Th1/Th2型细胞因子在HARRT免疫重建炎性综合征中的分析*

薛 冰,闫 慧,景博琼

新疆医科大学第五附属医院检验科,新疆乌鲁木齐 830011

高效抗逆转录病毒治疗(HAART)是目前治疗人类免疫缺陷病毒(HIV)慢性感染和获得性免疫缺陷综合征(AIDS)最主要的手段，该疗法在一定程度上能够实现HIV和AIDS的免疫重建，延缓 HIV感染的疾病进程，提高AIDS患者的生活质量，延长其生命。但是有部分患者在HAART治疗过程中，多数在抗病毒治疗后3个月至6个月期间，对感染性致病源或非感染性致病源出现过度的炎性反应,导致临床症状加重,表现为原本已有效治疗的机会性感染恶化、出现新发感染等,称为免疫重建炎性综合征(IRIS)[1],本研究通过对HIV新发现且尚未治疗者和既往感染并已规范启动HARRT者(按有无发生IRIS进行分组)进行血清Th1型细胞因子白细胞介素(IL)-2、γ-干扰素(IFN-γ)和Th2型细胞因子IL-4、IL-10以及外周血中CD4+T细胞数量的测定，分析了Th1和Th2细胞因子在HARRT治疗中和治疗后发生IRIS时的变化特点。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2017年6月至2018年12月在新疆医科大学第五附属医院艾滋病自愿咨询检测(VCT)门诊就诊的HIV携带者或AIDS患者共69例。将其中23例新确诊患者纳入HIV新确诊组，该组中男17例、女6例，年龄30～60岁，平均(45.24±15.31)岁。既往已确诊并启用HARRT治疗46例，选择治疗方案为齐多夫定(AZT)+拉米夫定(3TC)+奈韦拉平(NVP)和AZT+3TC+依非韦伦(EFV)。将其中22例治疗后出现IRIS患者纳入IRIS组，该组中男16例、女6例；年龄27～53岁，平均(39.12±13.35)岁；将24例治疗后未出现IRIS患者纳入非IRIS组，其中男18例、女6例；年龄25～60岁，平均(42.66±17.81)岁。将研究期间来本院进行健康体检的24例健康体检者纳入健康对照组，其中男14例、女10例，年龄23～48岁，平均(35.32±12.81)岁。各组间性别比例及年龄比较，差异无统计学意义，具有可比性。

1.2纳入标准 AIDS 诊断标准均符合中华人民共和国国家标准HIV/AIDS诊断标准及处理原则(2002)。HARRT后IRIS的诊断符合抗逆转录病毒治疗后出现免疫反应，CD4+T细胞计数基线上升，患者出现的症状不能用药物毒性作用、不良反应或耐药性等原因解释。本研究中IRIS组的临床感染类型包括结核杆菌感染12例，单纯疱疹2例，带状疱疹3例，乙型肝炎2例，梅毒3例。

1.3样本采集 每位受试者分别抽取肘静脉采血，乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝管采集2 mL，用于外周血CD4+T细胞计数，标本采集后4 h内完成检测；另一管无添加剂，用于细胞因子检测，标本采集后2 h内分离血清，并储存在-70 ℃的低温冰箱中，全部样本收集完成后统一检测。

1.4检测方法

1.4.1细胞因子 使用武汉博士德生物工程有限公司生产的人IL-2、人IL-4、人IL-10、人IFN-γ双抗体夹心酶联免疫试剂盒测定细胞因子，奥地利赛默飞MK-Ⅱ酶标仪比色分析结果。

1.4.2CD4+T细胞计数 采用BD FACS Count流式细胞仪及配套试剂盒检测。

2 结 果

2.1HIV新确诊组和健康对照组血清细胞因子水平和外周血CD4+T细胞数量比较 HIV新确诊组外周血的IL-2、IFN-γ、CD4+T细胞数量明显低于健康对照组，IL-4、IL-10明显高于健康对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2IRIS组和非IRIS组血清细胞因子水平和外周血CD4+T细胞数的比较 IRIS组外周血CD4+T细胞数明显低于非IRIS组，差异有统计学意义(P<0.05)。IRIS组IL-2、IFN-γ明显低于非IRIS组，IL-4、IL-10明显高于非IRIS组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表1 HIV新确诊组和健康对照组血清细胞因子水平和CD4+T细胞数的比较

表2 IRIS组和非IRIS组血清细胞因子水平和CD4+T细胞数比较

3 讨 论

CD4是HIV糖蛋白的特异性受体，因此HIV主要感染CD4+T细胞，此外还能感染巨噬细胞，树突细胞、B细胞、脑小胶质细胞及EB病毒转化的B淋巴母细胞等。巨噬细胞及DC细胞可以产生IL-1，IL-12，它们可以促使CD4+T细胞成熟，CD4+T细胞计数能够反映人体的免疫功能，HIV感染人体后，除了会引起外周血CD4+T细胞数量的减少，还会导致细胞功能紊乱和细胞因子分泌异常而进一步影响免疫功能[3]。成熟的CD4+T细胞根据其生成细胞因子的不同，可分为Th1型细胞和Th2型细胞。Th1型细胞分泌的细胞因子IL-2及IFN-γ能够阻止细胞凋亡，而Th2型细胞分泌的细胞因子IL-4及IL-10可促进细胞凋亡[4]。

HARRT通常依据患者CD4+T淋巴细胞计数和病毒载量启动治疗，通常为CD4+T淋巴细胞计数<200/μL ，但越来越多的研究显示，越早开始HARRT，启动治疗时基线的CD4+T淋巴细胞计数越高，越有可能将CD4+T淋巴细胞计数维持在正常水平[5]。根据本文结果分析，即使CD4+T细胞没有降低至需要治疗的数量，Th1型和Th2型细胞因子水平与健康人相比也已开始发生变化，提示一旦机体受到HIV感染，除CD4+T细胞会受到病毒的持续攻击之外，细胞免疫功能也会受到影响，表现为Th1/Th2型细胞因子稳态的变化。2016年美国卫生与人类服务部(DHHS)正式提出只要HIV检测呈阳性，即不论 CD4+T 淋巴细胞计数为多少，都应尽早进行HARRT[6]。经过HARRT治疗，大多数人的免疫功能都会恢复，但是约20%的人可出现IRIS[7]，这可能是因为随着抗病毒治疗后免疫功能的恢复，免疫系统功能增强，对先前潜伏感染的反应增加，使原来已被控制的感染加重或恶化。IRIS多出现在抗病毒治疗后3个月至6个月之间,常见的IRIS临床类型有结核及非结核分枝杆菌感染、疱疹病毒及深部真菌如隐球菌感染等[8-9]。

细胞因子通过影响细胞免疫和体液免疫反应的程度，影响HIV的复制，诱导感染者出现症状，其关系复杂，本文也显示在HIV感染早期即可出现细胞因子失衡的情况[10]，如促进细胞免疫功能的IL-2、IFN-γ的水平明显低于健康对照组，证明在发生IRIS时机体的细胞免疫功能极度低下，大量参与细胞免疫的细胞因子被耗竭，弱化了其抗感染的能力，正常情况下IFN-γ可诱导Th0型细胞向Th1亚群分化，而低水平的IFN-γ表达也会减少Th1生成，导致CD4+T细胞免疫功能进一步减弱；IL-4则促进Th2活化，活化的Th2细胞分泌IL-4、IL-10等，同时HIV也可刺激外周血单个核细胞产生 IL-10，而IL-10抑制Th1细胞的活化和增殖，而Th1细胞产生的IL-2，可增强活化诱导的细胞死亡(AICD)效应[11-12]。

根据本研究，笔者认为HIV一经确诊，就应该对感染者进行抗病毒治疗，有利于维持CD4+T细胞数量，使其保持在较高水平，保持细胞因子稳态，更好地发挥抗病毒、抗感染的免疫作用，此外，虽然HARRT治疗过程中会发生IRIS或者有耐药现象产生，但是HARRT仍是治疗HIV/AIDS最好的临床方法，本文通过分析新确诊HIV感染者和HARRT治疗后有无发生IRIS患者血清中Th1/Th2型细胞因子水平变化，为今后使用细胞因子治疗HIV提供了理论支持[13]。