HPLC法测定消疤酊中芍药苷的含量

陈 亚，吕紫璇，谢 甜

（重庆市涪陵食品药品检验所，重庆 408000）

消疤酊具有活血消肿，散结化疲。用于烧伤后形成疤痕者。其处方由花粉、益母草、当归、赤芍、党参、炮山甲、黄芪、甘草、红花、桃仁、乳香、没药、羌活、蝉衣、地龙、秦艽等组成。处方中赤芍具有清热凉血，散瘀止痛的功效，其主要有效成分为芍药苷。消疤酊现行质量标准中仅有化学反应鉴别及薄层色谱法鉴别，无含量测定项，其专属性及质量可控性差。笔者在检测该成分的含量时选择了高效液相色谱法[1-4]。该方案简捷、精准、重复性优良，控制消疤酊的质量效果显著。

1 设备与试剂

高效液相色谱仪（型号为LC-20A）；电子天平（型号为Sartorius-ME235S）；芍药苷对照品（中检院，批号110736-201842，含量97.4%）；消疤酊（重庆化工厂化工烧伤医院，批号分别为160620，160911，161205）。试剂：色谱级甲醇，超纯水，分析纯磷酸二氢钾。

2 方案与结论

2.1 色谱环境

色谱柱：Agilent Eclipse XDB C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（40:60）；流动速度1.0 mL/min；测试波长230 nm；柱温25℃。进样量：10 μL。

2.2 溶液准备

称量芍药苷对照品（含量97.4%计）10.22 mg，用甲醇溶解并稀释至100 mL，得质量浓度为0.0995 mg/ml的溶液，即得对照品溶液。取本品5 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得供试品溶液。取阴性样本，依据前述的制作方法获得阴性对比溶液。

2.3 方法学考查

（1）系统适用性检测：挑选2.2项中的3种溶液，按制定色谱环境加以检测。结论:阴性对比溶液在和对照溶液色谱峰相同保留时间处没有显露吸收峰，表征处方里另外成分无法影响检测。如图1。

（2）线性关系考察;精准称量芍药苷对照品（比重97.4%计）18.48 mg，利用甲醇完全溶解，同时定容在容积为100 mL量瓶中，获得的母液质量浓度等于0.1800 mg/ml，精准量出1.0 ml母液；定容在容积是5 ml、10 ml、25 ml、50 ml、100 ml的量瓶中，其质量浓度各等于36；18；7.2；3.6；芍药苷对比试剂1.8 μg/ml，各量出上文试剂10 μl注射到液相色谱仪，设定质量浓度是横坐标（x）,设定峰面积是纵坐标（y），线性回归算出方程是：y=12768，x-12096，r=0.9997，证时芍药苷质量浓度大于1.8，且小于180.0μg/ml，线性关系可观。

图1 高效液相色谱图（1）阴性对比溶液；（2）对照液；（3）供试品溶液

精密度检验：量出2.1制备的对照液，参照2.3色谱环境反复进6次，结论:峰面积RSD值等于0.53%（n=6),证实仪器精准性可观。

重复性检验：精准量出批号均是160620的试样，参照供试品制法制得6组供试液，加以检测，结论:峰面积的RSD值等于0.79%(n=6),证实重复性可观。

稳定性检验：量出相同供试液，制得后0,2,4,8,12,24 h进样。结论：峰面积的RSD值等于0.96%(n=6)，证实供试品试剂在24h内稳定。

加样回收检验：量出含量已知、批号是160620的样液6组，精准添加浓度等于0.1800mg/m的芍药苷对照液，参照供试液制得溶液并检测，得出回收率,结论:芍药苷回收率平均值 98.96%，RSD%等于0.69%；结论如表1。

表1 芍药苷加样回收检测结论（n=6）

2.4 试样检测

量出3组消疤酊试样以2 2项中方式制得对照和供试液，以2.1项中色谱环境检测，将峰面积值记下，算出每种供试品芍药苷的含量，结论如表2。

表2 试样含量检测结论(n=6)

3 讨 论

根据《中国药典》2015年版一部“赤芍”项中的含量检测方式，故挑选甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（40:60）为流动相，实验结果表明该流动相可有效分离芍药苷与其他杂质峰。

该实验选择的分析方式简捷，结果精准无误，专业，重现性客观，可用于控制该制剂的质量。