艾叶挥发油体外抗菌试验

李成贤 曹洪志

宜宾职业技术学院，四川宜宾 644003

艾叶是一种菊科多年生灌木状草本植物艾的叶片，是常用中药，因其具有药源丰富、价格低廉、副作用小、安全性高等特点而被广泛使用。目前，艾叶的应用采用汤剂、灸剂等传统剂型较多，艾叶挥发油为艾叶的主要有效成分。为了更好地开发艾叶新产品，本试验采用超声波萃取方式提取艾叶挥发油，探讨艾叶挥发油对大肠杆菌、鸡白痢沙门氏杆菌体外抑菌效果，为艾叶在临床上的抗菌作用提供一定的研究基础[1]。

1 材料与方法

1.1 材 料

1）宜宾职业技术学院畜牧兽医专业畜产品安全检测实验室提取的河南蕲艾艾叶挥发油。

2）选择供试菌种和培养基：大肠杆菌、鸡白痢沙门氏杆菌由宜宾职业技术学院畜牧兽医专业微生物实验室提供。

1.2 试验主要仪器

无菌工作室、电子天平、离心机、无菌移液枪、培养箱、高压蒸汽灭菌锅、酒精灯、培养皿、镊子、无菌滤纸、打孔机2-HOLE PUNCH、量筒、烧杯、直尺、剪刀、玻璃棒。

1.3 试验主要试剂

营养琼脂培养基、庆大霉素药敏纸片、氟苯尼考药敏纸片药片（杭州微生物试剂有限公司提供）。

1.4 试验方法

1）培养基及供试菌液的准备。制作供药敏试验用的营养琼脂培养基；分别用麦康凯琼脂培养基、HE 琼脂培养基及营养琼脂培养基对大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌进行复苏培养，并将复苏后的菌种接种营养肉汤于37 ℃振荡培养箱中进行4 h 增菌培养。

2）药敏试验。在无菌工作台上用灭菌移液管吸取菌液2 mL 到营养琼脂平板上，小心来回倾斜平板，使菌液均匀覆盖过平板表面，然后倾斜平板，用移液管吸去多余菌液。在平板中贴3 张彼此有一定间距的滤纸纸片（Φ：5 mm），使3 张纸片的连线接近等边三角形，然后在每张纸片中央用微量移液器加上等量艾叶提取物，置37 ℃恒温培养箱中培养（每种菌做6 个梯度，每个梯度做3 个重复，并做相应对照，详见表1）。

2 结果与分析

培养结束后，用直尺测定大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌在加入艾叶提取物后抑菌圈的大小。

2.1 不同浓度艾叶提取物对大肠杆菌组抑菌作用的影响

从表2可以看出，大肠杆菌组抑菌圈大小随艾叶提取物浓度的增加，抑菌圈呈增大的趋势，5.00 μL/L 组抑菌圈大小平均为1.20 cm，2.50 μL/L 组抑菌圈大小平均为0.90 cm、1.25 μL/L 组抑菌圈大小平均为0.73 cm、0.60 μL/L 组抑菌圈大小平均为0.60 cm，空白、0.30、0.15 μL/L 组均未见抑菌圈，说明艾叶提取物抑菌效果随浓度增加抑菌效果越明显，量少没有抑菌作用。与对照组中氟苯尼考抑菌圈（3.96 cm）、庆大霉素抑菌圈（2.13 cm）相比，5.00 μL/L 艾叶提取物抑菌的效果较弱。

2.2 不同浓度艾叶提取物对鸡白痢沙门氏菌抑菌作用的影响

从表3可以看出，鸡白痢沙门氏菌组抑菌圈大小随艾叶提取物浓度的增加，抑菌圈呈增大的趋势，5.00 μL/L 组抑菌圈大小平均为0.90 cm，2.50 μL/L组抑菌圈大小平均为0.70 cm，1.25 μL/L 组、0.60 μL/L组、空白、0.30 μL/L 组、0.15 μL/L 组均未见抑菌圈，说明艾叶提取物抑菌效果随浓度增加抑菌效果越明显，量少没有抑菌作用。与对照组中氟苯尼考抑菌圈（0.73 cm）相比，5.00 μL/L 组抑菌效果较好，氟苯尼考抑菌圈大小同2.50 μL/L 组相当。与庆大霉素抑菌圈（2.13 cm）相比，5.00 μL/L 艾叶提取物抑菌的效果较弱。

2.3 相同浓度的艾叶提取物对不同菌种的抑菌作用

艾叶提取物5.00、2.50、1.25 μL/L 对大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌2 种菌抑菌圈大小可见图1～图3。从图中可以看出，艾叶提取物5.00、2.50 μL/L对大肠杆菌的作用较好、对鸡白痢沙门氏菌次之。艾叶提取物1.25 μL/L 对鸡白痢沙门氏菌没有抑菌作用。

图1 艾叶提取物5.00 μL/L 组对2 种菌的抑菌作用

表1 药敏试验处理

表2 大肠杆菌组抑菌圈大小

表3 鸡白痢沙门氏菌组抑菌圈大小

图2 艾叶提取物2.50 μL/L 组对2 种菌的抑菌作用

图3 艾叶提取物1.25 μL/L 组对2 种菌的抑菌作用

2.4 对照组对不同菌种的抑菌作用

试验过程中，大肠杆菌组、鸡白痢沙门氏菌组选择氟苯尼考和庆大霉素作对照，从图4可以看出，氟苯尼考对大肠杆菌的作用较鸡白痢沙门氏菌强；庆大霉素对大肠杆菌和鸡白痢沙门氏菌作用相当；氟苯尼考对大肠杆菌的作用比庆大霉素好，庆大霉素对鸡白痢沙门氏菌比氟苯尼考好。

图4 对照组对2 种菌的抑菌作用

3 讨 论

艾叶挥发油为艾叶的主要有效成分，研究发现，艾叶在体外对炭疽杆菌、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、白喉杆菌、肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌等均有抑制作用。李建明等[2]研究证实，艾叶提取物对黄瓜的保鲜作用有良好的抑菌效果。Ahameethuni-sa 等[3]研究发现，艾草提取物对大肠杆菌有抑制效果，而对金黄色葡萄球菌和粪肠球菌没有作用。运用超声波法提取艾叶的有效成分，能够对常见病原菌金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和大肠杆菌有较好的抑菌效果[4-5]。刘巍等[6]将艾叶用水提取，用其水提取液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎双球菌、表皮葡萄球菌、白色念珠菌的体外抗菌效果进行试验研究，结果证明艾叶水煎液对这5 种致病菌均有明显的抗菌作用。游思湘等[1]2011年采用水蒸汽蒸馏提取艾叶挥发油，得到淡黄色艾叶挥发油，提取率为0.65%。体外抑菌试验结果表明，艾叶挥发油对炭疽杆菌抑制作用最强，对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌也有较强的抑菌作用，但对巴氏杆菌、链球菌、沙门氏菌的抑菌效果不明显；卢学根[7]以自来水作溶剂得到艾叶提取液，该提取液对细菌的抑制效果较好，尤其对金黄色葡萄球菌的效果最好，对酵母菌的效果一般，对霉菌的效果不明显。此外，该提取液MIC 为50%，在酸性环境中（pH 3～6）作用较好，但热稳定性不好，经90 ℃以上、15 min 处理其抑菌作用不明显。

本试验也证实艾叶挥发性提取物体外对大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌均有抑菌作用，提取物浓度越高，抑菌作用越明显。但与庆大霉素、氟苯尼考对大肠杆菌和鸡白痢沙门氏菌抑菌作用相比，最大浓度5.00 μL/L 组的效果均不如庆大霉素、氟苯尼考的效果好。

4 小 结

本试验对艾叶提取物抑菌作用进行研究，艾叶提取物对大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌均有抑菌作用，对大肠杆菌的效果比对鸡白痢沙门氏菌效果好。5.00 μL/L 组效果最好、2.50 μL/L 组次之，1.25、0.60 μL/L 组对大肠杆菌有抑菌作用，但对鸡白痢沙门氏菌无抑菌作用，0.60 μL/L 以下浓度对大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌均无抑菌作用。提取物浓度越高，抑菌作用越明显，低浓度无抑菌作用。