HPLC-CAD法测定薏苡仁中的甘油三油酸酯

冯永巍，邹 凤

无锡市食品安全检验检测中心 (无锡 214142)

薏苡仁，又名薏仁、米仁, 具有具健脾渗湿，除痹止泻，清热排脓之功效[1]。

薏苡仁也是一种药食同源的食品，深受消费者的喜爱。现代药理学研究表明薏苡仁中的甘油三油酸酯等甘油三酯成分具有抗肿瘤活性，并把甘油三油酸酯含量作为评价薏苡仁质量的重要指标[2]。甘油三酯是一类非极性化合物且紫外吸收较弱，其含量检测以高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)技术为主[3-7]。但蒸发光检测器存在响应与物质浓度线性关系较差、易受环境温度影响等缺陷[8]。电雾检测器(Charged aerosol detector ,CAD)是近年来发展的一种新型通用检测器,具有灵敏度高、线性关系好的特点，适用于皂苷类、糖类、生物碱类、脂类等无紫外吸收或弱紫外吸收成分的分析与检测[9-12]。王莉等分别用ELSD检测器和CAD检测器分析了人参中三萜类皂苷化合物，结果表明CAD检测器的灵敏度和重现性都优于ELSD检测器[13]。白长财等运用HPLC-CAD建立了三七药材的指纹图谱，并与ELSD和UVD两种检测器进行了比较，结果显示CAD检测器具有较为平稳的基线和较高的灵敏度，更加适用于含有较弱或无紫外吸收成分药材的指纹图谱分析[14]。应用HPLC-CAD技术检测甘油三酯类物质的研究尚处于起步阶段，相关报道还很少。本研究旨在以甘油三油酸酯为目标物，建立薏苡仁中甘油三酯类物质的高效液相色谱电喷雾检测器测定方法，为薏苡仁的功效成分分析和质量控制提供有效的技术手段。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Ultimate 3000型高效液相色谱仪，美国赛默飞世尔公司；Corona VEO RS型CAD检测器，美国赛默飞世尔公司； ME204E型电子天平，瑞士梅特勒公司；乙腈、二氯甲烷均为色谱纯，购于上海安谱实验科技股份有限公司；甘油三油酸酯标准品，纯度98%，购于上海安谱实验科技股份有限公司；薏苡仁样品，均购自本地超市；中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件 (2.0版)，国家药典委员会。

1.2 方法

1.2.1色谱条件

色谱柱：Acclaim 120 C18(250×4.6 mm，5 μm)；流动相∶乙腈-二氯甲烷(70∶30，v/v)；柱温30 ℃；流速0.6 mL/min；检测器采集频率10 Hz；检测器雾化温度35 ℃；进样量5 μL；洗脱时间30 min。

1.2.2标准物质的制备

将20 mg甘油三油酸酯标准品至于25 mL容量瓶中，加入乙腈定容至刻度，得到浓度0.8 mg/mL的标准储备液。

1.2.3样品的制备

薏苡仁样品10 g，粉碎，过40目筛。准确称取粉碎样品0.6 g，置于磨口圆底烧瓶中, 加入流动相50 mL，称定重量，回流提取30 min。冷却至室温，称重，用流动相补足损失的重量，摇匀，滤纸过滤。收集滤液过微孔滤膜(0.45 μm)，待上机。

1.2.4标准曲线的绘制

取适量标准储备液，用流动相配制成浓度为0.06、0.16、0.20、0.30和0.40 mg/mL的系列标准工作溶液，上机测定。以进样浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线。

1.2.5精密度试验

将薏苡仁样品按照1.2.3的方法进行制备，重复进样6次，以峰面积的响应值，计算精密度。

1.2.6样品检测和相似度评价

从超市购买6个不同品牌的薏苡仁样品，分别编号S1、S2、S3、S4、S5、S6。按照上述方法制备、上机。测定不同样品中甘油三油酸酯的含量。将6个样品的色谱图导入国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统 (2.0版) ”软件, 对不同品牌薏苡仁的甘油三酯图谱进行相似度评价。

2 结果与讨论

2.1 定量检测结果

图1为高效液相色谱-电喷雾检测器法检测甘油三油酸酯标准品的色谱图(浓度0.1 mg/mL)。图1所示，甘油三油酸酯在16.4左右出峰，峰型左右对称、基线平滑。

图1 甘油三油酸酯高效液相色谱电喷雾检测器色谱图

2.2 标准曲线

甘油三油酸酯在0.06～0.4 mg/mL范围内，线性关系良好，相关系数R = 0.998 6，校准曲线方程为 y=0.782 6x +2.571 6。

2.3 精密度

HPLC-CAD法检测甘油三油酸酯精密度测试结果见表1。如表1所示，峰面积响应值的相对标准偏差(RSD)为1.26%。

表1 精密度测定结果

2.4 实际样品的检测

图2为薏苡仁样品色谱图。由图2可见，薏苡仁样品中含有个甘油三酯组分。在试验条件下，各组分实现了基线分离，甘油三油酸酯的保留时间与标准品的保留试验吻合，邻近无重叠峰的干扰，易于定性、定量。S1～S6号样品的甘油三油酸酯含量检测结果见表2。结果显示，6种薏苡仁样品的甘油三油酸酯含量范围在0.824%～0.995%之间。

图2 样品中甘油三酯的色谱图

表2 实际样品含量测定结果

2.5 指纹图谱相似度比较结果

将样品编号S1～S6的HPLC图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统 (2.0版)软件，软件根据各图谱的共有峰，生成了对照指纹图谱R(见图3)。再将S1～S6号样品与对照指纹图谱匹配进行相似度比较，比较结果见表3。如表3所示，S1～S6号样品与对照指纹图谱的相似度分别为0.999、0.995、0.993、0.999、0.999、0.999，与对照图谱的相似度均≥0.99，说明各样品质量具有较好一致性。

图3 6种薏苡仁样品指纹图谱

表3 薏苡仁指纹图谱相似度评价

3 结论

建立了高效液相色谱-电喷雾检测器(HPLC-CAD)检测薏苡仁样品中甘油三油酸酯的方法。方法简便、高效，重现性好。将该方法应用于薏苡仁中甘油三酯成分指纹图谱的相似性分析，可有效识别不同样品间的质量差异。