胡波涛,周国燕,彭艳伶,宁瑶,赵秋云
(1.凉山健牧动物科学研究所,四川 西昌 615000;2.四川省凉山州畜牧兽医科学研究所,四川 西昌 615000;3.四川省西昌市动物疫病预防控制中心,四川 西昌 615000)
猪圆环病毒(PCV)是圆环病毒科圆环病毒属,为无囊膜单股环状负链DNA 病毒[1],分为PCV1、PCV2和PCV3共3种血清型[1]。PCV1为猪体内常在无致病性病原体[2]。PCV3为新发病原,在2016年从患有皮炎肾病综合征(PDNS)和繁殖障碍的母猪及流产胎儿体内首次鉴定得出[3]。PCV2 感染与断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎与肾病综合征(PRDC)、繁殖障碍(PRFD)和急性肺水肿(APE)等疾病的发生密切相关[1],这类病称为猪圆环病毒相关疾病(PCVAD),严重危害生猪健康。当前控制PCV2感染和流行的方法主要是应用灭活疫苗和基因工程疫苗进行免疫接种,而近几年国内外研究发现,疫苗免疫后的猪场会大量出现并流行PCV2基因亚型毒株,这给由PCV2 诱发的猪传染病的防控带来新的挑战。笔者于2019 年6~10 月在四川省西昌市进行了PCV2 感染情况调查,旨在为西昌市猪传染病的防控提供科学依据。
1.1 调查对象 本次调查对象为西昌市年出栏育肥猪100 头及以上的猪场,其中年出栏量超1 000头的猪场8个,年出栏量在500~1 000头的猪场16 个,年出栏量低于500 头的猪场8 个。将出栏1 000 头以上的猪场定为A 类猪场,出栏500~1 000头的猪场定为B类猪场,出栏低于500头的猪场定为C 类猪场。分别统计接种了PCV疫苗与未接种PCV 疫苗猪群的猪圆环病毒II 型的感染情况。
1.2 样本采集 2019 年6~10 月,对西昌市10个乡镇32 家养猪场的800 头猪通过前腔静脉采血的方式采集抗凝血(5 mL/头)。因养殖场具体情况差异较大,采集标本数略有差异。其中能繁母猪200 份,每个场采集10 份;育肥猪200 份,每个场采集5~20份;30日龄左右断奶仔猪400份,每个场采集5~20份。所有样本标记清楚采集时间和地点,置于2~8 ℃保存备用。
1.3 检测试剂盒 病毒基因组DNA 提取试剂盒和猪圆环病毒II型荧光PCR检测试剂盒,均购自青岛立见诊断技术发展中心。
1.4 方法 根据GB/T 21674-2008标准,参照试剂盒说明书进行样品处理和核酸提取,将提取好的DNA 检测合格后,置于-20 ℃保存备用。根据猪圆环病毒II 型荧光PCR 检测试剂盒说明书的方法配制荧光PCR 反应体系(吸取18 μL PCV2 qPCR Buffer 与PCV2 qPCR mix 进行复溶,然后加入2 μL 样品DNA),同时按照猪圆环病毒II 型荧光PCR 检测试剂盒的反应程序进行设置(94 ℃预变性3 min;94 ℃变性10 s,60 ℃退火30 s,共40 个循环;60 ℃收集FAM 荧光信号)。以上实验委托成都纳比微特检测技术服务有限公司检测。
2.1 不同规模养殖场的PCV2 感染状况 本次检测查明了西昌市各类猪场感染PCV2 的情况。结果见表1。
表1 各类养殖场PCV2核酸检测结果 份
由表1 可知,西昌市小型养猪场均存在不同程度的PCV2 感染,不同规模场的带毒状况差异很大,A 类场感染率为42.17%,B 类场感染率为69.52%,C类场感染率达79.61%。可见该病毒的感染情况与养殖场的饲养管理和生物安全防控水平密切相关。本次检测未发现PCV2阴性场,各饲养阶段猪群的PCV2 感染率达61.5%~70.0%,表明各场的PCV2带毒情况都比较严重。
2.2 接种PCV疫苗与未接种PCV疫苗猪群的抗原检测结果 检测发现,接种猪圆环疫苗与未接种猪圆环疫苗猪群的PCV2 感染率差异极大,详见表2。
由表2可知,进行疫苗免疫的猪群感染PCV2的几率大大降低,接种猪圆环疫苗的能繁母猪、仔猪和育肥猪的感染率为36.61%、31.00%、25.00%,而未接种猪圆环疫苗的能繁母猪、仔猪和育肥猪的感染率上升到82.94%、92.00%、89.28%,表明猪圆环疫苗能够在一定程度上提高猪群的免疫力,降低猪群的感染率。本次调查还发现西昌市内小型猪场圆环病毒疫苗的保护率普遍偏低,可能是由于疫苗毒株本身的基因亚型与部分猪场PCV2 感染情况不完全相符,也有可能是与部分猪场的免疫程序实施不到位、未能确保免疫效果等原因有关,有待通过进一步的试验查明。
表2 接种猪圆环疫苗与未接种猪圆环疫苗猪群的抗原检测结果 份
本次检测表明,西昌市中小猪场的PCV2 带毒严重,感染普遍。若不实施有效防控,极有可能导致猪圆环病毒病的广泛流行。常态化做好猪场PCV2的定期检测,查明其感染情况,据此实施PCV2 综合防控十分必要。若有条件,可采用基因检测进一步查明本地区流行毒株的基因类型,选择相应疫苗进行免疫接种,达到有效防制本病的目的。
猪圆环病毒不仅可直接导致猪群发病,而且会导致猪群发生免疫抑制,降低其免疫抵抗力,引起猪群易发、多发其他疾病。猪场传染病的混合感染常常同PCV2密切相关。猪圆环病毒病目前尚无特效治疗药物,因此做好猪圆环病毒病的免疫预防,加强养猪场的生物安全管理和饲养管理就显得尤为重要。