食用蚂蚁液相指纹图谱研究

吴娜　柯敏清　杨新周

摘 要： 采用高效液相色谱法建立食用蚂蚁指纹图谱，考察提取方法、提取溶剂和高效液相色谱的流动相、流动相比例、检测波长、柱温等因素对蚂蚁指纹图谱的影响，建立了东北黑蚂蚁、长白山红蚂蚁和永德黄蚂蚁三个地区特色食用蚂蚁的高效液相色谱指纹图谱。通过实验得出，实验最佳条件为：以甲醇作为提取溶剂，回流提取2 h，色谱柱（岛津Shim-pack XR-ODSⅢ， 2.0mmi.d.×150 mm，2.2 μm），流速：0.2 mL/min;流动相：甲醇， 0.02%磷酸;柱温35℃;检测波长：254 nm;进样量10 μL。实验结果表明：通过对三个不同地区食用蚂蚁高效液相色谱指纹图谱分析，其相似度差异较大，可以鉴别出不同产地的食用蚂蚁。

关键词： 食用蚂蚁;指纹图谱;高效液相色谱

蚂蚁是人们最熟悉和常见的昆虫之一，数量庞大，分布广泛。全世界有15000种，我国大约有2000种，具有较大食用、药用价值的蚂蚁主要有：拟黑多刺蚁、双齿多刺蚁、黄猄蚁、黄蚁、日本木工蚁、北方蚁、横纹猛蚁、巨头切叶蚁、红尾猛蚁、双隆骨铺道蚁等，大多属蚁亚科种类。

国内外很多研究资料表明，食用蚂蚁营养价值很高。蚂蚁体内含有大量氨基酸、蛋白质、维生素和微量元素，且具有多种保健功能，如抗炎、平喘、护肝、增强人体免疫力等作用。蚂蚁中含有20多种氨基酸，其中异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、色氨酸等含量较高，且属于人体必需氨基酸。蚂蚁中还含有铁、钙、锌、锰、硒、铜等十几种微量元素，其中锌、锰、硒的含量合理，极易被人体吸收。

随着新资源食品推广，人们逐渐认识到食用蚂蚁的功效及保健作用，越来越多食用蚂蚁走向市场，许多不良商家为赚取利润开始以次充好;但目前对食用蚂蚁质量控制方面的具体标准还有很大空缺，建立指纹图谱进行质量控制方面的研究较少。文中利用高效液相色谱仪建立食用蚂蚁的液相指纹图谱，对食用蚂蚁的质量控制提供参考的基础。

1 实验部分

1.1 主要材料

本实验所采用的样品是东北黑蚂蚁（聚源山珍东北特产店）、长白山红蚂蚁（延边曦宝土特产销售有限公司）和永德黄蚂蚁。

1.2 仪器和试剂

超高效液相色谱仪（LC-20A，日本岛津公司）;电子分析天平（CP224C，奥豪斯仪器有限公司）;旋转蒸发仪（EYELAOSB-2100，上海和杰科技有限公司）;甲醇（GR，赛默飞世尔科技有限公司）;乙腈（GR，上海斯信生物科技有限公司）;磷酸（GR，山东西亚化学股份有限公司）。

1.3 高效液相色谱条件

紫外检测器（SPD-20A），色谱柱（岛津Shim-pack XR-ODSⅢ，2.0mmi.d.×150 mm，2.2 μm），流速：0.2 mL/min;流动相：A相甲醇，B相0.02%磷酸;柱温35℃;检测波长：254 nm;进样量10 μL。

洗脱程序：0 min（98磷酸/0.02%+2甲醇）;10min（95磷酸/0.02%+5甲醇）;15min（85磷酸/0.02%+15甲醇）;30min（（65磷酸/0.02%+35甲醇）;45min（65磷酸/0.02%+35甲醇）.

1.4 样品溶液的制备及测定

准确称取5.00 g蚂蚁样品，充分研碎，转移至250 mL长颈圆底烧瓶中，加入100 mL75%甲醇提取溶剂，加热回流提取2 h，待液体冷却过滤，浓缩，用75%甲醇定容至5mL，过0.45 μm有机滤膜过滤，得样品液，备用。将待测样品于HPLC测定。

2 结果与讨论

2.1 提取方法选择

本实验讨论了索氏提取和直接回流提取两种提取方式，索氏提取法HPLC色谱图。通过色谱图对比发现，索氏提取与直接回流提取相比，直接回流提取方式色谱明显，峰面积大，峰型相比较优，所以选用直接回流提取作为实验提取方法。

2.2 提取溶剂的选择

本实验分别比较了甲醇和乙醇两个极性较大的溶剂作为提取剂对样品的提取效果影响比较，甲醇、乙醇皆为大极性溶剂，与其他溶剂相比可提取出较多不可挥发性物质，通过实验得出甲醇作为提取溶剂基线较稳，峰型好，出峰效果较优，所以选用甲醇作为提取溶剂。

2.3 流动相的选择

取同一试样，分别采用乙腈（A相）-磷酸（B相）、甲醇（A相）-0.1%磷酸（B相）、甲醇（A相）-0.02%磷酸（B相）等流动相系统对食用蚂蚁进行了实验探究，经过实验研究，采用磷酸-甲醇流动体系比磷酸-乙腈流动相体系出峰多，峰型好，且甲醇-0.02%磷酸的基线比甲醇-0.1%磷酸基线稳定，所以采用甲醇-0.02%磷酸作为流动相。

2.4 波长的选择

选择同一编号样品，在同一洗脱程序下分别比较了205 nm，210 nm，254 nm，295 nm波长下的色谱图，实验结果表明，在254 nm波长下的HPLC色谱图基线稳定，出峰效果较好，所以选择254 nm作为检测波长。

2.5 柱温的选择

选择同一编号样品，在同一洗脱程序下分别比较在25℃、30℃、35℃、40℃不同柱温下的HPLC指纹图谱，通过以上四个不同柱温下的实验结果比较可得：在35℃下的HPLC图谱基线稳，峰面积大，出峰效果好，所以选择35℃作为检测柱温。

2.6 食用蚂蚁HPLC指纹图谱的建立

在1.2高效液相色谱条件条件下对东北黑蚂蚁（S1），长白山红蚂蚁（S2），永德黄蚂蚁（S3）建立指纹图谱，通过相似度评价进行指纹图谱分析。样品参照HPLC指纹图谱见图3-15，不同地区样品HPLC指纹图谱见图1。

2.7 食用蚂蚁HPLC指纹图谱相似度比较分析

将不同地区样品建立指纹图谱，以东北黑蚂蚁（S1）样品为参照，作相似度比较分析，不同地区HPLC样品相似度比较结果见表1。

从图1中可以得出，三个地区的蚂蚁差异较大，东北黑蚂蚁主要色谱峰保留时间为：1.9 min，2.5 min，4.5 min，35.3 min，37.8 min;长白山红蚂蚁主要色谱峰保留时间为：3.6 min，5.9 min，6.9 min，32 min，44.5 min;永德黃蚂蚁主要色谱峰保留时间为：5.9 min，14.8 min，17.5 min，20.9 min，26.3min。经过相似度分析，其对照指纹图谱相似度在0.0257～0.899之间，三者差异明显，说明用HPLC能有效鉴别这三个地区的蚂蚁。

3 结论

通过实验得出，食用蚂蚁指纹图谱最佳条件为：以甲醇作为提取溶剂，回流提取2 h，色谱柱（岛津Shim-pack XR-ODSⅢ， 2.0mmi.d.×150 mm，2.2 μm），流速：0.2 mL/min;流动相：甲醇， 0.02%磷酸;柱温35℃;检测波长：254 nm;进样量10 μL。在最佳条件下建立了不同地区食用蚂蚁高效液相色谱指纹图谱分析，通过分析其相似度差异较大，可以鉴别出不同产地的食用蚂蚁。

参考文献

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