成都市2019年猪O型口蹄疫免疫抗体监测与分析

李俐睿，李敏，周潇潇，李桂黎，岳建国，张定

（四川省成都市动物疫病预防控制中心，四川 成都 610041）

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。主要感染牛、猪等偶蹄类动物，主要临床特征为成年动物的口舌黏膜、皮肤、蹄部形成糜烂、溃疡病灶，幼龄动物多因心肌炎而致死亡率升高。该病对生猪养殖业的危害极大，我国将其列为一类疫病，在《2017年国家动物疫病强制免疫计划》文件中口蹄疫继续作为强制免疫的病种。

为做好重大动物疫病的防疫工作，成都市于2019 年春秋两季为管辖的15 个区（市）县发放了猪O型口蹄疫疫苗，并进行集中免疫。为及时评估免疫效果，我们对所有发放该疫苗的区（市）县的部分规模化养猪场、散养户和屠宰厂的猪只进行血清样品采集和疫抗体水平监测。现报告如下：

1 材料

1.1 检测试剂 猪O 型口蹄疫病毒抗体检测ELISA试剂盒，无锡优联生物科技有限公司生产，批号：190403。

1.2 样品 血清样品采集自成都市管辖的15个区（市）县的规模化猪场、散养户和屠宰厂，共计1 980份样品。

2 方法

2.1 检测准备

2.1.1 在使用前，所有的试剂盒组分都必须恢复到室温（20～25 ℃）。

2.1.2 洗涤液稀释：使用前，20倍洗涤液应摇动至沉淀的盐溶解（最好在不超过40 ℃水中加热5～10 min），然后用蒸馏水或去离子水作20 倍稀释（如：50mL的20倍洗涤液加入950mL蒸馏水中）。

血清样品稀释：在血清稀释板中按1∶40稀释（如：195 μL样品稀释液中加5 μL待检血清）。

对照血清稀释：在血清稀释板中按1∶4 稀释（如：180 μL样品稀释液中加60 μL对照血清）。

2.2 操作步骤

2.2.1 根据检测样品数量取出对应的检测板条，每孔加入稀释好的工作洗涤液200 μL，重复洗板2次，最后一次在吸水材料上拍干。

2.2.2 将稀释好的待检血清、阴性对照和阳性对照各取100 μL 加至抗原包被板中，待检血清设1孔，阴性、阳性对照血清各设2孔。轻轻摇匀孔中样品，置37 ℃温育30 min。

2.2.3 甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀释好的工作洗涤液200 μL，甩掉板孔中的溶液，最后一次在吸水材料上用力扣板，尽可能不要有残留液体，共计洗涤5次。

2.2.4 每孔中加酶标抗体100 μL，置于37 ℃温育30 min。

2.2.5 甩掉板孔中的溶液，洗涤5次，洗涤方法同2.2.3。

2.2.6 每孔加显色液A 50 μL，再加显色液B 50 μL，室温（20～25 ℃）避光反应10 min。

2.2.7 每孔加终止液50 μL，10 min 内测定结果（测定前在震荡器上轻轻震动一下）。

2.3 结果判定 在酶标仪上用630 nm 波长测各孔吸光OD值（650 nm波长也可以）。

2.3.1 成立条件 阳性对照平均OD630nm值与阴性对照平均OD630nm值之差＞0.5。

2.3.2 计算公式 S/P＝样品OD630nm值÷阳性对照孔平均OD630nm值

2.3.3 阴、阳性判定 如果S/P≥0.20，样品判为阳性；如果S/P＜0.20，样品判为阴性。

3 结果

3.1 共检测免疫猪O 型口蹄疫血清样品1 980份，合格1 752 份，平均合格率为88.48%。详见表1。

3.2 在435份规模场猪血清中，合格407份，平均合格率为93.56%。

3.3 在735份散养户猪血清中，合格653份，平均合格率为88.84%。

3.4 在810份屠宰厂猪血清中，合格692份，平均合格率为85.43%。

4 分析讨论

4.1 口蹄疫的日常预防 口蹄疫病毒具备高度传染性，环境适应性强，在生猪排泄物和分泌物中能长时间生存，在高温和低温环境中依旧具备感染性，但对于酸碱性环境的适应比较差［2］。因此在饲养过程中，需要注意保持圈舍卫生，及时清理粪便，并定期对场内公共环境和圈舍使用过氧乙酸或烧碱等酸碱溶液进行消毒处理。

4.2 疫苗免疫 目前，猪O型口蹄疫是成都地区要求强制免疫的血清型。养殖中疫苗的预防接种并不是接种次数越多越好，需先做好流行病学调查，摸清本地流行的血清型毒株，再制定科学的免疫程序。在全国其他地区，猪口蹄疫病毒毒株从O型到多种毒株型不等，比如A型病毒暴发的概率正在增加。猪口蹄疫变种病毒增多，口蹄疫灭活疫苗的类型随之增多［3］，因此做好本地疫病的流行病学调查十分重要。

不同饲养阶段的猪群，其免疫效果也存在较大的差距。黄宝学等［4］研究发现，母猪的O 型口蹄疫免疫抗体合格率最高，这可能与常年的春秋集中反复免疫有关，其后依次为仔猪、公猪、后备猪、育肥猪和保育猪。保育猪在断奶后母源抗体逐渐消失，在集中免疫后效果也不好，因此保育猪就成为了口蹄疫抗体水平较低、抗病力最薄弱的猪群，此时做好加强免疫十分重要。同时需要注意的是，部分母源抗体水平较高的仔猪进行首免后，其抗体水平因疫苗的干扰也有可能会暂时下降［5-6］，这时不能盲目地做加强免疫，而是注重饲养管理，控制好环境温度，在饲料及饮水中添加黄芪多糖等预防药物，以提升猪群非特异性免疫能力，避免应激，防止继发感染［7-8］。

5 结论

本研究对1 980 份不同来源的猪血清O 型口蹄疫病毒抗体进行了检测，其中检出阳性1 752份，平均合格率为88.48%。达到了O型口蹄疫免疫抗体平均合格率70%以上的标准，符合农业农村部规定的要求，在临床上能对猪群产生相应的免疫保护作用，表明成都市在2019年对猪O型口蹄疫的强制免疫工作达到了预期的效果。同时从表1 可以看出，规模场的免疫效果明显好于散养户。这与规模场的规范化养殖、疫苗的规范化保存、制定科学的免疫程序以及专业防疫人员的免疫操作水平有一定的关系。若发生口蹄疫，散养户是最危险的薄弱环节，对整个地区的疫病防控具有严重的潜在威胁［1］。

表1 2019年成都市猪O型口蹄疫免疫抗体检测结果

本次检测成都市15 个区县的1 980 份猪血清样品中，虽然猪O型口蹄疫病毒抗体的平均合格率都在80%以上，但还是有少量不合格的免疫猪群。鉴于口蹄疫病毒的高度接触性和对养殖业的巨大危害，仍需要积极探讨在饲养和防疫过程中出现的各种问题，县级相关部门要做好本区域的流行病学调查，科学地开展防疫工作。同时，散养户作为常态化的防控薄弱环节应重点关注，这就要加强基层防疫员的管理和定期培训。在春秋集中免疫工作中，由于基层防疫员免疫注射工作量大，可能会出现疫苗保存是否妥当，免疫时是否按最新的程序操作，养殖户补栏后补免工作是否跟进等问题，县级相关部门应定期组织基层防疫员和养殖户培训学习，强化规范免疫意识，从而保障成都地区生猪生产的健康发展。