反应的记录。

1.5 样品采集

为更好地评估免疫效果，试验A、B、C、D 每个场在45日龄（二次免疫后间隔21 d）、94日龄（二次免疫后间隔70 d）各采集60 份血样，再按照随机抽样原则，对试验A 场在59日龄（二次免疫后间隔35 d）、试验B 场73日龄（二次免疫后间隔49 d）、试验C 场87日龄（二次免疫后间隔63 d）、试验D场80日龄（二次免疫后间隔56 d）各采集60 份血样，并将采集到的血样进行血清分离待检。

1.6 抗体检测和结果判定

依据GB/T 18936-2003 高致病性禽流感诊断技术中血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验，分别对采集的血清进行禽流感病毒H5、H7 亚型免疫抗体检测。以完全抑制4 个单位HAU 抗原的血清最高稀释倍数作为HI 滴度；只有阴性对照孔血清滴度不大于2log2，阳性对照孔血清误差不超过1 个滴度，试验结果才有效；禽流感抗体血凝抑制试验（HI）抗体效价≥24（即4 log2）判定为合格，存栏禽群体免疫抗体合格率≥70%判定为合格。

2 结果与分析

2.1 免疫副反应观察

通过观察（表1），在首次免疫接种后有2 个融水香鸭养殖场出现了不同程度的副反应情况，主要表现为精神状态变差，采食量有一定下降，有个别鸭会出现死亡现象；二免有4 个养殖场都有死亡现象，但从解剖病理变化发现并不是疫苗免疫接种死亡，而是踩踏拥挤死亡。

2.2 二次免疫后固定抽样H5、H7 亚型免疫抗体检测

从表2可以看出，4 个试验场的融水香鸭在二次免疫接种后间隔21、70 d 所抽取的60 个样本检测H5 抗体、H7 亚型免疫抗体检测合格率均达90%以上（最低92.08%，最高100%），都远远超过农业农村部规定的70%免疫合格标准，且H5、H7 亚型免疫抗体平均效价大于6log2。试验结果表明，同一间隔时间、不同场地免疫效果差异不大，融水香鸭在二次免疫后抗体维持时间长，具有良好的免疫效果。

表1 免疫副反应观察情况

表2 二次免疫后固定抽样H5、H7 亚型免疫抗体检测结果

表3 二次免疫后随机抽样H5、H7 亚型免疫抗体检测结果

2.3 二次免疫后随机抽样H5、H7 亚型免疫抗体检测

从表3可以看出，4 个试验场的融水香鸭在二次免疫接种后间隔35、49、56、63 d 所抽取的60 个样本检测H5 抗体、H7 亚型免疫抗体检测合格率均达90%以上（最低93.33%，最高100%），都远远超过农业农村部规定的70%免疫合格标准，且H5、H7亚型免疫抗体平均效价大于7log2。试验结果表明，不同场地免疫效果差异不大，融水香鸭在二次免疫后抗体水平较为平稳，维持时间长，具有良好的免疫效果。

3 结 论

通过本次试验发现，重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗（H5N1 Re-8 株+H7N9 H7-Re1 株）免疫接种对融水香鸭的生长发育几乎没有影响，具有免疫副作用较小的特点，能够被广大养殖户所接受。融水香鸭在二次免疫间隔21～70 d 的随机抽样的几次检测结果，H5 抗体、H7 亚型免疫抗体合格率均在90%以上，且平均抗体效价高、维持时间长，免疫效果稳定，取得了很好的免疫效果[1-2]。不同场地的免疫效果差异不大，群体合格率100%，防疫质量总体较好，能较好地抵抗病毒的攻击。本次融水香鸭的二次免疫重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗表现出较好的免疫效果，在今后融水香鸭禽流感防疫工作中有一定的推广应用价值。