206 例非典型地中海贫血HBB 基因测序发现多种非热点突变

2020-06-19 02:29陈一君韦丽丽唐兰艳
世界最新医学信息文摘 2020年37期
关键词:珠蛋白非典型类别

陈一君,韦丽丽,唐兰艳

(广西壮族自治区生殖医院,广西 钦州 530021)

0 引言

地中海贫血又称珠蛋白生成障碍性贫血,非典型地中海贫血则是指患者病情表现与地中海贫血相似、但病理变化存在差异且缺乏普遍性的疾病症状。非典型地中海贫血对患者生活存在明显影响,亦可恶化引发其他疾病,临床主张给予对症治疗,这对疾病的诊疗技术提出了较高要求[1]。此前学者分析指出,常规基于热点突变进行分析研究,难以完全满足所有患者的治疗需要,针对基因进行的非热点突变评估,能够弥补常规诊疗技术的不足,提升工作效果,其典型方式之一为HBB 基因测序[2]。为获取可行的工作方法,了解非典型地中海贫血HBB 基因测序作用以及非热点突变的基本态势,选取我院收治的206 例非典型地中海贫血患者,进行研究如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料。于我院2012 年1 月至2019 年1 月收治的非典型地中海贫血患者中,选取206 例作为对象,包括男104例,女102 例;年龄11-63 岁,平均(40.3±8.6)岁。研究经伦理委员会批准,患者和家属知情同意,签署知情同意书。纳入标准:患者临床符合《地中海贫血诊疗指南》(2012)中的疾病描述标准(红细胞体积不大于79 fl、红细胞蛋白浓度不小于300 g/L、红细胞血红蛋白含量不大于28 pg)。排除标准:患者合并其他血液系统疾病;患者合并出血性疾病;患者合并血液再生类疾病。

1.2 方法。取EDTA-K2 抗凝静脉血2 mL,借助PCR-反向斑点杂交法进行分析。去除特异性较高的患者,将检测结果中,HbA2 分布处于2.5%-3.5%之间的患者筛出,进行二次分析。取探针,点触硝酸纤维素膜,对所有探针进行编号,对待测血液样本进行PCR 特意性扩增,对生物素进行标记。使完成编号的探针与待测血液样本进行杂交。获取具有同源序列特点的样本,进行编号和记录。对未完成结合的血液样本进行洗涤处理,同步对上述所有样本进行液相显色分析,统计非热点突变的发生率和类别、占比[3]。

1.3 观察指标。借助PCR-反向斑点杂交法进行血红蛋白基因突变率统计,了解常见突变类型、占比情况。

2 结果

2.1 非热点突变患者数。HbA2 分布处于2.5%-3.5%之间的患者共92 例,占比44.66%(92/206)。HBB 基因测序见非热点突变27 例,占比29.35%(27/92),详见表1。

表1 非热点突变患者数[n(%)]

2.2 非热点突变类别和占比。非热点突变类别包括多个类型,占比也有所不同,见表2。

表2 非热点突变类别和占比[n(%)]

3 讨论

非典型地中海贫血一般纳入地中海贫血的分析范畴,患者病情相对特殊,因此治疗又需要强调针对性,对诊断和疾病分析能力提出了较高要求。此前学者研究发现,非典型地中海贫血基因热点突变总数相对较多,达到70%左右,非热点突变的发生率在30%左右[4]。我院研究结果与此相似,共27 例非典型地中海贫血患者符合非热点突变标准,占比29.35%。非热点突变类别方面,

我院研究中,因选例较少,共发现7 大类突变,第七类中又包括三个小类,均为1 例。其他非热点突变中,c.341T>A(p.Va114Glu)、c.170G>A(p.Gly57Asp)、c.68A>G(p.Glu23Gly)占比较大,分别为25.93%、18.52%、18.52%。进一步对相关信息进行评估,可发现上述各类患者接受HBB 基因测序时,均可见不同程度的血糖蛋白异常,从病理变化的角度上看,非典型地中海贫血患者的基因是否出现突变,直接影响其珠蛋白链的分子结构,换言之,所有非典型地中海贫血患者均可见血红蛋白的异常[4]。

在HBB 基因测序中,可发现非典型地中海贫血患者自双目双方继承的α 珠蛋白基因均为2 个,其排列特点为αα/αα;β 珠蛋白基因均为1 个,其排列特点为β/β,上述任何珠蛋白基因出现突变,均可影响数目庞大的机体细胞连锁反应,导致部分蛋白链缺失问题,其中较为多见的为单方α 珠蛋白基因缺陷,其次为双方α 珠蛋白基因缺陷,单方β 珠蛋白基因缺陷、双方β 珠蛋白基因缺陷以及其他珠蛋白基因出现缺陷的可能性较低,具体表现为α 型、β 型、δβ 型和δ 型等等。接受HBB 基因测序的过程中,液相显色、气相显色均强调对基因排列缺陷的捕捉,每一类缺陷在基因层面均有不同呈现[5]。

因β 型珠蛋白基因缺陷导致的非典型地中海贫血患者,在HBB 基因测序中,可见c.341T>A(p.Va114Glu)、c.170G>A(p.Gly57Asp)、c.68A>G(p.Glu23Gly)等非热点突变,提示在基因遗传过程中,父母双方或单方基因出现了较常规地中海贫血更复杂的变化,也可能与胎儿发育过程中母体因素的异常相关。上述病变往往可见分子层面的多样变化,且病理变化过程复杂多样,可能出现的不同突变态势超过100种,少数患者亦可因此出现基因完全缺失情况。部分患者见c.22G>A(p.Glu8Lys)、c.75C>G、c.50G>A(p.Gly17Asp)和其他非热点突变,一般认为与α 珠蛋白生成障碍存在关联,大部分患者可见α 珠蛋白基因的缺陷,极少数患者可见α珠蛋白基因缺失,提示患者可能存在基因点突变情况[6]。

综上所述,非典型地中海贫血HBB 基因测序可发现非热点突变信息,类别较多且多与血红蛋白变异存在直接关联。后续工作中,可针对血红蛋白变异情况进行非典型地中海贫血病情分析,结合分析结果给予对症干预。

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